CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在CD46途径下诱导IL-10生成的研究

目的：炎症抑制因子IL—10在过敏及自身免疫性疾病的发生过程中有着重要意义,补体调节蛋白CD46作为一种新的T细胞活化辅助因子可以诱导CD4^＋T细胞生成IL-10。另外有研究表明,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD^4＋CD25^＋Tregs）作为一种重要的免疫抑制细胞可以通过促进周围细胞分泌IL-10,使其抑制作用得到放大。本研究探讨在CD46辅助刺激途径下,CD4^＋CD25^＋Tregs诱导周围CD4^＋CD25^＋T细胞产生IL-10的能力。方法：分离纯化CD4^＋CD25^＋Tregs和CD4^＋CD25^＋T细胞,采用CD3／CD46或CD3／CD28刺激,分别进行单独培养或按1：10的比例共培养,同时以CD4^＋T细胞组作为比较。用氚标记胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定细胞增殖速率,ELISA方法测定各培养组上清IL10的水平。结果：在CD46或CD28刺激下,CD4^＋CD25^＋Tregs／CIM＋CD25^＋T细胞共培养组、CD4^＋T细胞组的几-10水平均显著高于CD4^＋CD25^＋T细胞单独培养组。在CD46刺激下,CD4^＋CD25^＋T细胞组、CD4^＋CD25^＋Tregs／CD4^＋CD25^＋T细胞共培养组、CD4^＋T细胞组IL-10的水平均较CD28刺激下明显增高,各组细胞的增殖能力均较CD28刺激下显著降低。结论：在cD46或CD28刺激下,CD4^＋CD25^＋Tregs均能够诱导CD4^＋CD25^＋T细胞分泌IL-10,CD46作为一种新的T细胞共刺激分子,与传统的CD28分子相比,能够刺激IL-10分泌增加。本文阐述了CD46途径下CD4^＋CD25^＋Tregs诱生IL-10的功能,进一步研究CD46途径下各类免疫细胞的活化反应,对于明确此途径下免疫细胞的功能改变与某些疾病发病机制的关系具有重要意义。     

口服卡介菌诱导免疫耐受的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞机制研究

目的：研究口服卡介菌诱导免疫耐受对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响。方法：采用口服MPB制备EAE大鼠模型,随机分为BCG组（0.5mg/kg）和EAE模型组（PBS）,每组各15只,连续经口灌服给药14d,同时选取15只健康大鼠作为对照组。分别于免疫后15d、27d流式细胞术检测外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率,ELISA检测血清IL-6、TGF-β、IgE、IgG含量。结果：与EAE模型组相比,免疫后BCG组大鼠外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率增加,血清IL-6、TGF-β含量上升,血清IgE、IgG抗体水平下降。结论：口服BCG通过上调淋巴器官中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞比例,抑制效应性T细胞活性,发挥免疫耐受作用。     

雷公藤甲素对哮喘豚鼠外周血CD4^＋和CD8^＋淋巴细胞的影响

探讨雷公藤甲素在治疗哮喘中对外周血T淋巴细胞的影响机制,采用免疫细胞化学方法检测30例豚鼠外周血淋巴细胞CD4^ 、CD8^＋的表达。实验动物分为对照组、哮喘组和雷公藤甲素治疗组（治疗组）,每组各10只。结果表明,治疗组CD4^ 淋巴细胞表达阳性率及表达强度明显低于哮喘组（P＜0.01）,CD8^ 阳性率高于哮喘组（P＜0.05）,与对照组比较差异无显性,本研究认为,雷公藤甲素可能通过增高哮喘豚鼠CD8^ 淋巴细胞,降低CD4^ 淋巴细胞来发挥抗哮喘气道炎症作用。     

CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞的体外扩增及其在移植物抗宿主病中的应用

同种异基因造血干细胞移植是急、慢性白血病及其他恶性血液病重要的治疗方法,但急慢性移植物抗宿主病（graft—versus-host disease,GVHD）作为异基因造血干细胞移植的主要并发症严重影响移植患者的存活率,阻碍移植的临床推广。很多研究发现,高表达Foxp3的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）不仅能控制急慢性GVHD的发生,而且不影响移植物抗白血病效应（graft-versusleukemia,GVL）,在急慢性GVHD发生发展及治疗方面有重要的作用。但Treg细胞在体内的数量很少,不能满足临床应用需求。目前应用外源的IL-2联合TCR、CD28信号通路共同刺激以及运用树突状细胞（dendritic cell,DC）刺激均能达到体外有效扩增Treg细胞的目的。这些扩增的Treg细胞在控制造血干细胞移植过程中急慢性GVHD的发生及防治自身免疫性疾病和移植排斥等方面具有明显作用,在疾病控制和临床应用中具有广阔前景。     

不同电镜分型女性生殖道尖锐湿疣的CD4^＋、CD8^＋的表达

目的：探讨不同电镜分型的女性生殖道尖锐湿疣（CA）的免疫应答状态的异同。方法：将随机抽取的50例女性生殖道尖锐湿疣的活检组织按照扫描电镜和透射电镜下形态学特征分为尖锐型湿疣、结节型湿疣和内生型湿疣三组。以免疫组织化学方法（IHC）研究CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值于不同电镜分型CA中的表达。结果：结节型湿疣的CD4^＋T细胞数及CD4^＋／CD8^＋比值均显著低于尖锐型湿疣,内生型湿疣介于二者之间。结论：CD4^＋／CD8^＋比值在不同类型CA中的表达结果有统计学差异,结节型湿疣免疫应答状态异常,预示三种电镜分型的尖锐湿疣转归不同。CD4^＋／CD8^＋比值可作为判断预后的指标。     

CD4+CD25+调节性T细胞

调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)是机体维持自身耐受的重要组成部分。CD4^ CD25^ Treg细胞来源于胸腺,其主要功能是抑制自身反应性T细胞,并且其作用是通过直接的Treg-T效应细胞之间的相互接触方式来实现的。CD4^ CD25^ Treg细胞可分泌多种抑制性细胞因子,但与其抑制功能关系并不明确,目前有证据表明GITR和Foxp3与CD4^ CD25^ Treg细胞的抑制功能有关,并且Foxp3已作为CD4^ CD25^ Treg细胞的特异性标志。通过IL-10、TGF-β等抑制性细胞因子、imDC以及转基因技术可以产生具有免疫抑制功能的调节性T细胞。调节性T细胞在免疫相关性疾病、肿瘤免疫和抗感染免疫等方面具有重要意义。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞免疫抑制功能的影响

目的探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）免疫抑制功能的影响。方法采用酚水法提取Pg ATCC 33277株脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）。免疫磁珠法分离BALB／c小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Tregs并进行体外培养,同时给予不同剂量（0～500ng／ml）Pg—LPS干预,培养48h后收集细胞及上清液。Real-TimePCR法测定培养细胞Foxp3mRNA的表达,ELISA法分别测定细胞上清液中IL-10、TGF-β水平;采用体外淋巴细胞混合培养法对Pg-LPS干预后的CD4^＋CD25^＋Tregs进行功能抑制试验。结果Pg-LPS干预不影响CD4^＋CD25^＋Tregs分泌IL-10和TGF-β,但是能够显著上调CD4^＋CD25^＋TregsFoxp3mRNA的表达,增强其免疫抑制作用;当Ps—LPS浓度低于300ng／m1时,CD4^＋CD25^＋TregsFoxp3mRNA表达以及免疫抑制作用的增强与Ps—LPS浓度之间呈剂量-效应关系。结论Pg-LPS能够增强CD4^＋CD25^＋Tregs的免疫抑制作用,这种免疫抑制增强效应可能与CD4^＋CD25^＋Tregs Foxp3基因表达的上调有关,并且不具有抑制性细胞因子依赖性。     

