在组织切片中肥大细胞的证明及迅速记数的简单方法

肥大细胞的选择性染色法如下:1)薄片新鲜组织(3—5毫米厚)于下液固定18—24小时,但标本置于此液至少一周尚无显明害处。配法:福尔马林液10毫升;95%酒精90毫升;醋酸钙1克。2)组织以95%酒精洗2次,每次1小时。3)以常法制做石蜡切片(8—12微米厚),粘片,脱蜡,经纯酒精至95%酒精。4)在室温于下液内染1小时。配法:甲苯胺蓝(toluidine blue)0.25克;70%酒精100毫升;浓盐酸     

DNA重组技术(Ⅰ) 小量快速提取质粒DNA方法

质粒DNA的提取是最基础的DNA重组技术。国内外已经发展了许多方法用于批量提取质粒DNA。这些方法都可以获得满意的效果。这里介绍两种小量快速提取质粒DNA的方法,可用于重组子筛选及酶切分析。 (一)碱裂解法 1.将过夜培养的菌液1.5ml转移到小离心管内,15.000r/min离心30sec,弃去上清,将离心管倒置尽量除去培养液。 2.将沉淀的菌体再悬于100ml冰冷的溶液A中(50mM葡萄糖,25mM Tris pH8.0,10mM EDTA),不必要加入溶菌酶。 3.向A液中加入新配制的溶液B200μl(0.2N NaOH,1％SDS),迅速倒置几次,混合两溶液,放在冰浴上3—5分钟。 4.再加入150μl溶液C(5M醋酸钠60ml,冰醋酸11.5ml,蒸馏水28.5ml)混均后冰浴3～5分钟。     

应用~3H-胸腺嘧啶核苷测定血淋巴细胞转化的方法

本文介绍了应用微量血液测定DNA合成的方法:0.1毫升肝素抗凝血液灌入3毫升含PHA的Fagle’s生长培养液中,培养54小时后注入~3H-TdR 0.6微居里,再培养16小时,吸弃上清液,沉淀用生理盐水洗涤两次,5％三氯醋酸洗一次。然后沉淀加0.5毫升5％三氯醋酸置90℃水浴15分钟,离心后吸取上清液0.2毫升加到5毫升闪烁液中进行测量。闪烁液配方:PPO 3克,POPOP 0.4萘克、110克、二氧六环1000毫升。10例健康人血平均~3H-TdR掺入率为10.8％。     

制备酵母菌实验材料的简易方法

笔者在实验中发现了以下制备酵母菌实验材料的简易方法。1　实验器材1 .1　药品 :玉米粉、琼脂、蔗糖和酵母粉。1 .2　器材 :小三角烧瓶 (带棉塞 )、烧杯、漏斗和电炉。1 .3　仪器 :培养箱、高压灭菌锅。2　操作步骤1 )先将三角烧瓶 (带棉塞 )、漏斗用报纸包好 ,然后进行高压灭菌 (1 2 1℃维持 2 0～ 3 0min)。2 )配制玉米粉培养基 ,方法如下 :A .蔗糖 1 3g +琼脂 1 .5g+水 80mL ,倒入大烧杯中煮沸 ,使琼脂溶解。B .玉米粉 1 7g+水 80mL倒入另一烧杯中调匀。当A中的琼脂溶解后 ,将B倒入A中 ,煮沸后移去电炉。待稍冷却后往培养基中加入 1 …     

实验3 RNA的分离纯化

一、哺乳类细胞总RNA的提取 1.从培养细胞中提取 (1)准备10瓶(底面积为4.5×8.5cm~2)长得半满的培养细胞(约10~7个细胞)。 (2)吸去瓶中培养液,各加入5ml新鲜培养液,37℃培养4小时左右。 (3)吸去培养液,各加入5ml预冷的1×PBS溶液     

氨基酸的简易制备方法

1　目的　学习从人的头发中制备氨基酸的原理和方法 ,验证细胞和生物体中含有氨基酸。2　原理　在氨基酸溶液中 ,当ｐＨ达到氨基酸的等电点时 ,氨基酸的溶解度最低 ,析出结晶。3　材料、用具、试剂　人的头发、烧杯 ( 1 0 0ｍｌ)、石棉网、玻璃棒、三角架、漏斗、定性滤纸、精密 ｐＨ试纸、表面皿、活性碳、浓盐酸、氨水、铁架台。4　方法、步骤、结果1 )制备氨基酸溶液 :将 1 0 0 ｇ人的头发放入烧杯(甲 ) ,加入 50ｍｌ浓盐酸。　　 2 )将装有毛发和浓盐酸的甲烧杯置于垫有石棉网的三角架上 ,用酒精灯加热 ,同时用玻璃棒搅拌 ,至毛发全部溶…     

