生物传感器测定氨基酸

<正> 前言利用酶只与特定的基质反应的作用分析特定基质开始于40年代,最近进展到利用微生物起源的各种酶的分析法。用这种酶选择性地分析复杂有机化合物已是可能,但需要高价酶,需要反应、显色、测定吸光度等烦杂操作,时间较长,期望一种只要把pH类电     

生物传感器的展望

生物传感器是一个总称,实属酶工程的应用工学的一个范畴。它利用酶、微生物、抗原或抗体、动、植物组织经载体固定化后可编制成单个或一组识别单元,去识别出特定基质后所得信息,再通过转换器和电气化学装置进行组合,这就成为生物传感器。 例如,酶传感器是籍助独特机能一酶对底物的专一性。所以,反应液(或生产过程     

元宝枫叶蛋白酶的动力学特征

酶促动力学是研究酶促反应的速度及各种因素如底物浓度、酶浓度、抑制剂、激活剂、温度、pH等对酶促反应速度影响的科学,是酶学研究中重要的内容。在一定条件下,酶促反应都有其特定的动力学参数,如Km值（米氏常数）和Vmax值（最大反应速率）等。Km是反映酶动力学性质的重要特征性常数,对某一酶促反应而言,在一定条件下都有特定的Km值,可以用来鉴别酶。Km值还可以判断酶的专一性和天然底物,     

基因分型方法在细菌感染诊断中的应用:质粒分析和基因探针

<正>临床、专业和微生物研究实验室通常以表型特性对细菌病原进行鉴定,这些特性包括细菌形态、结构、酶的种类、基质反应和对抗生素的敏感性。另外,一些实验室还利用血清分型、噬菌体的测定或细菌素的敏感性或产生,偶而还用对组织培养或动物模型的致病性来鉴定。     

液态生产胞外漆酶大型真菌高产菌株筛选

依照真菌漆酶催化特定作用底物进行氧化还原反应结果的特性,设计了一个采用愈创木酚和α-萘酚作为酶反应显色判别依据和产酶菌株筛选的限制性驯化剂,同时结合选用木质素作为产酶诱导强化因子的筛选分析模版,对保藏和外购的常见大型担子菌和食用真菌进行产酶性能分析。结果发现,这些菌株均不能有效地生产漆酶或酶活性很低,以该模版作为初筛手段从杨树林等野生菌菇生长地中分离得到15株产酶野生微生物,经反复筛选得到3株酶活性较高的大型真菌株A21、X18和Y11,其胞外漆酶活力分别为255.9、248.7 和277.3 U·ml^-1,具有可观的产业化生产开发应用潜力。     

四季豆幼苗中尿囊酸酰胺水解酶的一些特性

酰脲代谢在许多固氮豆科植物氮素代谢中起重要作用;尿囊酸的酰胺水解酶(EC3.5.3.9)分解尿囊酸成为脲基乙醇酸和CO2、NH3,脲基乙醇酸的酰胺水解酶进一步分解脲基乙醇酸产生乙醛酸和CO2、NH3.该文首次报告测定四季豆尿囊酸降解酶(分解尿囊酸的酶)的方法,酶反应基质需要盐酸苯肼存在.在四季豆干种子、幼苗根、茎和叶,均可测出尿囊酸降解酶活力.从四季豆幼苗分离出两个尿囊酸降解酶.一个分子量大于200 kD,另一个分子量为13.5 kD;小分子量的尿囊酸降解酶(没有脲基乙醇酸酰胺水解酶或脲酶活力)用于性质研究.酶反应产物分析表明,该酶是尿囊酸的酰胺水解酶.该酶反应的最适pH为8.5.Mn2 是该酶的金属辅助因子.Km为76μmol/L,Vmax为16.7 nKat/mg(=1 002 nmol min1mg1).乙醛酸和乙醇酸抑制该酶活力.赖氨酸残基和色氨酸残基是酶活力的必需基团;巯基和酪氨酸残基不是酶活力的必需基团.     

对“唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”实验条件的初探

中学《生理卫生》教材安排的这项实验是验证唾液淀粉酶在温度37℃左右、中性溶液中将淀粉分解成麦芽糖。利用淀粉遇碘变成蓝色这一特定颜色,来观察酶促反应是否发生。如果淀粉被水解成麦芽糖,则加碘液无颜色反应;如果淀粉没有破水解,则加碘变成蓝色。由于教科书中实验指导部分没有明确指出使用哪类淀     

胸腺嘧啶新的生物合成路径

胸腺嘧啶是由胸苷酸合成酶合成的,这种酶催化“2’-脱氧尿苷-5＇-单磷酸盐”的尿嘧啶部分的甲基化。传统的胸苷酸合成酶,包括人体的这种酶,利用1个活性点氨基酸侧链在该反应的这一阶段激发基质。     

