假单胞菌属细菌产酪氨酸酶的研究

<正> 酪氨酸酶能将L—酪氨酸催化合成L—3,4—二羟基苯丙氨酸,后者是预防、治疗帕金森氏综合症(Parkinsomis),例如:僵硬、震颤、流涎,丧失穿衣能力;CO中毒、锰中毒;肝昏迷的有效药物,还用于精神病的治疗。酪氨酸酶也可用于生产其它化、     

代谢过程中相关氨基酸对高密度发酵生产腺苷蛋氨酸的影响

对清酒酵母高密度发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸（SAM）代谢过程中的相关氨基酸进行了考察。分别考察了十二种氨基酸对生物量和SAM产量的影响。实验发现L-胱氨酸、L-半胱氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸和L-蛋氨酸对SAM的积累有利,其中L-赖氨酸和L-组氨酸可以提高生物量,进而提高SAM的产量;L-胱氨酸、L-半胱氨酸和L-蛋氨酸可以提高SAM的含量,但是会抑制生物量的增长。通过3种补加方式的比较,得到最优的补加方式为：L-赖氨酸和L-组氨酸在培养基中加入,L-胱氨酸,L-半胱氨酸和L-蛋氨酸采取在发酵过程前24h流加。通过正交实验确定补加量为：L-赖氨酸为1g／L,L-组氨酸为1g／L,L-胱氨酸为1．5g／L,L-半胱氨酸为1g／L,L-蛋氨酸为1g／L。将此结果应用于5L发酵罐培养,SAM最高产量为5．53g/L,生物量为128g／L。     

操纵子前导区的修饰及PRPP合成途径的加强对大肠杆菌积累L-组氨酸的影响

目的:基于转酮酶基因缺失菌株MG1655-ΔtktA,研究启动子替换L-组氨酸操纵子前导区及6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因zwf、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因gnd、PRPP合成酶基因prs的过表达对大肠杆菌产L-组氨酸的影响。方法:通过Red重组系统用T5启动子替换L-组氨酸操纵子前导区;构建gnd和zwf串联表达载体gnd-zwf-pSTV28,prs表达载体prs-pQE30。通过摇瓶发酵,考察上述改造对大肠杆菌积累L-组氨酸的影响。结果:测定结果显示,改造菌株的发酵液中均能实现L-组氨酸积累,平均分别为MG1655-ΔtktA-PT5,60.12 mg/L;MG1655-ΔtktA-PT5(prs-pQE30),66.47mg/L;MG1655-ΔtktA-PT5(zwf-gnd-pSTV28),89.69 mg/L;MG1655-ΔtktA-PT5(prs-pQE30,zwf-gnd-pSTV28),111.56 mg/L。结论:L-组氨酸操纵子前导区的修饰使菌株合成L-组氨酸的能力大大增强,而氧化戊糖磷酸途径的加强和PRPP合成酶活性的提高能够进一步提高产量。     

半胱胺耗竭体内生长抑素及其机制

半胱胺,又称β巯基乙胺,相当于半胺氨酸的脱羧产物,是辅酶A分子的组成部分,在体内有重要的生理意义。临床上用于治疗放射病、胱氨酸病、扑热息痛中毒和四乙基铅中毒。Selye等发现半胱胺可诱发大鼠十二指肠溃疡。在研究其致溃疡机制过程中,Szabo     

协同刺激分子与疾病

在T细胞表面受体中,除TCR外,协同刺激分子在调节T细胞的免疫反应中起关键性作用,目前较熟悉的协同刺激分子及其配体有：CD40／CD40L、B7—1／B7-2-CD28／CTLA-4、ICOS—B7RP-1。最近人们又发现了CD2-LFA3、CD5-CD5L、4—1BB／4—1BBL、HAS等新的协同刺激分子组合,它们在器官移植、肿瘤治疗、自身免疫病的治疗方面有重要作用;在基础研究中则可用于T细胞与B细胞分化、活化机制、抗原递呈、协同刺激机制、免疫耐受、移植排异反应和自体免疫等的研究。     

L-组氨酸高产菌株的选育

为得到L-组氨酸的高产菌株,以谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）S9114为出发菌株,利用亚硝基胍（NTG）和硫酸二乙酯（DES）进行多次诱变,在D-组氨酸的抗性梯度平板上挑取正突变株,发酵检测,最终挑出一株S6（D—his＇）,可积累L-组氨酸327mg／L,比出发菌株提高47.3％。     

