不同载体上微量接触类检材的相关问题探究

手部接触类生物物证是目前案件中的主要生物物证,但关于此类物证在不同载体上DNA的检出量和检验效果、最佳前处理方法以及检材放置不同时间后的检出量和检验效果的变化尚无详细研究报道。通过制备手部接触类生物检材,分别使用直接剪取法、胶带粘取法、两步擦拭法和真空吸取法对检材进行前处理,然后进行DNA提取,用筛选出的最佳前处理方法处理放置不同时间段的检材,均使用常规程序对检材进行DNA提取、定量和复合扩增,并对各项结果进行分析和讨论。实验观察到总体上使用直接剪取法进行前处理的检材提取到的DNA的量大于使用两步擦拭法和真空吸取法进行前处理提取到的DNA的量,且这4种前处理方法在不同载体的检材之间提取到的DNA量有差异;随着时间的推移,在放置360 d内的DNA检出量和检验效果无较大差异。由此得出,不同载体上DNA的检出量和检验效果有差异,针对不同载体,其最佳前处理方法也不同;检材常温干燥放置一年内,其DNA无明显降解。     

不同方法提取生物检材DNA的比较研究

目的:比较有机法、chelex100法和硅珠法提取不同检材DNA的优劣,从而为各类检材的DNA提取提供参考。方法:用有机法、chlex100法和SiO2法分别提取2组共24份生物检材DNA进行扩增检验,比较分析结果。结果:对不同生物检材的DNA检验,有机法、chlex100法和SiO2法各有其优势和局限性。结论:针对不同检材采用不同提取方法,可以有效节约检验时间,提高检验成功率。     

Y-STR技术在疑难精斑检验中的运用初探

精斑是强奸、猥亵等案件中常见的生物检材,通过检出精斑DNA从而认定犯罪嫌疑人已经成为侦破该类案件的最直接、最高效的手段。本文通过两起强奸案件中的精斑检材采用常规检验方法与一部消化提取法并Y-STR检验技术进行结果比较,对如何提高强奸案中疑难检材的检出率进行探讨。     

西北汉族人群D10S1248、D2S441、D1S1677、D9S1122、D10S1435等5个miniSTR基因座的遗传多态性及其法医学应用

为了调查D10S1248、D2S441、D1S1677、D9S1122、D10S1435等5个miniSTR(mini short tandem repeats)基因座在西北汉族人群中的遗传多态性、遗传稳定性及其在陈旧降解检材中的法医学应用价值, 文章采用荧光PCR和基因分型技术对西北汉族154份无关个体血样、10个家系血液样本及10份陈旧降解检材进行片段长度分析。在西北汉族人群中, 5个miniSTR基因座分别检测出了8、7、7、6、7个等位基因, 等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律, 杂合度(Heterozygosity, H)为0.662~0.792, 个人识别率(Power of discrimination, PD)为0.869~0.915, 非父排除率(Power of exclusion, PE)为0.382~0.585, 多态信息含量(Polymorphism informa-tion content, PIC)为0.650~0.750。家系和陈旧降解检材的研究表明, 5个miniSTR基因座具有高度的遗传稳定性, 可对陈旧降解检材DNA进行有效的分型。5个miniSTR基因座适合作为西北汉族人群的遗传标记, 用于陈旧降解检材的法医学个人识别和亲权鉴定案件中。     

二代测序技术在疑难生物检材法医DNA检验的研究进展

测序技术的不断发展使二代测序技术在测序通量提高和读长增加的同时,成本也大幅度降低。目前二代测序技术已广泛应用于生命科学各领域研究中,并且也逐渐受到法医学者的关注。文中主要阐述了二代测序技术在法医学实践中常见的微量、降解及混合等疑难生物检材DNA检验中的研究进展,对其未来的发展进行了展望,并提出了可能面临的挑战。     

不同接触DNA检材提取纯化方法在法医学中的应用价值比较

比较不同DNA检材的提纯方法,便于法医的实际应用选择。采集饮用过的饮料瓶或矿泉水瓶、废弃的烟蒂、使用过的手套口罩及衣物各90份,随机分为Chelex组、磁珠组和有机组,各组检材分别使用相应的方法进行DNA的提纯,对提纯后三组检材的DNA提取液的STR分型、DNA提取量与紫外线分光光度计下OD值水平进行比较。由磁珠法提纯得到的DNA超过9个基因座的例数最多;提取量与DNA提取纯度显著优于其他二组,差异具有统计学意义(p0.05)。对于微量接触或污染严重的检材,可使用DNA IQ磁珠法进行提纯,可优化DNA的提取纯度,利于法医工作的进行。     

磁珠法在微量检材DNA提取中的应用

目的:研究磁珠法提取微量生物检材DNA物质的可行性。方法:对汗斑、微量唾液斑、指甲这3类微量生物检材采用磁珠法提取DNA,经过STR荧光复合扩增,ABI310测序仪检测,进行STR分型,以检测提取方法的灵敏度。结果:这3类微量生物检材获得了完整的STR分型。结论:磁珠法提取微量检材中DNA物质的效果较好。     

