基于HIF-1α-iNOS信号通路探讨瑞舒伐他汀联合缺血后处理对糖尿病小鼠的心肌保护作用

摘要 目的：探讨瑞舒伐他汀联合缺血后处理对糖尿病小鼠心肌的作用并分析其保护作用的机制。方法：应用高脂高糖饮食的方法构建2型糖尿病小鼠动物模型,随机分为假手术组（sham组）、缺血/再灌注组(I/R组)、缺血后处理组（IpostC组）及瑞舒伐他汀联合缺血后处理组（RPO+IpostC组）,每组10只。分析各组小鼠低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达及血浆炎症因子、血清一氧化氮（NO）水平变化,观察各组小鼠心肌梗死面积、心肌组织HE染色结构变化。结果：与I/R组、IPostC组相比,RPO+IpostC组HIF-1α,iNOS蛋白表达显著上调（P<0.05）;与IpostC 组相比,RPO+ IpostC组小鼠血清NO和血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平均明显降低,血浆IL-10升高（P<0.05）;经显微镜观察显示,sham组小鼠的心肌细胞HE染色结构正常,RPO+IpostC组小鼠心肌细胞HE染色后损伤相对较小;与I/R组相比,IpostC组和RPO+IpostC组小鼠缺血面积（AAR/LV）、梗死面积（IRR/AAR）均明显减小,且RPO+IpostC组小鼠AAR/LV、IRR/AAR最小（P<0.05）。结论：瑞舒伐他汀联合缺血后处理可以通过对糖尿病小鼠HIF-1α-iNOS信号通路进行调节,进而上调HIF-1α、iNOS蛋白表达,减轻炎症反应,降低心肌细胞缺血再灌注损伤,保护心肌。     

MTA、iRoot BP Plus及氢氧化钙在年轻恒牙活髓切断术中临床疗效的比较分析

摘要 目的：研究三氧化矿物凝聚体（MTA）、iRoot BP Plus（iRooT）以及氢氧化钙（Ca(OH) ₂）三种材料在年轻恒牙活髓切断术中的临床疗效。方法：将60例需要接受年轻恒牙活髓切断术的患者（60颗患牙）按照使用材料不同随机分为三组：MTA组、iRooT组和Ca（OH）₂组,每组20例（20颗患牙）,比较三组患者术后3个月和6个月手术成功率、牙本质桥形成和牙齿变色发生率、牙根管壁厚度、牙齿功能和美观度、以及血清基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和白细胞介素-8（IL-8）水平。结果：（1）三组患者仅术后6个月临床治疗成功率存在显著差异（P<0.05）;（2）Ca（OH）₂组术后牙本质桥形成率显著低于其他两组（P<0.05）,而牙齿变色发生率显著低于MTA组（P<0.05）和显著高于iRooT组（P<0.05）。（3）三组患者治疗后牙根管壁厚度均较治疗前显著增加,且治疗后Ca（OH）₂组患牙根管壁厚度增加显著低于MTA组和iRooT组（P<0.05）。（4）Ca（OH）2组患者术后6个月牙齿舒适功能、固定功能和咀嚼功能评分均显著低于MTA组和iRooT组（P<0.05）,而牙齿美观度评分显著低于iRooT组（P<0.05）和显著高于MTA组（P<0.05）。（5）三组患者术后6个月血清MMP-3和IL-8均显著低于术前（P<0.05）,并且MTA组患者血清MMP-3和IL-8水平显著高于iRooT组（P<0.05）和显著低于CaOH组（P<0.05）。结论：iRoot BP Plus和MTA材料应用于年轻恒牙活髓切断术均具有较高的远期成功率,但MTA材料远期牙齿变色率较高因而影响牙齿美观度。     

