烟酰胺经调控p38MAPK信号通路对高血压脑出血大鼠的脑保护作用机制分析

摘要 目的：探讨烟酰胺经调控p38MAPK信号通路对高血压脑出血大鼠的脑保护作用机制。方法：选择48只SD大鼠,随机选择12只作为假手术组,其余36只进行高血压脑出血造模,对比4组大鼠的血肿体积、左扭转比率、神经功能变化、出血脑组织p-p38MAPK、p38MAPK蛋白表达、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、凋亡诱导因子含量及脑组织含水量。结果：与模型组相比,尼莫地平组、烟酰胺组的血肿体积明显缩小;与烟酰胺组相比,尼莫地平组的血肿体积明显缩小（P<0.05）;与干预前相比,干预后烟酰胺组、尼莫地平组的血肿体积明显缩小,模型组的血肿体积明显增多（P<0.05）。与模型组相比,假手术组、尼莫地平组、烟酰胺组的向左扭转比率、p-p38MAPK/p38MAPK、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸明显较高,脑组织含水量、凋亡诱导因子含量明显较低;与烟酰胺组相比,尼莫地平组、假手术组的左扭转比率、p-p38MAPK/p38MAPK、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸明显较高,脑组织含水量、凋亡诱导因子含量明显较低;与尼莫地平组相比,假手术组的左扭转比率、p-p38MAPK/p38MAPK、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸明显较高,脑组织含水量、凋亡诱导因子含量明显较低（P<0.05）。结论：在高血压脑出血大鼠中,p38MAPK介导的细胞凋亡途径会加剧高血压脑出血的脑损伤,烟酰胺会经过抑制p38MAPK信号通路减轻高血压脑出血后的脑损伤。     

银杏叶提取物对COPD大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

摘要 目的：观察银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract, GBE）对慢性阻塞性肺疾病( COPD) 大鼠肺p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/ 核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,探讨GBE对COPD抗炎作用的分子机制。方法：将90只雄性Wistar 大鼠随机分为空白对照组、COPD 模型组、GBE高剂量组、GBE中剂量组、GBE低剂量组、SB203580(p38MAPK抑制剂)组,共计6组,每组15只。采用香烟烟雾熏吸联合气道内注入脂多糖（LPS）的方法建立COPD大鼠模型。造模结束后分组给药,空白对照组与COPD 模型组给予生理盐水腹腔注射,GBE高、中、低剂量组 (14, 7, 3.5 mg?kg^-1?d^-1)分别给予不同浓度的GBE腹腔注射,SB203580组予5 mg?kg^-1?d^-1腹腔注射,每天给药1次,连续给药14 d。通过HE染色法观察大鼠肺泡和气道的病理变化,酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠肺泡灌洗液（BALF）和血清中IL-6、IL-8与IL-10水平,蛋白免疫印迹法(Western blot) 检测大鼠肺组织p38MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）蛋白含量,采取实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time qPCR) 法检测大鼠肺组织中p38MAPK、NF-κB p65、IκBα mRNA表达。结果：与COPD模型组相比,各用药组均能抑制肺泡破坏与气道重塑,减轻肺泡与支气管周围炎症浸润;与空白对照组相比,COPD 模型组BALF与血清中IL-6、IL-8含量明显升高（P<0.05）,IL-10含量明显降低（P<0.05）,肺组织中p38MAPK、NF-κB p65蛋白与p38MAPK、NF-κB p65 mRNA表达量明显升高（P<0.05）,IκBα蛋白与IκBα mRNA表达量明显下降（P<0.05）;与COPD模型组相比,各药物组均能明显降低大鼠BALF与血清中IL-8含量、提高IL-10含量（P<0.05）,而GBE高剂量组与SB203580组效果更明显;GBE高剂量组与SB203580组BALF中IL-6含量较GBE低剂量组与COPD模型组明显降低（P<0.05）;与COPD模型组相比,各药物组均能明显降低大鼠肺组织中p38MAPK、NF-κB p65蛋白与p38MAPK、NF-κB p65 mRNA表达量（P<0.05）,GBE高、中剂量组与SB203580组能明显提高IκBα蛋白与IκBα mRNA表达量（P<0.05）。结论：GBE能抑制COPD大鼠炎症反应与气道重塑,其机制可能与调控p38MAPK/NF-κB信号通路有关。     