马氏钳蝎毒对大鼠神经和骨胳肌的作用

本工作在大鼠膈神经膈肌标本上观察马氏钳蝎(Buthus marensi Karsch)毒对神经、肌肉和神经肌肉接头传递的作用,结果如下:1.在蝎毒(3×10~(-5)g/ml)作用下,由吸附电极引导的膈神经单相动作电位的下降相逐渐延长,形成平台,3小时后电位时程可达100ms 以上。2.蝎毒(5×10~(-7)—6×10~(-5)g/ml)显著改变肌纤维动作电位的波形,降低肌细胞的静息膜电位。如用6×10~(-5)g/ml 浓度蝎毒处理膈肌,半小时内即可使肌纤维动作电位下降相大大延长,形成平台。一小时后膜电位由对照的78±4mV 降低至59±13mV,2小时后至55±8mV(平均值±S.D.)。3.河豚毒(3μM)可使被蝎毒降低了的肌细胞膜电位迅速复原,但随着时间的延续还可以再出现缓慢的轻度下降。4.在河豚毒(3μM)使肌细胞动作电位消失后,向溶液中加入蝎毒,半小时后将二者一并洗去,重新出现的动作电位亦带有明显的平台。5.在接头传递已被高 Mg~(++)或筒箭毒碱阻遏的标本上加蝎毒后,单个间接刺激可诱发出一串终板电位,甚至引起肌肉收缩。6.蝎毒(1×10~(-5)g/ml)明显增加小终板电位的发放频率,作用1小时后其频率可高达每秒100次以上。7.肌肉对间接刺激的收缩反应在加入蝎毒后首先增大,然后逐渐下降,在1×10~(-5)g/ml 浓度蝎毒作用下1.5—2小时传递阻遏,此时肌肉对直接刺激     

大熊猫骨胳标本的制作

最近,我们应聘制作成功一具大熊猫骨骼标本。使用方法节省费用,简便易行。我们认为这种制作法亦适用于跟大熊猫体型大小相近的其他兽类的制作。一、制作步骤(一)剔除肌肉采用水煮法,加入纯碱(Na_2CO_3)煮沸12小时左右。待尸骨熟透后,用钝器和毛刷剔尽肌肉,停留在碱液里继续脱脂三天。(二)漂白及脱脂1.转移到3%漂白粉[CaCOl_2]液中浸泡三昼夜,再用自来水反复漂洗后置于阳光下     

部分人体生理数据

1　细胞　成年人 ,整个身体总细胞数约为 1.8× 10 7亿个 ;水分 ,占体重 60 %。2　皮肤　表面积 1.4～ 1.6m2 ,占体重 16% ;汗孔 2 0 0万个 ;每平方厘米有痛点 10 0～ 2 0 0个 ,触点 2 5个 ,冷点12～ 13个 ,热点 1～ 2个 ;p H=5 .5 ,能再生。3　毛发　成人头发 8万～ 10万根 ,每天脱落 30～ 12 0根 ,每天生长 0 .4 mm,寿命 2～ 4年 ,每天分泌皮脂 15～4 0 g;指甲每天生长 0 .1mm,3～ 5个月更换一次。4　牙齿　由牙冠、牙颈、牙根三部分组成 ;有切牙 (门牙 )、尖牙 (犬齿 )、磨牙 (臼齿 ) 3种类型 ;人一生长 2次牙 ,乳牙 2 0颗 ,恒牙 2 8～ …     

鱼类染色体的观察

在早春到市场上买性成熟的活雄鲤一条,取其精巢(性腺已发育到第Ⅳ期),做染色体的观察。 1.固定将精巢放入Carnoy固定液(无水酒精3份,冰醋酸1份),固定3小时,再换入70％酒精中。 2.染色用镊子和解剖针仔细取出精巢内的精细小管(细如白发),一小段,放手掌上剔去周围异物之后,放置载玻片上,加醋酸洋红(45％醋酸100毫升加洋红1克煮沸、冷却、过滤即成),染色2-3小时。     