SB239063通过抑制TNF-α和p38MAPK，减轻香烟烟雾暴露变应性鼻炎大鼠MKP-1的表达

摘要 目的：探讨p38MAPK抑制剂SB239063对香烟烟雾暴露变应性鼻炎大鼠p38MAPK信号通路、TNF-α、MKP-1表达的影响。方法：先构建变应性鼻炎（AR）大鼠模型,然后给予AR大鼠被动吸入香烟烟雾（CS）,再行腹腔注射AR大鼠SB239063（100 mg/kg）,分为AR组、AR+CS组、AR+CS+SB239063组。造模后对各组大鼠进行症状学评分;苏木精-伊红（HE）染色法观察大鼠鼻黏膜的形态学变化;实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测鼻黏膜p38MAPK、MKP-1 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)分析外周血、脾脏TNF-α的含量;Western blots检测鼻黏膜p38MAPK、p-p38MAPK、MKP-1蛋白的表达水平。结果：与AR组比较,AR+CS组大鼠的过敏症状（P<0.05）加重;鼻黏膜嗜酸性粒细胞（P<0.05）、中性粒细胞浸润（P<0.01）增多; MKP-1 mRNA及其蛋白的表达水平均升高（P<0.001）;外周血、脾脏TNF-α的表达水平升高（P<0.001）;p-p38MAPK蛋白的表达水平升高（P<0.001）。与AR+CS组比较,AR+CS+SB239063组大鼠过敏症状评分下降（P<0.01）;鼻黏膜中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞计数下降（P值均< 0.05）;p38MAPK mRNA的表达水平降低（P<0.05）,MKP-1 mRNA及其蛋白的表达水平下降（P<0.001）;外周血、脾脏TNF-α的表达水平降低（P值均< 0.001）;p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表达水平降低,差异均具有显著统计学意义（P值均 < 0.001）。结论：SB239063通过抑制TNF-α、p38MAPK及其自磷酸化,减轻香烟烟雾暴露变应性鼻炎大鼠MKP-1的表达。     

慢性间歇性缺氧降低SD大鼠精子数量和活力的研究

摘要 目的：通过制备大鼠慢性间歇性缺氧的动物模型,观察间歇性缺氧对雄性大鼠精子数量和活力的影响,并初步探讨其可能的发生机制。方法：16只雄性SD大鼠随机分为对照组和缺氧组。间歇性缺氧8周后分别测定两组大鼠精子活力和精子浓度,睾丸组织中P53的表达量和细胞的凋亡水平,以及血清睾酮（T）、促卵泡素（FSH）和黄体生成素（LH）的浓度。结果：与对照组比较,缺氧组大鼠精子的浓度和活力均降低（P>0.05),并且前向运动的精子数明显减少（P<0.05）。同时,缺氧组睾丸组织P53 mRNA的表达和睾丸组织中凋亡的细胞均多于对照组,血清T、LH的浓度低于对照组（P<0.05）。结论：间歇性缺氧时可能影响了下丘脑-垂体-性腺轴,不仅使睾酮合成减少,还降低了对P53的抑制作用而诱导了大量细胞的凋亡,最终降低了SD大鼠的精子数量和活力。     

杨梅素对高脂喂养小鼠代谢及自发活动节律的影响研究

摘要 目的：探讨杨梅素对高脂喂养小鼠代谢情况及自发活动节律的影响。方法：6周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠15只,随机分为普通饲料组（CON）、高脂饲料组（HFD）、高脂饲料+杨梅素组100 mg /（kg?d）组（HFD+MYR）。从干预第10周开始使用Clocklab生物节律采集分析系统记录三组小鼠自发活动数据。干预第13周结束,检测三组小鼠体重、血脂数据。结果：与CON组相比,HFD组体重、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白均显著升高（P<0.001）,高密度脂蛋白显著降低（P<0.001）,活动峰值时相（Activity phase）显著后移（P<0.001）,自发活动量中值（Activity mesor）和总自发活动量（Total counts）明显增加（P<0.05）,HFD+MYR组体重和低密度脂蛋白无明显变化（P>0.05）,甘油三酯、总胆固醇均显著升高（P< 0.01）,高密度脂蛋白显著降低（P<0.01）,活动峰值时相显著后移（P<0.001）,自发活动量中值和总自发活动量无明显变化（P>0.05）。与HFD组相比,HFD+MYR组体重、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白明显降低（P<0.05）,高密度脂蛋白明显升高（P<0.05）,活动峰值时相明显前移（P<0.05）,自发活动量中值和总自发活动量明显减少（P<0.05）。结论：杨梅素可改善高脂喂养小鼠的代谢状态及减轻小鼠自发活动节律紊乱。     