不同盐浓度对盐敏感性高血压肾脏纤维化及巨噬细胞浸润的影响

目的:探讨不同盐浓度对盐敏感高血压肾脏纤维化及及巨噬细胞浸润的影响。方法:将6周龄Dahl盐敏感大鼠随机分为正盐组(0.3%氯化钠)、4%氯化钠组、8%氯化钠组三组,每组15只,持续喂养8周。在8周时间点应用tail-cuff method方法监测鼠尾血压,Masson三原色法检测三组大鼠肾脏组织纤维化情况,免疫组化及Western blotting方法检测各组大鼠肾脏巨噬细胞浸润情况。结果:1)4%高盐组及8%高盐组大鼠8周时间点血压均较正盐组现在升高,8%高盐组大鼠血压较4%高盐组进一步升高。2)4%高盐组及8%高盐组大鼠8周时间点肾脏相对重量及肾脏纤维化程度较正盐组增加,8%高盐组较4%高盐组进一步增加。3)4%高盐组及8%高盐组大鼠8周时间点肾脏组织巨噬细胞浸润增加,8%高盐组较4%高盐组进一步增加。结论:盐浓度不同对盐敏感性肾脏纤维化及巨噬细胞浸润程度影响不同,盐浓度升高可加重盐敏感高血压时肾脏纤维化及及巨噬细胞浸润。     

基于p38MAPK通路探讨银杏叶提取物对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道黏液高分泌及血管重塑的影响

摘要 目的：探讨银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract, GBE）通过调控p38MAPK通路对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）大鼠气道黏液高分泌及肺血管重塑的影响。方法：将90只大鼠随机分为空白对照组、COPD模型组、GBE高剂量组、GBE中剂量组、GBE低剂量组、SB203580组。采用香烟烟雾熏吸联合气道内注入脂多糖（LPS）的方法建立COPD大鼠模型,造模结束后分组给药;通过维多利亚蓝+VG染色观察大鼠肺小动脉病理改变,测量血管壁厚度占血管外径百分比（WT%）、管壁面积占血管面积百分比（WA%）的变化;酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠肺泡灌洗液（BALF）与血清中TNF-α、TGF-β的表达;实时荧光定量法（RT-PCR）检测肺组织表皮生长因子受体（EGFR）、黏蛋白5AC（MUC5AC）mRNA表达;蛋白质印迹法（Western Blot）检测肺组织EGFR、MUC5AC、p-p38MAPK蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,COPD模型组WT%、WA%明显升高（P＜0.05）;与COPD模型组比较,各药物干预组WT%、WA%明显降低（P＜0.05）;COPD模型组大鼠BALF及血清中TNF-α、TGF-β水平较空白对照组明显升高（P＜0.05）,各药物干预组TNF-α、TGF-β水平较COPD模型组明显下降（P＜0.05）;COPD模型组大鼠肺组织EGFR、MUC5AC mRNA与空白对照组相比明显升高（P＜0.05）,各药物干预组大鼠肺组织EGFR、MUC5AC mRNA与COPD模型组相比显著降低（P＜0.05）;COPD模型组大鼠肺组织中EGFR、MUC5AC、p-p38MAPK蛋白的表达与空白对照组相比明显升高（P＜0.05）,各药物干预组大鼠肺组织中EGFR、MUC5AC、p-p38MAPK蛋白的表达与COPD模型组相比明显降低（P＜0.05）,不同GBE剂量干预组中EGFR、MUC5AC、p-p38MAPK蛋白的表达量随着给药剂量增加而减少。结论：GBE能够抑制COPD大鼠气道黏液分泌、改善肺血管重塑,其机制可能与抑制p38MAPK通路有关。     