抗幽门弯曲菌单克隆抗体的制备

<正> 作者将培养出的幽门弯曲菌菌体用福尔马林灭活,分 4次注射到 6周龄BALB/c小鼠的腹腔内进行免疫。取脾细胞,同骨髓瘤细胞×63-Ag8.653进行细胞融合,获得杂交的细胞瘤。为筛选抗体和探讨其特定性,将幽门弯曲菌、空肠弯曲菌和大肠杆菌超声波破碎可溶性抗原,变成固体,用酶联免疫吸附测定法测异。再将幽门弯曲菌的可溶性抗原用10％SDS聚丙烯酸胺凝胶电泳,在硝化纤维素膜上转录,使其与各种单克隆抗体反应,充分洗净后,再与过氧化物酶标记的鼠免疫球蛋白抗体反应,然后以氯萘酚为基质染色鉴定。 结果:从100个克隆中筛选出与幽门弯曲菌呈强阳性反应的15种抗体产生克隆。再从这15种之中,挑选     

细胞代谢过程分析方法及模型优化

细胞代谢是一个复杂的生物化学反应体系 ,可以在不同的水平上进行调控 ,如控制酶数量的翻译水平调控和调节酶活性的反应水平调控。细胞代谢为了一系列的特定目标而趋于最优化状态 ,如减少能量生产、减少ＮＡＤＰ的合成、增强氧气输送等等[1] 。在漫长的生物进化过程中 ,细胞已达到了这样的最优化状态。然而在一定的介质和条件下 ,生化反应中的微生物并不能充分发挥其潜在的全部催化活性 ,这是由于野生菌株还未能适应其新的目标———根据人类需要最大化生产或选择性生产特定物质。代谢工程通常被认为是“提高细胞活性的工程” ,是利用基因工…     

细胞中蛋白质的合成和转运（一）

细胞的一切功能活动,都离不开蛋白质的参与,细胞中蛋白质的合成场所有两处：基质中和ＲＥＲ 上的多聚核糖体上。特定蛋白有特定的合成场所和转运方式,本文简要介绍了分泌蛋白、膜嵌入蛋白、溶酶体蛋白、亲核蛋白、过氧物酶体蛋白、叶绿体蛋白、线粒体蛋白的转运方式     

固定化光合细菌产氢过程的基质利用动力学

研究了固定化荚膜红假单胞菌386、红假单胞菌D两菌株产氢过程基质利用的动力学特性。基质利用与产氢过程以不同的速率进行．琼脂包埋固定化细胞的产氢能力高于海藻酸钙固定化细胞,但最大产氢活性的进程迟于后者。固定化D菌株利用葡萄糖的动力学遵循一级反应,其反应常数K值为1．2×10　2h-1。宏观动力学分析表明,利用基质的产氢过程属于反应控制,扩散传质过程不构成控速步骤。386和D两个菌株固定化细胞生物反应器连续产氢系统,在以乳酸作基质时．平均产氢量分别可达到0．659L／d和0．457L／d,容积(液相)产氢率接近1．OL／L·d。     

利用农业废弃物固态发酵裂褶菌F17产锰过氧化物酶的基质优化(英文)

锰过氧化物酶(MnP)在环保领域有着广阔的应用前景。目前,利用廉价基质生产MnP,尤其是利用工农业废弃物生产MnP的研究受到了国内外学者的广泛关注。本实验利用响应面方法从几种不同的农业废弃物中筛选裂褶菌F17(Schizophyllum sp.F17)产MnP的固态发酵基质。结果表明,以0.52∶0.15∶0.33的比例组成的松木屑、稻草和黄豆粉的混合基质为发酵产MnP的最佳基质,发酵第6天MnP的活力最高,达到11.18 U/g。因此,利用农业废弃物固态发酵产锰过氧化物酶在减低酶的成本和环境污染物治理方面具有重要的意义。     

与草菇原基形成相关的过氧化物酶基因VvDyP的结构与表达分析

DyP-type过氧化物酶作为氧化物酶家族中的一员,参与了菌体氧化应激调节反应以及基质降解等过程。本研究从草菇基因组中获得一个DyP-type 过氧化物酶的编码基因,将其命名为VvDyP。对该基因进行结构分析,结果显示草菇的DyP-type 过氧化物酶编码基因全长为 2 333bp,含有8个外显子,7个内含子;开放阅读框长为1 485bp,编码494个氨基酸。通过系统发育分析发现它与灰盖鬼伞以及糙皮侧耳DyP蛋白同源性最高;分析DyP-type 过氧化物酶编码基因在草菇各个时期的表达谱情况并进行荧光定量PCR实验验证发现,草菇的DyP-type过氧化物酶编码基因只在原基中高表达,推测DyP-type过氧化物酶编码基因可以清除过量的活性氧自由基以保证原基的正常形成。     