从干预SIRT1表达探究急性应激影响糖尿病小鼠葡萄糖代谢和脂肪代谢的机制

摘要 目的：从干预组蛋白去乙酰化酶（Sirtuin1, SIRT1）表达探究急性应激影响糖尿病小鼠葡萄糖代谢和脂肪代谢的机制。方法：以30只C57BL/6小鼠为研究对象,通过高脂饮食和链脲佐菌素腹腔注射诱导的T2DM 模型小鼠,然后随机分为对照组（正常小鼠+柠檬酸盐缓冲液灌胃）、糖尿病组（糖尿病小鼠+柠檬酸盐缓冲液注射）和SIRT1干预组（糖尿病小鼠+SRT1720的载体缓冲液灌胃）。通过血糖仪和胰岛素ELISA试剂盒分别检测小鼠空腹血糖、胰岛素水平。使用血液化学自动分析仪检测小鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白（LDL）-胆固醇和高密度脂蛋白（HDL）-胆固醇水平。收集小鼠白色脂肪组织冲洗并称重比较。通过RT-PCR分析脂肪生成转录因子PPARγ和SREBP-1c、脂肪酸合成因子Fas和Ap2、脂肪酸分解因子Hsl的mRNA表达。通过蛋白印迹分析AMPK-SIRT1-PGC-1通路蛋白的表达。结果：糖尿病组较对照组空腹血糖、胰岛素水平升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组空腹血糖、胰岛素水平降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组血清甘油三酯、总胆固醇、HDL-胆固醇和LDL-胆固醇升高（P<0.05）。糖尿病组较对照组附睾、腹膜后、肠系膜和腹股沟脂肪的重量升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组的白色脂肪重量降低（P<0.05）。SIRT1干预组较糖尿病组降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组的血糖水平在30、60和120分钟时升高（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组各时间点血糖水平降低（P<0.05）。糖尿病组较对照组PPARγ、SREBP-1c、Fas、Ap2的mRNA表达升高（P<0.05）,HslmRNA降低（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病PPARγ、SREBP-1c、Fas、Ap2的mRNA表达升高,HslmRNA降低（P<0.05）。糖尿病组较对照磷酸化AMPK、SIRT1和PGC-1的表达降低（P<0.05）,SIRT1干预组较糖尿病组磷酸化AMPK、SIRT1和PGC-1的表达升高（P<0.05）。结论：调控SIRT1高表达可激活糖尿病小鼠AMPK/PGC-1α 信号通路,同时促进脂肪分解和抑制脂肪合成而表现出抗肥胖作用。     

甲基沿阶草酮甲对干眼症小鼠的治疗作用及机制

摘要 目的：探讨甲基沿阶草酮甲（Methyl ophiopogonanone A，MOA）对干眼症（Dry eye disease，DED）小鼠的治疗作用及机制。方法：将雄性BALB/c小鼠（7~8周龄，体重18-22 g）随机分为5组（n=12）：对照组、DED组、DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组。对照组为正常小鼠，其他组小鼠双眼滴入质量浓度为0.2%的苯扎氯铵溶液诱导DED模型小鼠，每日1次，连续6周。建模后，对照组和DED组小鼠腹腔注射0.5 mL的1%二甲基亚砜溶液，DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组小鼠依次腹腔注射0.5 mL剂量为10、20和40 mg/kg的MOA，每天1次，共给药28天。治疗结束后，检测各组小鼠的泪液分泌量和角膜荧光素钠染色分级，并进行角膜苏木素伊红（Hematoxylin and eosin，HE）染色、结膜过碘酸-雪夫（Periodic acid-Schiff，PAS）染色和角膜TUNEL染色。通过Western blot检测角膜K10蛋白表达水平。检测角膜氧化应激指标丙二醛（Malondialdehyde，MDA）和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）水平。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测角膜中肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bcl2-associated X，Bax）和B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）的mRNA水平。结果：与对照组比较，DED组小鼠的泪液分泌量降低（P<0.05），角膜荧光素钠染色分级升高（P<0.05），角膜出现明显病变，结膜杯状细胞数量降低（P<0.05）。角膜Bcl-2 mRNA相对表达量、SOD水平降低（P<0.05），角膜TUNEL阳性率、Bax mRNA相对表达量、K10蛋白相对表达量、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05）。与DED组比较，DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组的泪液分泌量升高（P<0.05），角膜荧光素钠染色分级降低（P<0.05），角膜病变减轻，结膜杯状细胞数量升高（P<0.05）。角膜TUNEL阳性率、Bax mRNA、K10蛋白相对表达量、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（P<0.05），Bcl-2 mRNA相对表达量、SOD水平升高（P<0.05）。结论：甲基沿阶草酮甲有效减轻干眼症小鼠的症状及眼表病变，其机制可能与抑制杯状细胞凋亡和氧化应激及炎症反应有关。     