葡萄糖酸钙对L-组氨酸发酵的影响及条件优化

目的：提高L-组氨酸的产量并且得出最佳发酵条件。方法：在L-组氨酸的摇瓶发酵实验中,加入20g/L的葡萄糖酸钙,对发酵条件进行优化。结果：L-组氨酸的产量大幅度提高,产酸量由3.00g/L提高到7.50g/L。条件优化后L-组氨酸的产量提高到9.30g/L。结论：发酵培养基中20g/L的葡萄糖酸钙的加入能够诱导葡萄糖酸激酶生成,大幅度提高其比活,增大磷酸戊糖（HMP）途径的通量。有利于L-组氨酸的合成、菌体的生长。     

临床试验中的生物技术产品

Magainin Pharmaceuticals Inc.(Plymouth Meeting,PA)已开始对其 MSI-78(一种广谱型热带抗细菌及抗真菌药物)进行第一期临床试验。这种药可用于治疗脓疱病、糖尿病溃疡和其它严重的感染症。     

组氨酸在代谢中的作用

组氨酸是含有异吡唑环的氨基酸,是机体蛋白质的构成氨基酸,也是一些功能蛋白质(如组蛋白、血红蛋白)的主要组成氨基酸。组氨酸残基及异吡唑环是一些酶蛋白(如二氢叶酸还原酶、过氧化物歧化酶)和功能蛋白质(如血红蛋白)的功能部位或功能基团。组氨酸是天然螯合剂,许多含锌的金属酶(如羧基肽酶等)其功能性锌原子与活性中心的组氨酸残基相结合;自由组氨酸、由组氨酸构成的小肽以及组氨酸脱去羧基生成的组胺等都具有特殊的生理功能,所以组氨酸在代谢中起重要作用。食物中组氨酸含量影响体内组氨酸水平;药用组氨酸(组氨酸作为药物治疗某些疾病及氨基酸输液等)用量不当也影响体内组氨酸水平,能影响某些代谢,甚至发生疾病。     

L—谷氨酰胺高产菌株的选育

本文着重介绍了以野生型谷氨酸产生菌ATCC14067为亲株,经过亚硝基胍处理,筛选对磺胺胍具有抗性的突变株,再经过生长试验及稳定性试验,最后选育出两株稳定性好、付产物谷氨酸少的L—谷氨酰胺高产菌株。 L—谷氨酰胺(L—2—氨基戊二酸—酰胺)是L-谷氨酸的r-羧基酰胺化,在医药上是一种极有价值的氨基酸。自1952年用X光衍射确定了其分子结构后,对它的应用日益引起人们的关注。目前国外临床上主要用于治疗精神萎靡、酒精中毒及胃和十二指肠溃疡等疾病;它又是合成脑功能改善药N—乙酰谷酰胺的重要中间物。从谷氨酸产生菌的野生型菌株ATCC14067通过改变发酵条件直接发酵生产L-谷氨酰胺,我们以前曾有过报导。我们通过诱变选育到两株对磺胺胍具有抗性的变异株。变异株的谷氨酰胺产量提高,发酵付产品谷氨酸的量也有减少,为以后提取分离提供了方便。     

rLj-RGD3全RGD缺失基因重组突变体——rLj-112的分子克隆及其广谱抑真菌活性

Lj-112是日本七鳃鳗RGD毒素蛋白野生型Lj-RGD3的RGD全缺失基因突变体,其一级结构具有富组氨酸的特点．富组氨酸糖蛋白具有抑菌功能．为了研究Lj-112是否具有抑菌作用,使用基因合成和原核表达的方法,获得了纯化重组蛋白rLj-112,将其对不同菌种进行抑菌试验.结果表明,以野生型rLj-RGD3、RGD模体与组氨酸全缺失突变体rLj-26为对照,rLj-112有较广谱的抑菌活性,其中对白念球菌的最低抑菌浓度（MIC）为7 μmol/L,对稻瘟病菌的MIC值为7.5 μmol/L,对毛癣菌和禾谷病菌的MIC值分别为11.9 μmol/L和29.9 μmol/L．可见,rLj-112能作为抗真菌药物候选,为提高农作物的生产质量和减轻人类感染疾病的用药压力奠定了基础．     

