结核病血清学诊断进展

结核病的细菌学检查目前是结核病实验室诊断的金标准.由于痰涂片阳性率较低,镜检需要经验,难以区分环境分枝杆菌造成的假阳性;痰培养需时太长,因此细菌学检查对结核病的诊断价值有限.随着分子生物学技术的迅速发展,用高度敏感的方法检测结核分枝杆菌(简称结核杆菌)及其特异性DNA片段,如聚合酶链反应(PCR)、生物探针和基因芯片等,需要相应的检测设备和检测费用高而未能广泛推广.血清学诊断技术有其固有的优势,如操作简便、快速、便于推广、无需特殊精密仪器,已有多种纯化的特异性抗原可采用,可以发展成自动化检测,尤其是对痰培养阴性和肺外结核病有较为重要的辅助诊断价值而受到广泛的重视.本文从靶抗原的选择和检测技术的改进等方面综述了结核病血清学诊断的现状和进展.     

结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片的制备

目的：利用克隆表达的7种结核分枝杆菌优势表位抗原,建立可视化抗体检测蛋白芯片,用于结核病辅助诊断。方法：将7种结核分枝杆菌优势表位抗原,即38kD、ESAT-6、CFP10、MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3点于修饰的基片上,制备可检测7种结核抗体的多靶点蛋白微阵列,建立免疫金银染色检测系统;使用该芯片对48例临床结核病患者血液样品进行检测,并与“金标准”痰涂片（48例）和痰培养（其中的29例）检测结果进行比较,分析其敏感性;对30名献血员血液样品进行检测,分析其特异性。结果：可视化抗体检测蛋白芯片的敏感性分别为98.5％和96.6％,而痰涂片和痰培养检测方法的敏感性分别为35.4％和48.3％;可视化抗体检测蛋白芯片的特异性为93.3％。结论：建立的结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片检测敏感性显著高于痰涂片和痰培养方法,可用于结核病的临床辅助诊断,提高痰涂片和痰培养假阴性的检出率。     

痰涂片标本用于结核分枝杆菌耐药性检测的研究

目的 研究抗酸染色结核分枝杆菌(简称结核杆菌)阳性痰涂片标本直接用于耐药性检测的方法。方法 对18株临床分离培养的结核杆菌用利福平进行药敏试验。分别提取菌株DNA和与之对应的痰涂片标本的菌体DNA,用聚合酶链反应(PcR)扩增ropB基因后进行固相杂交和核酸测序检测结核杆菌的耐药性。结果 18株结核杆菌中有12株对利福平耐药。经PCR扩增的ropB片段与探针杂交后,敏感菌株未发现rpoB基因的突变,自耐药菌株提取的DNA中rpoB突变体的检出率为100％(12／12),痰涂片提取DNA的检出率为91．7％(11／12)。所有耐药菌株DNA与痰涂片DNA核酸测序结果相吻合,都有rpoB基因核心区域碱基突变。结论 抗酸染色痰涂片阳性标本可直接用于检测结核杆菌利福平耐药基因rpoB突变体,是一种值得临床实验室推广使用的耐药菌诊断方法。     

应用脑水细胞学检查法检出新型隐球菌的报告

应用脑水细胞学检查法检出新型隐球菌的报告大连市结核病防治所马金环,申香芝应用脑水细胞学检查法诊断中枢神经系统多种疾病是一种专门检查技术,有关应用该检查技术查出新型隐球菌未见报导。查新型隐球菌的传统方法是作直接墨汁涂片和沙保弱代培养基作培养,由于脑水细...     

土右旗2013年结核病流行病学抽样调查分析

目的:评估2001-2010年全区结核病防治规划实施以来的效果,指导和促进我区今后的防治工作,为科学决策提供有力依据。方法:2013年,对我旗振华社区人群开展结核病流行病学抽样调查,并对其流行病学特点和临床表现进行分析。结果:共计调查了1291人,其中X线胸片检查1288人,以痰代检3人,X线胸片异常12人,痰涂片检查及痰培养15人。确诊活动性肺结核9例,其中:痰涂片阴性15例;痰培养阳性4例;新发现患者9例,活动性肺结核患病率为697.13/10万,菌阳肺结核患病率为309.84/10万。结论:加强健康教育,有效提高群众防病意识是防控结核病的关键,加强自身免疫力、及时发现治疗患者是控制结核病流行的有效措施。     