扶正方对Lewis肺癌小鼠免疫功能、PI3K/AKT信号通路和外周血IL-2、IL-6、INF-γ的影响

摘要 目的：观察扶正方对Lewis肺癌小鼠免疫功能、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路和外周血白细胞介素（IL）-2、IL-6、γ干扰素（INF-γ）的影响。方法：将40只Lewis肺癌小鼠随机分为模型组（M组）、扶正方低剂量组（A组）、扶正方高剂量组（B组）、顺铂组（S组）,每组10只,A组、B组分别给予扶正方0.4 mL/20 g、0.8 mL/20 g灌胃,M组给予生理盐水0.4 mL/20 g灌胃,S组给予顺铂1 mg/mL,0.4 mL灌胃,连续14d,比较各组小鼠一般情况、肿瘤重量,胸腺指数、脾脏指数、脾脏CD3⁺细胞、CD4⁺细胞、CD8⁺细胞比例细胞百分比,鼠肿瘤组织PI3K/AKT信号通路蛋白表达水平及外周血IL-2、IL-6、INF-γ水平。结果：A组、B组、S组小鼠肿瘤重量低于M组,S组小鼠肿瘤重量低于A组、B组（P<0.05）,治疗前各组小鼠体重比较无统计学差异（P>0.05）,治疗后A组、B组小鼠体重高于S组、M组（P<0.05）。A组、B组小鼠胸腺指数显著高于M组、S组（P<0.05）。A组、B组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺显著高于M组、S组,CD8⁺显著低于M组、S组（P<0.05）,B组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺显著高于A组,CD8⁺低于A组（P<0.05）。A组、B组、S组小鼠肿瘤组织PI3K蛋白、AKT蛋白表达水平显著低于M组（P<0.05）。A组、B组、S组小鼠外周血IL-2、INF-γ水平显著高于M组,IL-6水平显著低于M组（P<0.05）。结论：扶正方可以提升Lewis肺癌小鼠免疫功能,调节IL-2、IL-6、INF-γ细胞因子水平,抑制PI3K/AKT信号通路起到抗肺癌的作用。     

海马Sirt1在高压氧预处理改善异氟醚诱导老龄小鼠认知功能障碍中的作用

摘要 目的：通过shRNA抑制沉默信息调节因子1（sirtuin 1,Sirt1）基因表达,研究Sirt1在高压氧预处理改善异氟醚（isoflurane,ISO）诱导小鼠认知功能障碍中的作用及其对小鼠海马BDNF、GDNF基因表达的影响。方法： 将64只C57雄性小鼠随机分为假手术组（Sham组）、高压氧组（HBO组）、异氟醚组（ISO组）、高压氧预处理+异氟醚组（HBO + ISO组）;以及对照组（NS组）、Sirt1抑制组（sh-Sirt1组）、对照+高压氧预处理组（NS + HBO组）和Sirt1抑制+高压氧预处理组（sh-Sirt1 + HBO组）,每组8只。经慢病毒转染以及ISO末次暴露24小时后进行认知功能测试（Morris水迷宫测试）,随后处死小鼠,利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测海马BDNF和GDNF的mRNA表达情况。结果：（1）异氟醚可以导致明显的认知功能障碍,与Sham组相比,ISO组靶象限探索时间百分比显著减低（P<0.01）,ISO组小鼠海马BDNF和GDNF mRNA表达水平显著下降（P<0.01）。（2）高压氧预处理可以改善POCD小鼠的认知功能障碍,ISO + HBO组靶象限探索时间百分比显著高于ISO组（P<0.05）,ISO + HBO组小鼠海马BDNF（P<0.05）和GDNF（P<0.01）mRNA表达水平显著升高。（3）高压氧预处理可以显著增加POCD小鼠海马BDNF（P<0.01）和GDNF（P<0.05）mRNA表达水平,慢病毒介导shRNA靶向下调Sirt1可以逆转高压氧预处理对POCD小鼠海马BDNF（P<0.05）和GDNF（P<0.01）mRNA表达水平的改变。结论：高压氧预处理是治疗POCD的有效方法,Sirt1可能是POCD治疗的潜在分子靶点。     