抑制p38MAPK信号通路对Bpiv3复制的影响

由牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,Bpiv3)感染引起的牛副流感病已成为各国牛场最重要的传染病之一,每年都会给世界养牛业造成巨大的经济损失,但关于该病致病的分子机制研究较少。本研究通过观察Bpiv3感染对MDBK细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MKK3)及其下游分子p38丝裂酶原活化的蛋白激酶(p38MAPK)的表达的影响,探讨相关的信号转导机制,对p38 MAPK通路在Bpiv3感染过程中的作用进行了初步研究。Bpiv3感染细胞后,采用Western Blot检测MKK3,p38 MAPK在蛋白水平的表达变化,并采用ELISA法检测细胞上清中IL-6,IL-8,IL-13和TNF-α的水平变化,采用SPSS 12软件进行统计学分析。结果表明,Bpiv3在感染后能够诱导MKK3的激活以及p38的磷酸化,激活了p38 MAPK信号通路。而且p38 MAPK信号通路参与了Bpiv3的复制过程。ELISA检测Bpiv3感染后以及使用抑制剂SB202190处理后的细胞上清中IL-6、IL-8、IL-13和TNF-α的水平发现,p38 MAPK信号通路参与了Bpiv3诱导的炎症反应。研究证实Bpiv3感染能够激活p38 MAPK通路,显著上调MKK3的表达并诱导p38发生磷酸化,进一步激活下游分子发挥生物学活性,促进Bpiv3的复制及诱导促炎细胞因子的产生。p38 MAPK信号通路的激活可能是Bpiv3感染诱发炎症反应的机制之一。     

高碳酸血症对大鼠机械通气肺损伤时炎症因子和p38MAPK 表达的影响

目的:探讨高碳酸血症对大鼠机械通气性肺损伤(VILI)时炎症因子和p38MAPK表达的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠30只,体重220～280g,采用随机数字表法,将大鼠随机分3组(n=10):对照组(C组)、机械通气肺损伤组(V组)和高碳酸血症组(H组)。C组保留自主呼吸,V组和H组行机械通气4 h。采用高气道压机械通气模式制备机械通气性肺损伤模型。H组通过调整吸入的CO2浓度来维持动脉血PaCO2分别为80～100mmHg。机械通气结束时,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白、TNF-α和巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)的浓度;取肺组织,测定湿干重比(W/D比)、细胞间粘附分子(ICAM-1)和p38MAPK蛋白的表达水平以及p38MAPK的活性,并观察病理学结果,进行肺损伤评分。结果:与C组比较,V组肺损伤评分、W/D比、ICAM-1表达水平、BALF中总蛋白浓度、TNF-α和MIP-2浓度和肺组织p38MAPK活性升高,PaO2降低(P<0.05);与V组比较,H组肺损伤评分、W/D比、ICAM-1表达水平、BALF中总蛋白浓度、TNF-α和MIP-2浓度和肺组织p38MAPK活性降低,PaO2升高(P<0.05)。结论:高碳酸血症通过调节p38MAPK的表达,从而抑制炎症反应减轻大鼠机械通气肺损伤。     

醛固酮对大鼠主动脉bax基因表达的影响

目的研究醛固酮对大鼠主动脉bax基因表达的影响。方法32只SD大鼠随机分为空白对照组、腺瘤组、腺瘤＋依普利酮组和腺瘤＋肼苯哒嗪组。在每只大鼠皮下埋植的微量渗透泵内注入空白溶剂或醛固酮。8周后通过免疫组化、RT—PCR和Western印迹检测主动脉bax基因的表达。结果与对照组相比,腺瘤组大鼠主动脉bax mRNA和蛋白表达都显著上调（P〈0．05）;依普利酮能够抑制醛固酮对bax基因的诱导作用（P〈0．05）;而肼苯哒嗪虽然可以使大鼠收缩压下降,但不能阻止醛固酮对bax基因的作用。结论醛固酮通过诱导bax基因表达,调节血管平滑肌细胞凋亡和干预细胞周期进程,可能是其导致血管重构的机制之一。     