CD40L启动CD4^＋T细胞缺乏小鼠免疫反应的研究

随着HIV感染者及各类医疗措施导致的免疫受损者的增多,探讨一种适合免疫缺陷人群的预防机会感染的策略越来越受到重视。研究表明,CD4^＋T细胞是抵抗肺孢子菌等机会感染的最主要因素,但不是唯一的因素。其中CD40配体（CD40L）被认为是一种可以启动B细胞和CD8^＋T细胞反应的关键因子。为探讨CD4^＋L是否能在缺乏CD4^＋T细胞的小鼠体内启动免疫反应,本文研究了用卵白蛋白（OVA）作为模型抗原,联合应用CD40L引起的免疫反应。结果显示,同时应用OVA和CD40L,可使CD4^＋T细胞耗竭小鼠体内抗OVA IgG抗体和抗原特异性IFN明显增多,提示在CD4^＋T细胞缺乏的宿主体内,CIMOL可以启动B细胞和CD8^＋T细胞类免疫反应。该结果为抗肺孢子菌等机会性感染的免疫预防研究提供可贵的资料。     

β-ME和BHA体外诱导入胎肝CD34^＋细胞向神经组织细胞分化研究

目的：建立巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)和丁羟回醚(butylated hydroxyanisole,BHA)体外诱导入胎肝(fetal liver,FL)干细胞向神经细胞分化模型。方法：采用MACS试剂盒分离人胚胎肝CD34^ 细胞,以DMEM 10％胎牛血清培养液培养;第五代细胞待细胞融合达80％后,用DMEM 10％胎牛血清 1mmol／Lβ-ME 0．2mmol／L BHA诱导24h,PBS洗涤。然后在无血清培养基中培养5h～5d。用免疫细胞化学方法分析诱导前后的细胞表型特点。结果：经β-ME BHA诱导处理后,细胞表现神经元样细胞形态,表达神经组织细胞特异蛋白,如neustin、NeuN、NF-M、TuJ-1和NSE。统计显示81％细胞NeuN染色阳性,75％细胞TuJ-1染色阳性,47％染色NF-M阳性,90％染色NSE阳性。结论：β-ME和BHA能够诱导体外培养的人FL CD34^ 细胞分化为具有神经细胞特异性抗原和成分的神经样细胞;胚胎肝细胞具有向神经组织分化的潜能。     

低氧对CD34^＋造血干／祖细胞增殖分化及其对细胞因子依赖性的影响

To elucidate the effects of hypoxia on the proliferation and differentiation of CD34(+) hematopoietic stem/progenitor cells and their response to cytokines, the cells were isolated from umbilical cord blood by using a high-gradient magnetic cell sorting system (MACS). Mononuclear cells (MNC) and CD34(+) cells were incubated in severe hypoxia (1% oxygen) culture system, and the colony forming cells and antigen expression were studied by colony forming assays and FACS analysis. The results showed that incubation in severe hypoxia increased the number of erythroid bursts (BFU-E) (324.8+/-41.4/10(4) cells) generated from CD34(+) cells (191.2+/-34.5/10(4) cells in the control group, P<0.01). Severe hypoxia also enhanced the maintenance and cloning efficiency of BFU-E in a liquid culture system without growth factors, the number of BFU-E (152.4+/-22.6/10(4)cells) was much bigger than that in the control group (74.2+/-9.3/10(4) cells, P<0.01). In cultures incubated in hypoxia, the percentage of CD34(+) cells was significantly higher (2.5+/-1.2-fold, P<0.05) than in those incubated in air. BFU-E cloning efficiency of MNC was not significantly affected by hypoxia. The above results show that hypoxia enhances the maintenance of erythroid progenitor cells generated from CD34(+) hematopoietic stem/progenitor cells, no matter growth factors are present or not. These positive effects of hypoxia did not occur for the other progenitors.     