阿魏酸钠对肺结核模型小鼠免疫功能及肺泡巨噬细胞吞噬功能的调控作用研究

摘要 目的：探讨与分析阿魏酸钠对肺结核模型小鼠免疫功能及肺泡巨噬细胞吞噬功能的调控作用。方法：肺结核模型小鼠(n=36)随机分为模型组、利福平组、阿魏酸钠组,每组各12只。利福平组、阿魏酸钠组分别给予100 mg/kg剂量的利福平与阿魏酸钠,模型组小鼠灌胃等量生理盐水,1次/d,给药6周,观察与记录所有小鼠的一般特征;分别于给药第2周、第4周、第6周,HE染色观察小鼠的病理特征;MDA检测试剂盒和总SOD活性检测试剂盒测定肺组织MDA水平与SOD活性;流式细胞仪检测小鼠T淋巴细胞亚群-CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞水平;酶联免疫法检测血清IL-6、IL-8含量;AnnexinV-FITC检测肺泡巨噬细胞凋亡率。结果：利福平组、阿魏酸钠组给药第2周、第4周、第6周的肺组织丙二醛（Malondialdehyde,MDA）水平低于模型组（P<0.05）,超氧化物岐化酶（superoxide dismutase,SOD）活性高于模型组（P<0.05）,利福平组与阿魏酸钠组对比也有明显差异（P<0.05）。利福平组、阿魏酸钠组给药第2周、第4周、第6周的血液CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞比例明显高于模型组（P<0.05）,阿魏酸钠组也高于利福平组（P<0.05）。利福平组、阿魏酸钠组给药第2周、第4周、第6周的血清IL-6、IL-8含量明显低于模型组（P<0.05）,阿魏酸钠组也低于利福平组（P<0.05）。利福平组、阿魏酸钠组给药第2周、第4周、第6周的肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid,BALF）巨噬细胞凋亡率明显低于模型组（P<0.05）,阿魏酸钠组也明显低于利福平组（P<0.05）。结论：阿魏酸钠在肺结核模型小鼠的应用可抑制炎症因子的表达,并改善氧化状况,还能增强小鼠的免疫功能,降低肺泡灌洗液巨噬细胞凋亡率。     

n-6/n-3 多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响

目的:探讨n-6/n-3多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响。方法:健康的30只C57/B6雄鼠随机分为对照组(CON)、高脂组(HF)、花生四烯酸组(HF+AA)。喂食16周,做合笼实验并记录致孕率,通过精子动力分析仪检测小鼠精子活力和数量的变化,用Elisa试剂盒测血清中睾酮和甘油三酯水平。通过病理组织染色观察小鼠睾丸组织的形态学变化。利用Realtime-PCR的方法检测小鼠睾丸中Dazl基因表达水平的变化。结果:高脂组、花生四烯酸组与对照组相比精子活力[(16±0.01;12.33±2.83 vs72.2±12.73)%,P0.001],精子数量[(7.5±1.13;6±0.14 vs 13.87±0.35)million/m L,P0.001],致孕率[(28.57;14.29 vs 78.57)%,P0.001]及血清睾酮含量[(0.35±0.14;0.27±0.07 vs 3.51±0.7)ng/m L,P0.001]均显著性降低。高脂组、花生四烯酸组与对照组相比,血清中甘油三酯的含量显著增高[(0.74±0.04;0.74±0.04 vs 0.45±0.04)mmol/L,P0.001]。病理组织染色观察到花生四烯酸组小鼠睾丸组织出现了明显异形,曲细精管内部的初级精母细胞明显缺失,管腔中从初级精母细胞到精子的发生过程出现了变异,精子的数量也显著性下降。参与精子生成过程中的减数分裂前的有丝分裂增殖期、精原细胞的发育等过程的Dazl基因在高脂组和花生四烯酸组小鼠睾丸中的表达量与对照组相比显著降低(0.87±0.05;0.65±0.03 vs 1.07±0.04,P0.05)。结论:膳食中n-3/n-6多不饱和脂肪酸失衡会导致雄鼠精子发生发育的障碍     