五灵胶囊对LPS诱导鼠枯否细胞p38MAPK信号转导通路的影响

目的:探讨五灵胶囊对脂多糖(LPS)诱导的大鼠枯否细胞(Kupffer cells,KC)p38MAPK信号转导通路的影响。方法:分离纯化KCs,60ng/ml LPS刺激建立LPS的肝细胞损伤模型;40只SD大鼠药物处理后,分离制备含药血清。实验分为四组:空白血清组、LPS+空白血清组、含药血清Ⅰ组(10.0g/kg)+LPS、含药血清Ⅱ组(6.25g/kg)+LPS。KCs产生促炎因子(I125放免法测定TNF-α、IL-6、IL-8,比色法测定NO生成量),采用Western blot法检测ERK、p-ERK、p38、p-p38、TNF-α和STAT3的蛋白水平。结果:1、空白血清+LPS组,TNF-α、IL-6、IL-8和NO浓度明显高于空白血清组;2、同空白血清+LPS组比较,含药血清Ⅰ、Ⅱ组TNF-α、IL-6、IL-8和NO水平明显降低;3、与空白血清组比较,空白血清+LPS组能上调KCs对p-ERK、P38、p-P38、STAT3和TNF-α表达(p<0.01,p<0.05),对ERK表达无影响(p>0.05)4、同空白血清+LPS组比较,含药血清Ⅰ+LPS、含药血清Ⅱ+LPS组p-p38、S...     

α1, 2-岩藻糖转移酶基因转导对人卵巢癌细胞RMG-I p38MAPK信号通路介导的凋亡的影响

以α1,2-岩藻糖转移酶基因转染前后卵巢癌细胞RMG-I、RMG-I-H为细胞模型,用细胞免疫荧光方法检测转染前后细胞p38MAPK和p-p38MAPK的细胞内定位,RT-PCR和Western blot方法从mRNA和蛋白质两个水平检测转染前后细胞p38MAPK表达的变化;以兔抗人IgG抗体处理组为对照,分别利用RT-PCR和Western blot方法检测Lewisy单克隆抗体处理前后RMG-I-H细胞p38MAPK mRNA和蛋白质表达水平的变化;以0.1%DMSO为对照,用流式细胞仪(FCM)检测p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理后RMG-I-H凋亡比率的变化,并利用RT-PCR和Western blot方法检测caspase-3的mRNA和蛋白质水平的变化;用RT-PCR方法检测卡铂和SB203580处理后p38MAPK及caspase-3表达的变化.结果表明,RMG-I与RMG-I-H的p38MAPK蛋白主要定位在细胞质,p-p38MAPK蛋白定位在细胞核,转染后p38MAPK的mRNA水平明显高于转染前(P<0.05);Lewisy单克隆抗体处理后RMG-I-H细胞p38MAPK m...     

肢体缺血预处理对大鼠海马CA3区和齿状回区p38 MAPK和HSP 70表达的影响

目的:观察肢体缺血预处理(LIP)后大鼠海马CA3区和齿状回区(DG)p38MAPK和HSP70的表达,以进一步探讨CA3区和DG区的缺血耐受机制。方法:96只Wistar大鼠随机分为sham组和LIP组,LIP组进一步分为LIP6 h、LIP 12h、LIP1 d、LIP2d、LIP3 d、LIP4d和LIP5 d亚组。方法:应用免疫组织化学和Western blot方法观察大鼠海马CA3区及DG区p38MAPK和HSP70的表达。结果:免疫组化及Western blot结果显示,与sham组相比,LIP后大鼠海马CA3区及DG区p-p38MAPK及HSP70的表达呈现出动态的变化,其中p-p38MAPK的表达于LIP后1 d明显增加、3 d达到高峰,LIP后4 d逐渐下降;HSP 70的表达则于LIP后2 d明显增加、3 d达到高峰,LIP后4 d逐渐下降。结论:LIP上调了大鼠海马CA3区和DG区p38MAPK和HSP70的表达。     