CD8＋CD122＋T细胞在脑缺血过程中作用的研究

目的：探讨CD8＋CD122＋T细胞在脑缺血过程中的作用及其机制。方法：线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）;激光共聚焦显微镜检测小鼠脑缺血组织中CD8＋CD122＋T细胞浸润情况;流式细胞仪检测脑缺血组织中CD8＋CD122＋T细胞／CD3＋T细胞的比例及脾和胸腺中CD8＋CD12TT细胞数量变化;RT—PCR方法检测CD8＋CD122＋T细胞对氧糖剥夺（Oxygen—glucosedeprivation,OGD）条件下星形胶质细胞表达TNF-α,IL-1β,IFN-γ的影响。结果：各时间点脑缺血组织中均有CD8＋CD122＋T胞浸润,且随脑缺血时间延长,缺血侧脑组织中CD8＋CD122＋T细胞／CD3＋T细胞比例逐渐增加,5d和7d组差异显著,与非缺血侧相比,P5d〈0．05,P7d〈0．05;MCAO小鼠脾及胸腺中CD8＋CD122＋T细胞呈现先增高后降低的趋势。星形胶质细胞经OGD处理后,与对照组相比,IFN-γ、TNF-α、IL—1β表达显著增高,PIFN-γ〈0．01、PTNF-α〈0．001、PIL-1β〈0．01;CD122-blocked组与CD8＋组相比,IFN-γ、TNF-α、IL-1β表达明显增高,PIFN-γ〈0．05、PINF-α〈0．05、PIL-1β〈0．01;CD8＋组与HBSS组相比,IFN-γ表达降低,P〈0．05;IL-1β表达有降低的趋势。结论：CD8＋CD122可细胞在脑缺血过程中发挥保护性作用,其保护作用通过CD122抑制星形胶质细胞TNF-α,IL-1β,IFN-γ炎症因子表达实现的。     

青藤碱对人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖和细胞内Ca^2＋浓度影响的体外研究

目的探讨青藤碱（SIN）对人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖和细胞内Ca^2＋浓度的体外影响及其效应机制。方法建立体外人外周血CD4^＋T淋巴细胞模型,分别作以下处理：（1）空白对照组;（2）环孢素（CsA）组（50ng／m1）;（3）低浓度SIN组（10μmol／1）;（4）中浓度SIN组（200μmol／1）;（5）高浓度SIN组（1000μmol／1）。分别用MTT比色法和流式细胞术（FCM）检测CD4^＋细胞增殖和细胞内Ca^2＋荧光强度。采用方差分析比较各组间差异的统计学意义。结果（1）高浓度SIN组、中浓度SIN组与其他各组细胞增殖抑制率存在差异（F=1444．228,P=0．000）;（2）FCM检测细胞内Ca^2＋浓度结果：中浓度SIN组、高浓度SIN组与其他各组差异有统计学意义（F=479．055,P=0．000）;（3）经SIN处理后,人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖抑制率和细胞内Ca^2＋浓度之间存在负相关r=-0．836,P=0．005）。结论SIN能浓度依赖性地抑制人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖和细胞内Ca^2＋浓度升高,人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖抑制率和细胞内Ca^2＋浓度之间存在显著性负相关。     

CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞与黑龙江省HIV／AIDS患者病情相关性的研究

目的：比较黑龙江省H1V／AIDS患者与健康对照者（healthy controls,HCs）外周血cD4＋CD25＋F0xP3＋调节性T细胞数量、免疫抑制功能的变化,探讨CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞在HIV／AIDS感染过程中的作用。方法：采用流式细胞仪检测21例HIV／AIDS患者及20例健康对照组的外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞数量的百分比及绝对数量;采用共同培养方法检测HIV／AIDS患者外周血cD4℃D25十FoxP3＋调节性T细胞免疫抑制功能的变化;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-FQ-PCR）检测HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞中FoxP3mRNA的表达。结果：黑龙江省HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25下oxP3＋调节性T细胞比率明显高于HCs（P〈O．01）,而CD4-CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的绝对计数显著下降,且与CD4＋T细胞绝对计数成反比;混合淋巴细胞共同培养结果显示,HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的抑制功能无明显变化;HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的FoxP3mRNA相对表达量无显著变化。结论：黑龙江省HIV／AIDS患者cD4℃D25＋FoxP3＋调节性T细胞的数量变化与病情相关。