七氟醚通过调节JNK信号通路对幼鼠空间探索能力及认知功能的影响

目的:探究七氟醚通过调节c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路对幼鼠空间探索能力及认知功能的影响。方法:48只7 d日龄的SD大鼠随机分为3组:对照组、七氟醚组和七氟醚+SP600125组。七氟醚组和七氟醚+SP600125组吸入七氟醚,七氟醚+SP600125组使用JNK抑制剂SP600125灌胃。在最后一次吸入七氟醚3 h后每组随机处死8只幼鼠,通过TUNEL染色检测海马体神经元凋亡。在大鼠性成熟后通过水迷宫实验和跳台实验检测神经功能和学习能力。在吸入七氟醚后3 h和性成熟后通过Western blotting检测JNK和Caspase-3蛋白,并比较各组AchE和CHAT的活性。结果:在建模后3 h,七氟醚组的JNK、Caspase-3蛋白水平、AchE活性显著高于对照组,CHAT活性显著低于对照组(P0.05)。七氟醚+SP600125组的JNK、Caspase-3、AchE活性水平显著低于七氟醚组,CHAT活性显著高于七氟醚组(P0.05)。七氟醚组幼鼠的海马体神经元凋亡率显著高于对照组(P0.05),七氟醚+SP600125组的凋亡率显著低于七氟醚组(P0.05)。在大鼠性成熟后与对照组比较,七氟醚组的逃避潜伏期升高而穿越平台次数降低,错误次数显著升高而潜伏期显著降低(P0.05),并且七氟醚+SP600125组的逃避潜伏期低于七氟醚组而穿越平台次数高于七氟醚组,错误次数显著低于七氟醚组而潜伏期显著高于七氟醚组(P0.05)。各组大鼠性成熟后海马体中JNK和Caspase-3蛋白水平比较差异无统计学差异(P0.05)。性成熟后各组大鼠海马体中AchE活性比较差异不显著(P0.05)。七氟醚组的CHAT水平显著低于对照组(P0.05),七氟醚+SP600125组的CHAT水平显著高于七氟醚组(P0.05)。结论:七氟醚可能通过激活JNK通路促进海马体神经元细胞凋亡,并使AChE活性升高而ChAT活力降低,导致大鼠神经功能、学习和记忆力降低。     

运动干预对肥胖大鼠睾丸自噬和凋亡的影响

目的 探讨肥胖对大鼠生精小管结构及自噬和凋亡相关蛋白质的影响,并探讨运动对睾丸自噬和凋亡的影响及其调控机制。方法 将50只6周龄雄性SD大鼠随机分为标准饲养组（SD组,n=20）和高脂饲养组（HFD组,n=30）。HFD组喂养8周建立肥胖大鼠模型,并随机筛选出20只肥胖大鼠进行运动干预。SD组和HFD组分别随机分为标准对照组（CC组）、标准运动组（CE组）、肥胖对照组（OC组）、肥胖运动组（OE组）,每组10只。其中CE组和OE组进行8周中等强度跑台运动干预,60 min/d,5 d/周,其他两组维持原饲养条件。在最后一次运动结束48 h后,将大鼠腹腔麻醉,称重,取大鼠左右两侧睾丸、称量睾丸重量并计算睾丸指数。制作睾丸石蜡切片,利用HE染色法观察睾丸组织结构。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测睾丸组织中p62、LC3II、LC3I、BCL-2、Bax和AMPK蛋白表达量并计算LC3II/LC3I比值,采用免疫荧光检测睾丸中LC3和BCL-2蛋白表达位置。结果 与CC组相比,OC组大鼠睾丸指数降低,生精小管直径显著降低（P<0.01）,精子细胞减少,睾丸组织中有脂滴沉...     