p38 MAPK信号转导途径在关节软骨细胞中的激活和作用

p38信号转导途径是MAPK途径的一种,软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞成分。软骨细胞中的p38 MAPK可以被多种细胞因子、机械因素等所激活,它与软骨细胞表型的保持和分化、软骨细胞的肥大化和钙化、凋亡、软骨基质金属蛋白酶的合成、软骨炎性细胞因子的产生等有密切关系,可能在关节炎的发生发展中发挥了重要作用。     

p38 MAPK通路在脂多糖致呼吸道上皮损伤中的作用

脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是革兰阴性杆菌细胞壁的主要组成成分,也是一种很强的炎症反应和氧化应激诱导剂。呼吸道上皮是机体防御外界细菌、病毒、香烟烟雾等生物和化学因素损伤的天然屏障,在维持呼吸道局部微环境稳态中可发挥重要作用,也是吸入性药物治疗的主要靶细胞。呼吸道上皮结构完整性缺陷或功能紊乱还参与了哮喘、慢性阻塞性肺疾病等多种肺部疾病的发生和发展。LPS可引起呼吸道上皮损伤,但其具体的分子机制目前尚不清楚。p38丝裂原活化蛋白激酶(P38mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)作为MAPK家族四个亚家族成员之一,包含四个成员:p38α、p38β、p38γ和p38δ,可通过经典和非经典的p38 MAPK信号通路激活方式及通过激酶活性无关的功能参与调控炎症反应、细胞生长、细胞分化和细胞死亡等多种病理生理过程。本文就p38 MAPK信号通路在LPS致呼吸道上皮损伤中的作用做一综述。     

p38 MAPK通路在脂多糖致呼吸道上皮损伤中的作用

脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）是革兰阴性杆菌细胞壁的主要组成成分,也是一种很强的炎症反应和氧化应激诱导剂。呼吸道上皮是机体防御外界细菌、病毒、香烟烟雾等生物和化学因素损伤的天然屏障,在维持呼吸道局部微环境稳态中可发挥重要作用,也是吸入性药物治疗的主要靶细胞。呼吸道上皮结构完整性缺陷或功能紊乱还参与了哮喘、慢性阻塞性肺疾病等多种肺部疾病的发生和发展。LPS可引起呼吸道上皮损伤,但其具体的分子机制目前尚不清楚。p38丝裂原活化蛋白激酶（P38mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）作为MAPK家族四个亚家族成员之一,包含四个成员：p38α、p38β、p38γ和p38δ,可通过经典和非经典的p38 MAPK信号通路激活方式及通过激酶活性无关的功能参与调控炎症反应、细胞生长、细胞分化和细胞死亡等多种病理生理过程。本文就p38 MAPK信号通路在LPS致呼吸道上皮损伤中的作用做一综述。     

The p38 Pathway Regulates Oxidative Stress Tolerance by Phosphorylation of Mitochondrial Protein IscU

The p38 pathway is an evolutionarily conserved signaling pathway that responds to a variety of stresses. However, the underlying mechanisms are largely unknown. In the present study, we demonstrate that p38b is a major p38 MAPK involved in the regulation of oxidative stress tolerance in addition to p38a and p38c in Drosophila. We further show the importance of MK2 as a p38-activated downstream kinase in resistance to oxidative stresses. Furthermore, we identified the iron-sulfur cluster scaffold protein IscU as a new substrate of MK2 both in Drosophila cells and in mammalian cells. These results imply a new mechanistic connection between the p38 pathway and mitochondria iron-sulfur clusters.     

p38 MAPK在小鼠睾丸不同发育阶段的表达和定位

为探讨丝裂原活化蛋白激酶p38 MAPK在小鼠睾丸不同发育阶段的表达,应用蛋白质免疫印迹杂交技术和免疫组织化学SABC法检测1至7周龄小鼠睾丸p38 MAPK的表达、定位及发育变化,并通过图像分析技术对免疫组织化学结果进行统计学分析。免疫印迹杂交发现,p38 MAPK在2～7周龄小鼠睾丸中均有表达。免疫组织化学结果显示,在2周龄小鼠睾丸曲细精管上皮中即可观察到p38 MAPK免疫阳性反应,免疫反应阳性细胞为精原细胞;3、4、5周龄小鼠睾丸仅有个别曲细精管上皮可见p38 MAPK免疫阳性反应;6、7周龄小鼠睾丸中p38 MAPK表达较丰富,免疫反应阳性细胞为精原细胞和初级精母细胞,免疫阳性反应物均主要位于细胞核内。在7周龄小鼠睾丸中还可见到部分间质细胞的细胞质亦呈p38 MAPK阳性。这些结果提示,p38 MAPK可能对生精细胞的增殖分化具有调控作用。     