布鲁氏菌变态反应原的研究I.蛋白变应原的提取和检测

用粗糙型布鲁氏菌B115菌种制成浓菌液,丙酮脱水,高浓盐溶液处理,离心去渣,上清用酒精沉淀,制成粗提液;再过Sephadex G100柱,用致敏豚鼠证明第2峰液(P2)为特异性变应原。聚丙烯酰胺电泳测定为单一成份;用致敏豚鼠作皮肤试验,45小时P2组平均值为：14.7—23.2mm;布鲁氏菌素组为：7．5一12．2mm．用致敏家兔作皮肤试验,P,组为19.2—22.4mm,菌素组为0--16.8mm．初步证明P2具有较好的变态反应原性。     

蚯蚓中抗肿瘤蛋白组分的提取分离及其抗肿瘤活性

以赤子爱胜蚓为原料 ,通过蛋白质的丙酮沉淀和凝胶过滤 ,分离得到一组抗肿瘤活性蛋白成分 (简称蚯蚓抽提物 ) ;这组成分富含Fe、Zn、Cu以及Se等微量元素 ,蛋白含量为 6 0 4 3± 2 36 %(n =5 ) .体外实验中 ,通过MTT法和SRB法测定了蚯蚓抽提物对多种人癌细胞株 (HCT 116、SY5Y、K5 6 2、MGc80 3和HeLa)以及正常细胞株 (HEK2 93和COS 7)的抑制杀伤率 .结果表明 ,蚯蚓抽提物对癌细胞的杀伤有一定的选择性 ,受试人癌细胞达到 5 0 %生长抑制率所需作用浓度约 6 0～110mg L ;但是 ,10 0℃煮沸 5min后 ,该抑制活性完全消失 .通过纤维蛋白平板法 ,测得蚯蚓抽提物同时具有纤溶酶和纤溶酶原激活酶的活性 .体外测得丝氨酸蛋白酶抑制剂aprotinin和PMSF能显著抑制蚯蚓抽提物的细胞杀伤活性 .体内实验中 ,蚯蚓抽提物能有效延长荷瘤 (S180 )小鼠的生存时间 ,并使其身体机能得到明显改善 .腹膜内注射剂量为 2 8mg kg和 36mg kg时 ,生命延长率分别为135 3%和 12 3 5 % ,和标准药物 (环磷酰胺 )治疗后结果 (76 5 % )相比 ,有显著性差异     

对弹性组织的选择性染色 (俄西印——新复红法)

1)切片脱蜡,入100%酒精.2)以俄西印——新复红(orcinol-new fuchsin)液于37℃染15分钟。染液配法为:新复红(new fuchsin)(C.I.,No.678)2克俄西印(orcinol)4克蒸馏水 200毫升上液煮佛5分钟,加37.2%三氯化铁溶液(ferricchloride)25毫升,再煮5分钟,待凉,过滤,其沉淀收集于滤约上,并须洗净晾干,将沉淀溶于95%酒精100     

3-氰基吡啶水合酶的反应条件及影响因子

研究了芳腈水合酶催化水合3-氰基吡啶生成尼克酰胺的反应条件及影响因子.酶反应的最适pH为8.0,最适温度为25℃.酶在pH8.5于25℃保温4小时或在25—30℃于pH8.0保温3小时是稳定的.反应液中加入Fe~(3+)(1.5 mmol/L)可使酶活力增加 50%,而加入NH_4~+(300 mmol/L)则使酶活降低了67%.Ag~+和 Hg(2+)”强烈地抑制酶反应活性,在浓度均为 5mmol/L时,抑制率分别为99.7%和100%.NaCN(50 mmol/L)和苯甲腈(100 mmol/L)对酶活性的抑制率分别为78%和85%.该酶作用于 3-氰基吡啶的Km为62.5 mmol/L,V_(max)为85.8 μmol·min~(-1)·mg~(-1).     

菹草生产力的研究

本文报道了水温、光照度、水的pH值和植株密度对菹草生产力影响的实验结果,以及植株不同部位上的生产力和叶绿素含量的测定值.在光照度8000lx和水温20—28℃的条件下,经51次测定,菹草顶枝的毛产量(P_G)在0.80—1.06毫克氧·小时/0.5克鲜重植物范围,平均值为0.92毫克氧·小时/0.5克;净产量(PN)在0.44—0.79毫克氧·小时/0.5克范围,平均值为0.61毫克氧·小时/0.5克.1小时的平均净光合率为1.11%,1小时的平均呼吸率为0.53%.       