不同营养条件下斑玉蕈菌丝生长及产酶特性

分析测定了不同营养条件下斑玉蕈菌丝形态特征、生长速度及产酶规律。低碳氮盐培养基上菌丝生长速度最快,但其菌丝非常稀疏,边缘不整齐,在整个生长阶段酶活力(包括漆酶、锰过氧化物酶、木素过氧化物酶、木聚糖酶、纤维素酶)较低,营养不足对该菌菌丝生长速度影响不明显,但对菌丝形态和酶活有很大的影响;低氮条件下最先产生木质素过氧化物酶,说明限氮条件可以刺激木质素过氧化物酶的产生;高无机盐条件下最先产生漆酶和锰过氧化物酶,但菌丝生长速度较慢,酶活性比较低,浓度过高会影响菌丝生长。结果表明,不同的营养条件对斑玉蕈的菌丝生长及多种酶活性有很大影响,这为斑玉蕈改变营养条件调节菌丝生长速度、菌丝形态以及基质降解提供了理论依据,同时对斑玉蕈栽培过程中基质的高效利用、缩短生产周期、降低生产成本具有重要的指导意义。     

培养骨髓基质细胞的尿嘧啶核苷二磷酸半乳糖-4-表异构酶活性

本实验用液体静置法体外培养小鼠骨髓基质细胞。用细胞化学法观察处于不同分化阶段基质细胞中的尿嘧啶核苷二磷酸半乳糖－－４－表异构酶（Ｕｒｉｄｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇａｌａｃｔｏｓｅ－４－ｅｐｉｍｅｒａｓｅ,ＵＤＰＧａｌ,ＥＣ５．１．３．ａ）活性。结果在各类骨髓基质细胞中均可见到很强的酶反应。在由原始网状细胞向成熟星状细胞分化过程中,酶活性逐渐增强。随着培养时间和延长（培养５、７、１０天）,星状细胞和成纤维细胞中酶反应的阳性率和阳性度逐渐增高。这证明在体外培养骨髓基质细胞中由ＵＤＰＧａｌ催化的代谢非常活跃     

计算机重构石油烃降解的微生物代谢途径

目的:用计算机重构石油烃降解通路,为石油污染的生物修复提供理论依据。方法:利用KEGG反应、化合物数据提取反应等式,过滤掉所有反应中的通用化合物及小分子化合物并构建反应矩阵,然后利用广度优先搜索算法在反应矩阵中搜索降解石油烃的代谢途径。结果:计算机分别重构了256 132条链烷烃降解途径和44条环己烷降解途径,以酿酒酵母作为降解石油烃的基因工程菌为例,通过限制改构菌整合的关键酶数目,分别得到了213条不需要转入关键酶的链烷烃降解通路和6条以氧化还原酶、松柏醇脱氢酶或环己醇脱氢酶和环己酮单氧酶为关键酶的环己烷降解通路,并构建相应的降解网络图,标注每个反应的酶。结论:应用计算机重构了2种石油烃降解途径,可为利用微生物对石油污染进行生物修复提供理论依据。     

α-氯丙酸脱卤酶发酵动力学模型

对α-氯丙酸脱卤酶发酵动力学进行了研究。基于Logistic方程和Luedeking-Piret方程,得到了描述Pseudomonas W20菌发酵过程菌体生长、α-氯丙酸脱卤酶生成及基质消耗的动力学数学模型和模型参数,对试验数据与模型进行了验证比较,模型计算值与试验结果拟合良好,平均相对误差大部分小于10%;对脱卤酶反应动力学进行了研究,结果表明脱卤酶的脱卤反应基本符合米氏方程,并求得最大反应速率V_(max)=1.11×10~(-5)mol/(g·min),表观米氏常数K_m=3.72×10~(-3)mol/L。     

苯甘氨酸氨基转移酶基因hpgt的原核优化表达与酶动力学特性研究

苯甘氨酸氨基转移酶(4-Hydroxyphenylglycine aminotransferase)是假单胞菌所产生的一种能够合成D-苯甘氨酸的重要转氨酶。利用密码子优化技术,合成苯甘氨酸转移酶基因。构建原核重组质粒pCDF-hpgt,转入感受态细胞E.coli BL21(DE3),优化表达His-HpgT蛋白。利用Ni-NTA柱纯化技术获得高纯度的His-HpgT融合蛋白。分别测定融合蛋白在正反向反应中的酶活力单位及最佳的反应温度、pH值及其他动力学参数,并对该酶特性作相关的机理分析。测定结果表明,正向反应和反向反应的酶比活力分别为749mU/mg、2 257mU/mg,此酶分解苯甘氨酸的能力要强于合成苯甘氨酸;正向反应的最适温度与pH分别是35℃和8.0;由米氏方程得出该酶对苯甘氨酸的亲和力远大于谷氨酸;较低浓度的苯乙醛酸即可抑制反应的进行。     

用平板法检测产酶菌株

在微生物学理论和应用研究中,常常需要筛选产生或不再产生某种酶的菌株。平板培养基检测法在初筛菌株时较为简便和快速。近年来,除原有的透明圈法仍广为采用外,利用类似酶的组织化学定位的显色反应法在遗传育种工作中近来也采用得很多。还有一些利用酶促反应产物的特征,在平板上进行检测的方法。本文拟根据部分文献报道作一综合简介。