The suppressive role of p38 MAPK in cellular vacuole formation

Vacuolization of the cytoplasm is one of the dramatic and frequently observed phenomena in various cell types. Cellular vacuoles occur spontaneously or via a wide range of inductive stimuli, but the molecular mechanism involved in this process remains largely unknown. In this study, we investigated the role of the p38 and JNK pathways in the formation of cytoplasmic vacuoles. We found that p38 and JNK agonist anisomycin abolishes spontaneous cytoplasmic vacuolization of HepG2 cells through p38 activation, but not through JNK activation. Importantly, blocking the activity of p38 or suppression the expression of p38 elicits cytoplasmic vacuoles formation in various cancer cells. Furthermore, cytoplasmic vacuoles induced by p38 blocking are derived from the perinuclear region. These observations provide direct evidence for a role of p38 signaling in regulating the formation of cytoplasmic vacuoles. J. Cell. Biochem. 114: 1789–1799, 2013. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.     

p38 MAPK interacts with actin and modulates filament assembly during skeletal muscle differentiation

Skeletal muscle differentiation is marked by enhanced myotube formation and increased cytoskeletal rearrangement. Actin, a cytoskeletal protein is involved in various cellular functions such as glucose transport, intracellular trafficking, cell shape, and coordinated cell movement in response to various extracellular signals. The present study reveals an association between actin and p38 MAPK only in differentiated myotubes, not in proliferating myoblasts. Actin filament disassembly caused by cytochalasinD can be reversed using the potent activator of p38 MAPK, anisomycin. Pretreatment of myotubes with anisomycin partially resisted the effect of cytochalasinD. However, inhibition of p38 MAPK completely abolished the anisomycin-mediated actin remodeling. Data suggests that p38 MAPK interacts with actin and modulates actin filament rearrangement in differentiated L6E9 skeletal muscle cells.     

p38α MAPK regulates myocardial regeneration in zebrafish

Although adult mammals are unable to significantly regenerate their heart, this is not the case for a number of other vertebrate species. In particular, zebrafish are able to fully regenerate their heart following amputation of up to 20% of the ventricle. Soon after amputation, cardiomyocytes dedifferentiate and proliferate to regenerate the missing tissue. More recently, identical results have also been obtained in neonatal mice. Ventricular amputation of neonates leads to a robust regenerative response driven by the proliferation of existing cardiomyocytes in a similar manner to zebrafish. However, this ability is progressively lost during the first week of birth. The fact that adult zebrafish retain the capacity to regenerate their heart suggests that they either possess a unique regenerative mechanism, or that adult mammals lose/ inhibit this process. p38α ΜAPK has previously been shown to negatively regulate the proliferation of adult mammalian cardiomyocytes. We sought to determine whether a similar mechanism exists in adult zebrafish, and whether this needs to be overcome to allow regeneration to proceed. To determine whether p38α ΜAPK also regulates zebrafish cardiomyocytes in a similar manner, we generated conditional transgenic zebrafish in which either dominant-negative or active p38α ΜAPK are specifically expressed in cardiomyocytes. We found that active p38α ΜAPK but not dominantnegative p38α ΜAPK blocks proliferation of adult zebrafish cardiomyocytes and, consequently, heart regeneration as well. It appears that adult zebrafish cardiomyocytes share many characteristics with adult mammalian cardiomyocytes, including p38α MAPK-mediated cell cycle inhibition. These findings raise the possibility that zebrafish-like heart regeneration could be achieved in adult mammals.