野生种菸草无菌株的原生质体游离培养技术的改进(英文)

以野生种菸草Nicotiana sylvestris(2n=24)和N. plumbaginifolia(2n=20)的无菌小植株为实验材料,比较了影响原生质体植板率的各种因素,改进了叶肉原生质体的游离和培养,使这两种野生菸草的原生质体植板率分别为40％和70％。使这两种菸草的原生质体培养系统可以用于细胞放射生物学的领域,例如研究突变效应。 对游离原生质体的方法作了改进,其主要优点是不需要撕表皮和离心。先在叶片的上表面轻轻地铺上金刚砂粉末,用刷子刷10—20秒,然后洗去粉末,在质壁分离剂中处理几小时,再在酶溶液里保温培养过夜(16小时),小心地吸去酶液后加入由0.5克分子浓度蔗糖和T_2无机盐组成的溶液,得到原生质体的悬浮液。再将悬浮液移入试管,在上面轻轻地加入培养基,沉淀1—2小时后从溶液界面或上层培养液中分离出原生质体,离心提纯并进行培养。 比较了供试材料的各种因素对原生质体植板率的影响。发现同种供试材料的基因型不同,植板率也有明显差异,因此实验前要筛选好的基因型;籽苗的嫩叶最适合原生质体的游离和培养,挑选2—3厘米长的幼叶为宜。因为这时细胞核有95％左右处于G_1期,并且不存在内多倍性;无菌小植株的培养器皿不要密封;供试材料的培养基中蔗糖浓度尽可能降低,5克/升可能是较好的;供试材料的培养以3,000 lux的低光     

草鱼、白鲢和花鲢的耗氧率

1.草鱼、白鲢、花鲢的鱼苗和第2年鱼,以及草鱼的第3年鱼在夏季水温下的耗氧率,均经连续至少7小时以上的测定。 体重0.4-1.7克的鱼苗,在28.5-31.7℃的水温中,平均耗氧率篇0.325-0.632毫克/克/小时;体重38.9-172.3克的第2年鱼,在26.3-30.6℃的水温中,平均耗氧率为0.161-0.264毫克/克/小时;体重1103-1355克的第3年鱼(草鱼)在水温21-23.5℃时,平均耗氧率为0.139-0.151毫克/克/小时。 2.耗氧率随体重的增加而减低;同种之内,小鱼的耗氧率较大鱼为高。 3.耗氧率随水温的上升而增加;花鲢在冬季的耗氧率不及夏季的1/6。 4.在体重和水温相仿的情形下,白鲢的耗氧率较花鲢为高,花鲢的耗氧率又较草鱼为高。     

克氏螯虾虾壳制备氨基葡萄糖盐酸盐的工艺研究

研究了以克氏螯虾壳为原料制备氨基葡萄糖盐酸盐 (GAH)的工艺条件 :酸水解液为 10mol·L-1HCl,85～ 92℃水解 5～ 6h ;甲壳素∶酸水解液为 3∶5。GAH产率为甲壳素的 5 2 %～ 5 5 %。GAH纯度 :99%～ 10 0 .5 %。     

红蛋的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　红蛋 (Echinodorusosiris)。2　材料类别　茎尖 (budofthestem)。3　培养条件　 ( 1 )诱导芽培养基 :1 / 3MS + 6 BA1 .0mg·L- 1 (单位下同 ) +IBA 0 .1 + 3%蔗糖(sugar) ;( 2 )增殖培养基 :MS + 6 BA 1 .0 +IBA0 .0 5 + 3%蔗糖 ;( 3)生根培养基 :1 / 2MS + 6 BA0 .0 5 +IBA 0 .7+ 2 .5 %蔗糖。上述培养基加入 5 .0 g·L- 1 倍力凝 (一种微生物多糖固化剂 ,河北科技大学生产 ) ,pH 5 .8。培养温度为 2 0～ 2 8℃ ,光照度为 1 5 0 0～ 2 0 0 0lx ,光照时间 1 0h·d- 1 。4　生长与分化情况4.1　无菌材料的处理　在超…     

绿色植物保存法的一点经验

在制作绿色植物浸渍标本时我们研究出下列方法可得满意的结果,兹介绍如后。保色液的配制:硫酸铜20克、浓盐酸2或3滴、水100毫升。将植物材料放入保色液中,如热至95℃左右,经半小时(视材料大小而略有增减)后,取出,在清水内充分洗净,然后放入5—10%福尔马林或70%酒精中保存即可。