分离组胺类物质的实验简报

<正> L—组氨酸盐酸盐是配制复合氨基酸注射液的原料药之一,由于它和组胺类物质的分子结构相似,理化性质相近,在生产中不易分离。而组胺类物质超过规定含量,注射后,会导致病人血压下降,不合格的组氨酸成品不、能配制注射液,本文介绍了我厂从西德进口的一批不合格品处理工艺的实验结果,方法简单,成本低,总收率达95%以上。     

重组人红细胞生成素新制剂及其稳定性研究

确定一种新的重组人红细胞生成素 (rHuEPO)保护剂 ,避免使用人血白蛋白 (HumanAlbumin ,HSA)造成一些潜在的血源性污染问题。设立对照组和实验组 ,对照组以HSA作保护剂 ,实验组为rHuEPO溶液中加入不同浓度的Tween80和L 组氨酸盐酸盐 ,分别存放不同时间 ,不同温度和湿度条件下测定rHuEPO的体内活性。通过对实验数据进行统计学处理 ,分析 2组配方是否存在差异。在P =0 .0 5水平 ,Tween80浓度在 0 .0 8‰以上 ;L 组氨酸盐酸盐浓度在 1‰以上实验组与对照组无显著差异。说明Tween80和L 组氨酸盐酸盐可以代替HSA作为rHuE PO的保护剂。     

人中性粒细胞与淋巴细胞化学发光反应的比较

研究人中性粒细胞化学发光(PMNCL)反应与淋巴细胞化学发光(LY—CL)反应的差别。结果表明,刀豆蛋白A、植物血凝素,葡萄球菌蛋白A和(?)理酵母多糖刺激后,PMN—CL纯峰值高于LY—CL 3—10倍,而(?)抗(?)IgG刺激后,LY—CL的峰值则稍高于OMN—CL。氧自由基清除剂作用于PMN—CL和LY—CL反应的结果表明,L—组氨酸均明显抑制PMN—CL和LY—CL反应;苯甲酸钠和甘露醇抑制LY—CL反应的抑制率(IR)明显高于PMN—CL;而超氧化物歧化酶和过氧化氢酶抑制LY—CL的IR明显低于PMN—CL。结果提示,PMN—CL和LY—CL反应在CL形成的分子机制上并不完全相同。     

48例消化性溃疡患者幽门螺杆菌的耐药性调查

对幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori ,Hp)临床分离株进行药物敏感性试验及耐药性分析 ,为探求幽门螺杆菌感染的根除疗法提供依据。运用微需氧培养方法 ,从胃镜活检标本中分离幽门螺杆菌 ,利用琼脂稀释法测定幽门螺杆菌对抗生素的敏感性试验 ,将 2 1株Hp临床分离株进行 7种抗菌药物的敏感性及耐药性调查。从 4 8例消化性溃疡患者胃镜活检标本中分离出 2 1株幽门螺杆菌。 2 1株幽门螺杆菌对阿莫西林MIC范围 0 .5～ 8mg/L ,无耐药菌株 ;克拉霉素、替硝唑的MIC范围分别为 0 .12 5～ 0 .5mg/L和 4～ 8mg/L ,耐药率均为 4 .76 % ;四环素、利福平的MIC范围分别为 0 .5～ 1mg/L和 1～ 6 4mg/L ,耐药率分别为 4 .76 % ,9.5 2 % ;甲硝唑的MIC为 16～ 12 8mg/L ,红霉素的MIC为 0 .5～ 12 8mg/L ,耐药率较高 ,分别为 2 3.89%和5 7.15 %。此次分离的Hp对阿莫西林、克拉霉素、替硝唑有较高的敏感性 ;而对甲硝唑及红霉素耐药率高 ,应避免应用 ;阿莫西林、克拉霉素可作为本地区治疗Hp感染的主要药物 ;四环素、利福平可用于一线治疗失败后二线治疗 ;替硝唑可替代甲硝唑用于Hp的根除治疗。     

组氨酸含量测定方法探讨

<正> 前言Pauly反应又叫偶氮反应(Ehrlich反应),在氨基酸合成、发酵和分离纯化的研究中常用于组氨酸定性检测。但未见用于定量的报道。本文作者进行了多次反复实验,对该反应的试剂种类、用量及反应条件进行了摸索和改进。成功地摸索出单组份组氨酸含量测定方法。该方法准确可靠、简便易行。因此,为组氨酸含量测定、纯度检查及柱层析洗脱峰的确定提供了方便。     