PRDX2在乙醇致雄性小鼠生殖损害中的机制研究

目的:探讨过氧化氧化还原蛋白2(PRDX2)在乙醇所致的雄性小鼠生殖损害中的作用机制。方法:以雄性昆明小鼠为研究对象,分为对照组及模型组,分别以蒸馏水和乙醇灌胃处理12周,采集血清用于激素水平测定;收集精子,一部分用于精液分析,另一部分用于Q-PCR检测PRDX2、BCL-2、BAX、Caspase3的m RNA表达,Western blot检测PRDX2、BCL-2、BAX、Caspase3和Cleaved-Caspase3的蛋白表达,免疫荧光法鉴定PRDX2的表达;统计分析研究结果。结果:与对照组比较,模型组小鼠的精子活率降低,雌激素水平升高而雄激素水平降低(P0.05);模型组小鼠的PRDX2、BCL-2蛋白及m RNA水平较对照组均降低(P0.05),免疫荧光显示PRDX2可在精子中表达,且模型组小鼠精子的荧光强度明显减低;在BAX及Caspase3 m RNA的表达上,模型组高于对照组(P0.05),模型组小鼠的BAX及Cleaved-Caspase3的蛋白表达亦高于对照组(P0.05);Pearson相关系数分析显示PRDX2与BCl-2呈正相关、与BAX、Caspase3呈负相关,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:乙醇造成精子PRDX2表达降低,间接诱导精子发生凋亡,影响精子的生成和发育,损害雄性小鼠的生殖功能。     

黄芩苷通过增强抗氧化和抑制细胞凋亡减轻哮喘小鼠雄性生殖损伤

生殖健康是人口与健康领域的重要议题。作为全球最常见的呼吸道疾病哮喘会影响男性生殖功能,但相关机制鲜有报道。本文研究了黄酮类化合物黄芩苷(baicalin,BA)对哮喘小鼠睾丸损伤的干预作用及相关机制。选择雄性BALB/c小鼠随机分为对照组(CK组)、卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏的哮喘组(OVA组)和黄芩苷干预哮喘组(OVA+BA组)。结果发现,3组小鼠体重无明显差异。OVA组小鼠睾丸系数和精子数量显著降低(P < 0.05),精子畸形率显著增加(P < 0.05);黄芩苷干预组小鼠睾丸系数显著增加(P < 0.05),精子畸形率显著降低(P < 0.05)。HE染色观察到OVA组小鼠睾丸组织生精小管结构损伤,精子发生异常,生精细胞减少,Johnson得分显著降低;BA干预组生精小管直径及生精上皮细胞高度显著增加,生精小管基膜结构较完整,Johnson得分显著提高(P < 0.05);试剂盒法检测氧化还原指标发现,OVA组睾丸组织过氧化氢(H₂O₂)和丙二醛(MDA)含量显著增加(P < 0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量显著降低(P < 0.05);OVA+BA组睾丸组织H₂O₂和MDA含量显著降低(P < 0.05),T-SOD活性显著增加(P < 0.05);实时荧光定量RT-PCR检测发现,OVA组睾丸组织中促凋亡基因p53、Casp-3转录上调,抗凋亡基因Bcl2转录显著下调,胱天蛋白酶3(caspase-3)活性显著增加(P < 0.05);OVA+BA组p53和Casp-3转录下调,Bcl2转录上调,胱天蛋白酶3活性显著降低(P < 0.05)。结果表明,哮喘小鼠睾丸组织发生了氧化应激和结构损伤,细胞凋亡途径被激活,BA干预可有效减轻哮喘小鼠睾丸组织的氧化胁迫,抑制凋亡通路,保护睾丸组织的功能和结构。结果提示,黄芩苷能缓解哮喘小鼠的生殖毒性,该效应与机体抗氧化能力提高、细胞凋亡途径抑制有关。     