微量DNA检材检验方法初探

在实际案件中,口罩、饮料吸管、咬痕、剃须刀、烟蒂、手套、袜子、帽子、衬衣衣领及袖口、指环、手表、手机等都是微量DNA检材的常见载体。本文通过采用不同的提取处理方法,研究微量DNA检材分析的有效方法。     

基于PLP-LDR-HRCA策略进行微量DNA分析——rs17750303位点分型

增强PCR和全基因组扩增是当前微量DNA分析的主要策略,但是,由于DNA模板量过少,受随机效应影响显著,往往不能得到可靠的DNA分型结果.本文提出一种新的检验策略:PLP-LDR-HRCA,尝试微量DNA检材的SNPs分型研究.选择rs17750303位点,并设计等位基因特异性锁式探针,采用连接酶检测反应来识别等位基因,而后采用超分支滚环扩增反应来放大检测信号.结果表明,PLP-LDR-HRCA反应特异性好,灵敏度高,能够直接鉴别微量基因组DNA模板中待测SNP位点,rs17750303纯合型样品(AA型或CC型)和杂合型样品(AC型)准确分型所需最少模板量分别为20pg和30pg.对于增强PCR和全基因组扩增技术不能有效检验的微量检材,PLP-LDR-PCR策略独具优势,可能具有较大的开发价值.     

全基因组扩增技术及其在法医个体识别中的应用

全基因组扩增(Whole genome amplification,WGA)技术是一种对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术。近几年来,对WGA技术扩增痕量DNA检材的研究日渐深入,这些研究可望用于刑案现场采集到的痕量DNA样品的扩增,为法医个体识别提供足量的DNA模板。然而,对实际案件中复杂检材的扩增偏差问题一直困扰着法医工作者,寻求一个低扩增偏差、高扩增产率的WGA技术是法医工作者的主要目标。文章综述了WGA技术在法医个体识别中的研究进展及应用前景,为法医解决扩增偏差问题提供参考。     

中国汉族人群66个InDel基因座的遗传多态性

插入/缺失多态性(insertion/deletion polymorphism,InDel)遗传标记是一类由DNA片段的插入或者缺失形成的变异形式,在降解检材身份识别领域展现出优势.本文从dbSNP数据库中自主筛选66个InDel基因座,基于高通量测序系统建立了一套多重复合扩增体系(66-plex InDels).通...     

血清中提取DNA进行个人身份识别鉴定

在法医物证学实际案例中,最常见的生物检材是全血、人体组织、毛发、口腔脱落上皮细胞(口腔拭子)等,传统认为血清中没有DNA存在,不能作为法医生物检材应用于法医学实践。本文应用微量的人体血清进行了成功的DNA分型检测,有效的进行了个人身份的识别。现报道如下:     

法医遗传学研究和鉴定中的伦理问题

法医遗传学主要以人体生物检材为对象,通过检测遗传信息解决与法律相关的生物检材鉴识问题,为侦查提供线索,为审判提供证据,往往涉及到众多伦理问题。本文提出伦理学在法医遗传学研究和鉴定中的应用基本原则,并对检材/样本收集、法医DNA表型分析、法医遗传系谱学分析、法医DNA数据库建设和应用、亲子鉴定和亲缘鉴定、法医遗传学科研数据交流和共享等方面涉及的伦理问题进行了分析,提示法医遗传学从业人员在研究和鉴定中要充分考虑伦理问题,建议有关部门制定法医遗传学具体的伦理要求,建立伦理审查制度,加强从业人员伦理学培训。     

接触DNA常规提取纯化方法的比较探讨

接触DNA的提取纯化是法医物证工作的重点和难点之一。接触性检材上的脱落细胞本就量小体微,所以运用有效的方法对这些潜在的微量脱落细胞中的DNA进行提取纯化就显得十分重要。文章拟对接触DNA的常规提取纯化方法及影响因素进行简要阐述,并对其进行横向的比较探讨,以期得出最有效的接触DNA提取纯化方法。     

典型樱亚属植物基因组DNA改良提取方法研究

本实验在传统的CTAB法及试剂盒法的基础上,利用DNA提取缓冲液作为样品预处理液,配合其他操作步骤的优化,设计出针对樱亚属植物基因组DNA的新型提取方法,并对提取的DNA进行ISSR-PCR分子标记实验以检验其质量。实验结果表明,改进后的CTAB法及试剂盒法均能有效地去除样品中含有的多糖、色素、黄酮等杂质,而试剂盒法提取的DNA纯度和质量总体而言高于CTAB法。ISSR-PCR结果显示,两条引物对样品DNA均能进行有效扩增,并且扩增条带清晰,无明显降解。改良后的两种方法能高效高质量地提取樱亚属植物DNA,并且具有较高的通用性,可以运用于其他物种DNA的提取工作中。     