柠檬酸钠对L-组氨酸发酵代谢流分布的影响

目的：建立谷氨酸棒杆菌TL1105生物合成L-组氨酸的代谢网络模型,并进行代谢网络计量分析。方法：通过所构建的L-组氨酸代谢网络模型,利用MATLAB软件计算出添加柠檬酸钠和不添加柠檬酸钠发酵中后期代谢网络的代谢流分布。结果：在L-组氨酸分批发酵过程中,在发酵初期未添加柠檬酸钠的条件下流向戊糖磷酸途径（HMP）的代谢流为9.59,合成组氨酸的代谢流为8.91;在发酵初期添加2g/L柠檬酸钠的条件下流向HMP的代谢流为12.74,合成组氨酸的代谢流为9.61。结论：在发酵初期添加柠檬酸钠能够改变L-组氨酸生物合成途径的关键节点6-磷酸葡萄糖、丙酮酸及乙酰辅酶A的代谢流分布,保持糖酵解途径、三羧酸循环与HMP之间代谢流量平衡,有利于提高L-组氨酸生物合成途径的代谢流量,最终使流向组氨酸的代谢流增加了7.86%。     

JAK1/2抑制剂芦可替尼对中性粒细胞生存及免疫功能的影响

芦可替尼是一种免疫抑制剂,最早被用于治疗骨髓纤维化相关疾病,近期,又被临床上用于抑制急性移植物抗宿主病、新型冠状肺炎中的细胞因子风暴的发生。该文将深入探究芦可替尼对中性粒细胞存活及炎症因子分泌等免疫学功能的影响。研究中设溶剂对照组、0.1 μmol/L芦可替尼处理组、1 μmol/L芦可替尼处理组和5 μmol/L芦可替尼处理组。Percoll法分离的小鼠骨髓中性粒细胞,经芦可替尼处理0 h、24 h、48 h、72 h后通过流式细胞术分析小鼠骨髓中性粒细胞纯度及凋亡情况;经芦可替尼处理1 h后,通过免疫荧光法检测中性粒细胞吞噬酵母聚糖颗粒的能力,TAXIScan-FL趋化仪检测中性粒细胞趋向fMLP的迁移能力,涂布平板法检测中性粒细胞杀伤大肠杆菌的能力;经芦可替尼处理24 h后,ELISA、qPCR法检测经LPS(1 μg/mL)预处理和活化的中性粒细胞产生细胞因子的能力。结果表明,0.1 μmol/L、1 μmol/L、5 μmol/L芦可替尼处理中性粒细胞24 h后,中性粒细胞的早期凋亡加速(P<0.05),吞噬指数增强(P<0.05),趋化能力和杀菌能力与对照组相比...     

用黄色短杆菌ATCC 14067生产L—谷氨酰胺的培养基选择

<正> L—谷氨酰胺是L—谷氨酸的γ—羧基酰胺化,其分子式为H_2NCO·CH_2·CH_2·CH(NH_2)·COOH。熔点185℃～186℃。[(?)]_D~(20)=+31°～+33°,它作为药物,可以用来治疗神经薄弱,胃和十二指肠溃疡等疾病,疗效明显。我们用谷氨酸产生菌ATCC 14067,通过改变发酵条件,使谷氨酸发酵转向谷氨酰胺发酵。我们对发酵培养基作了选择,玉米浆、生物素、铵盐、尿素以及金属离子对菌体的生长     

紫外线与亚硝酸钠复合诱变选育L-组氨酸产生菌

以1株谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)S_6作为出发菌株,利用亚硝酸钠(NaNO_2)、紫外线(UV)进行诱变,通过实验证明亚硝酸钠诱变时间在180 s后致死率达到80%,紫外线在照射30 s后致死率达到80%。诱变后的突变菌株经6-巯基嘌呤结构类似物的抗性平板筛选,最终筛得3株菌,Y_1产L-组氨酸量达到331 mg/L,比出发菌株S_6高了5.08%,Z_2产L-组氨酸量达到325 mg/L,比出发菌株S_6高了1.9%,F_6产L-组氨酸量达到330 mg/L,比出发菌株S_6高了7.14%。结果显示,经紫外线与亚硝酸钠复合诱变后的菌株F_6产L-组氨酸的产量最高,比亚硝酸钠诱变后的菌株产L-组氨酸量提高2.06%,比紫外线诱变后的菌株产L-组氨酸量提高5.24%。