In vivo analysis of phagocytosis of apoptotic cells by testicular Sertoli cells

Sertoli cells, a somatic cell type present within the seminiferous tubules of testes, are responsible for the phagocytic elimination of apoptotic spermatogenic cells. We here established an in vivo assay system that enables us to quantitatively analyze Sertoli cell phagocytosis of apoptotic cells in testes of live mice. Apoptotic cells were injected into the seminiferous tubules of spermatogenic cell-depleted mice, and the occurrence of phagocytosis by Sertoli cells was examined by histochemically analyzing testis sections or dispersed testicular cells. We reproducibly observed similar levels of phagocytosis in either examination, and the ratio of Sertoli cells that engulfed injected apoptotic cells was almost the same between the two examinations. These results indicated that a quantitative in vivo assay system was established using the seminiferous tubules of live mice as 'test tubes.' We then determined the requirements for Sertoli cell phagocytosis of apoptotic cells using this assay. For this purpose, apoptotic cells were injected together with various phagocytosis inhibitors, and the extent of phagocytosis by Sertoli cells was determined. The results revealed that Sertoli cells phagocytose apoptotic cells in a manner dependent on class B scavenger receptor type I (SR-BI) of Sertoli cells and phosphatidylserine exposed at the surface of target cells, as previously observed in vitro using primary cultures of dispersed rat testicular cells. Furthermore, the amount of SR-BI in Sertoli cells increased after injection of apoptotic cells into the seminiferous tubules, suggesting a positive feedback regulation of the expression of this phagocytosis receptor.     

食管癌组织人端粒酶反转录酶、肿瘤转移相关蛋白1的表达与临床病理特征及预后的关系研究

摘要 目的： 探讨食管癌组织中人端粒酶反转录酶（hTERT）、肿瘤转移相关蛋白1（MTA1）的表达与临床病理特征及预后的关系。方法：选择2015年1月至2016年10月我院收治的食管癌患者80例,应用免疫组织化学染色法检测其癌组织和癌旁组织中hTERT、MTA1表达,分析食管癌组织中hTERT、MTA1表达与临床病理特征的关系及其表达的相关性。所有患者均随访36个月,观察不同hTERT、MTA1表达情况患者的生存情况并分析hTERT、MTA1的表达与患者预后的关系。结果：食管癌组织中hTERT、MTA1阳性率显著高于癌旁组织（P<0.05）。中低分化、TNM分期为III+IV期、有淋巴结转移者食管癌组织hTERT、MTA1阳性率分别高于高分化、TNM分期为I+II期、无淋巴结转移者（P<0.05）,不同性别、年龄、病灶最大直径者、肿瘤部位、病理类型食管癌组织hTERT、MTA1阳性率比较均无统计学差异（P>0.05）。Spearman相关分析显示,食管癌组织中hTERT表达与MTA1表达呈正相关（r=0.645,P=0.000）。随访36个月后,患者存活33例,存活率41.25%（33/80）,食管癌组织hTERT阴性、MTA1阴性患者生存率、中位生存期分别为64.29%（9/14）、23.6个月,60.87%（14/23）、24.9个月均显著优于hTERT阳性、MTA1阳性患者的36.36%（24/66）、19.2个月,33.33%（19/57）、18.5个月（P<0.05）。结论：食管癌组织中存在hTERT、MTA1异常高表达,其水平与食管癌的组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,且其表达情况与食管癌患者预后有密切关系。     

Meichroacidin containing the membrane occupation and recognition nexus motif is essential for spermatozoa morphogenesis

Meichroacidin (MCA) is a highly hydrophilic protein that contains the membrane occupation and recognition nexus motif. MCA is expressed during the stages of spermatogenesis from pachytene spermatocytes to mature sperm development and is localized in the male meiotic metaphase chromosome and sperm flagellum. MCA sequences are highly conserved in Ciona intestinalis, Cyprinus carpio, and mammals. To investigate the physiological role of MCA, we generated MCA-disrupted mutant mice; homozygous MCA mutant males were infertile, but females were not. Sperm was rarely observed in the caput epididymidis of MCA mutant males. However, little to no difference was seen in testis mass between wild-type and mutant mice. During sperm morphogenesis, elongated spermatids had retarded flagellum formation and might increase phagocytosis by Sertoli cells. Immunohistochemical analysis revealed that MCA interacts with proteins located on the outer dense fibers of the flagellum. The testicular sperm of MCA mutant mice was capable of fertilizing eggs successfully via intracytoplasmic sperm injection and generated healthy progeny. Our results suggest that MCA is essential for sperm flagellum formation and the production of functional sperm.