一株基因克隆干扰菌的鉴定及其发酵液降解DNA活性分析

旨在寻找导致基因克隆失败的原因,检测整个电泳环境中是否存在对DNA有强降解力的菌株。依据菌体形态,革兰氏反应以及16S rDNA序列对DNA降解菌株进行鉴定,琼脂糖凝胶电泳分析菌株对DNA的降解活性。结果显示,从DNA电泳槽中分离到了一株菌,革兰氏染色鉴定为阴性菌,对该菌进行液体培养,利用质粒pUC19作为底物,检测该菌发酵液对DNA的降解能力,发现该菌发酵液能够迅速并彻底地降解DNA,其最佳降解温度为45℃,将该菌命名为DD(DNA degrading)。对该菌的16S rDNA进行测序比对后,发现其与粘质沙雷氏菌(Serrtia marcescens)的16S rDNA序列同源性高达100%。结合菌体形态,革兰氏反应以及16S rDNA序列结果,DD菌株为一株粘质沙雷氏菌,DNA降解活性分析显示其具有很强的DNA降解能力。     

高效柴油降解菌Acinetobacter sp.W3分离鉴定及降解酶基因扩增分析

从柴油污染的海水样品中分离高效柴油降解细菌,分析菌株对柴油的降解能力及降解酶基因,为海洋柴油污染的生物修复奠定基础。选取浙江定海港柴油污染的海水样品,进行降解菌的富集培养;采用常规方法分离筛选高效柴油降解菌。利用革兰氏染色、形态学观察、生理生化鉴定及16S rDNA分析等方法对降解菌株进行种属鉴定。采用紫外吸收法测定菌株对柴油的降解率。采用PCR方法、核酸序列测定和比对,对其降解酶基因进行扩增分析。筛选出一株高效降解菌,形态学观察及生理生化鉴定初步确定为不动杆菌。16S rDNA序列分析及比对结果表明,其16S rDNA序列与威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)属的序列同源性达到99.7%,命名为不动杆菌W3(Acinetobactersp.W3),该菌对柴油的7 d降解率达到84.7%。PCR方法从Acinetobactersp.W3菌株中的基因组DNA和质粒DNA上扩增到了大小为540 bp的烷烃羟化酶基因alkB和864 bp的CYP153A部分DNA片段,分别与Acinetobacter venetianus1-D-2的alkB和Acinetobactersp.OC4、Acinetobactersp.EB104的CYP153具有99%和98%的同源性。从定海港口柴油污染海水分离得到一株高效柴油降解菌Acinetobactersp.W3,该菌属于不动杆菌属,含有烷烃降解酶基因,能高效降解柴油污染物,有望应用于海水柴油污染的生物修复。     

模拟沉积环境下的温度、湿度对叶片DNA降解的影响

为了探讨自然环境下生物体内DNA的降解,残存规律,设计了模拟特殊自然沉积环境的实验装置以控制温度、湿度和含氧水平,采用Brassica chinensis叶片作为实验材料,从实验装置中定期采集叶片组织进行总DNA的提取与检测,然后采用定量PCR方法,对目标DNA片段(28S rDNA,630bp)进行特异扩增,依据PCR反应的强弱,描绘目标DNA的变化曲线。共报道了8种不同模拟条件下的DNA降解(残存)趋势。实验结果如下：1)环境温度升高,DNA的降解速率增加,如温度从10℃上升到30℃,DNA的降解速率最大可增加近300倍。环境含水量增加可明显促进DNA的降解,在本实验中潮湿状态(浸没在水中)与干燥状态的叶片相比。其DNA的残存量在相同的实验时间内可相差近700倍。初步的实验结果表明,环境温度和湿度均是影响DNA降解的重要因素。     

杜仲次生木质部分化过程中的细胞编程死亡

通过电子显微镜观察、DNA断裂检测及类似半胱氨酸蛋白酶(caspase-like proteases,CLPs)降解检测等技术,对杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)次生木质部分化过程的细胞编程死亡进行了研究.分化中的次生木质部细胞总DNA凝胶电泳检测到DNA ladder,并通过TUNEL检测进一步确定了DNA被降解.Western blot结果表明;caspase-8和caspase-3状蛋白酶(caspase-8-和caspase-3-like proteases,CLPs)及多聚ADP-核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)在次生木质部分化过程中被降解.这些研究结果表明,杜仲次生木质部的细胞分化是一个典型的编程性死亡(Programmed cell death,PCD)过程,CLPs可能参与了此过程.     

正常人和SLE患者血清中抗DNA抗体的研究

用亲和层析法对6例正常人和4例SLE患者血清中抗DNA抗体进行提取和定量研究,发现正常人血清中抗DNA抗体的组成IgM/IgG大于1,是以IgM为主的抗体,SLE患者血清中抗DNA抗体含量高,IgM/IgG小于1,是以IgG为主的抗体。用胰蛋白酶降解提取的抗DNA抗体再借助于SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳对正常人和SLE患者抗DNA抗体的结构进行初步探讨,电泳结果表明正常人和SLE患者纯化抗DNA抗体经胰蛋白酶降解以后,正常人在52.2Kd区有一特异性降解片段,而SLE患者则在33.6Kd区有明显的降解片段富集,且表明它们是抗DNA—IgG所产生的。这说明SLE患者血清中抗DNA—IgG不仅在数量上比正常人有所增加,而且在结构上也有所不同。此外,这两种不同的抗DNA—IgG被胰蛋白酶降解的速度也有差异。