结核杆菌可溶性细胞壁抗原与重组38Kd蛋白用于结核病血清学诊断的价值

目的探讨结核杆菌CW抗原和rTPA38蛋白用于结核病血清学诊断的价值。方法以CW和rTPA38蛋白为抗原,LAM为对照,用DICFA检测血清中的抗结核抗体。结果191例肺结核病人血清,用CW、rTPA38和LAM检测的敏感性分别为78．0％、65．5％和72．3％,特异性分别为95．9％、98．4％和95．9％。统计分析显示CW和rTPA38检测肺结核病人血清抗结核抗体的敏感性差异有非常显著性（χ^2=16．230,P〈0．01）。两者检测健康人和非结核组病人血清的特异性差异有显著性（χ^2=3．972,P〈0．05）。检测痰涂片阳性血清86例,发现CW和rTPA38与痰阳的一致率分别为84．9％和69．8％,CW抗原与痰涂片的阳性反应明显高于rTPA38。结论CW抗原有较好的敏感性和特异性,且与痰涂片有较高的符合率,有助于结核病的血清学诊断。     

Xpert MTB/RIF在人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病患者中诊断结核病的价值

为探讨利福平耐药结核分枝杆菌实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mycobacterium tuberculosis/rifampicin,Xpert MTB/RIF)在人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病(human immunodeficiency virus infection/acquired immunodeficiency syndrome,HIV/AIDS)患者中诊断结核病的价值,本研究回顾性分析了2018年1月1日—2020年12月31日复旦大学附属公共卫生临床中心感染与免疫科收治的801例HIV/AIDS合并疑似结核病患者的临床资料。801例患者中,657例进行了Xpert MTB/RIF、外周血结核感染T细胞斑点试验(tuberculosis T cell spot test,T-SPOT.TB)、抗酸染色涂片镜检和BACTEC MGIT 960液体培养等检测。以液体培养及菌型鉴定结果作为结核病诊断的“金标准”,确诊结核病92例,Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB、抗酸染色涂片镜检在HIV/AIDS患者中诊断结核病(包括肺结核和肺外结核)的灵敏度分别为72.8%、55.4%和69.6%,特异度分别为96.8%、90.3%和84.4%,与“金标准”行一致性检验,Kappa值分别为0.719 (P<0.01)、0.430(P<0.01)和0.424(P<0.01)。Xpert MTB/RIF检测502份呼吸道样本,结果显示其诊断肺结核的灵敏度和特异度分别为66.7%和96.0%;在痰涂片阳性和阴性的患者中,Xpert MTB/RIF诊断肺结核的灵敏度分别为77.4%和35.2%,特异度分别为87.7%和 97.8%。采用Xpert MTB/RIF检测343份肺外标本,结果显示其诊断肺外结核的灵敏度和特异度分别为63.3%和95.2%。以上结果提示,Xpert MTB/RIF在HIV/AIDS患者中诊断结核病(包括肺结核和肺外结核)具有较高的灵敏度和特异度,诊断肺结核的灵敏度高于肺外结核,因此推荐将其作为HIV/AIDS患者疑似结核病的首选检测方法。     

北京市延庆县非结核病防治机构网络直报肺结核患者就诊及追踪分析

目的:分析2006-2010年北京市延庆县非结核病防治机构网络直报肺结核患者就诊及追踪情况,为进一步推进结核病防控工作提供依据。方法:对2006-2010年延庆县非结核病防治机构网络直报信息管理系统数据进行回顾性描述性分析。结果:2006-2010年延庆县非结核病防治机构网络直报患者主动就诊到位率为90.18%,追踪到位率为67.35%。在主动就诊到位的450例病人中,106人(23.56%)诊断为非结核,被诊断为初治痰涂片阳性、复治痰涂片阳性和初治痰涂片阴性患者分别占主动就诊到位病人的56.67%、1.78%和18.00%。结论:非结防机构是肺结核患者接受治疗的主要场所,在肺结核患者的发现中起着重要的作用。应针对非结核病防治机构网络直报工作中存在的问题采取相应的措施,以提高主动就诊率和追踪到位率。     

结核病诊断技术新进展

结核病疫情亟需快速、有效的诊断方法,但长久以来其诊断一直依靠传统的结核分枝杆菌抗酸染色涂片和培养技术,并不能满足快速诊断的需要。为解决这个全球性的问题,近年来出现了多种结核病新的诊断技术和方法,如新的影像学检查及计算机辅助技术、显微镜学诊断技术、结核分枝杆菌快速培养技术、免疫学诊断技术,以及结核分枝杆菌特异性核酸扩增技术。本文主要介绍几种最有代表性的技术和方法,其中部分技术已获得世界卫生组织(World Health Organization,WHO)的推荐,部分正在进行大规模临床研究或验证,反映了近年来结核病诊断发展的新方向。     

改良离心集菌法检测痰内抗酸杆菌的研究

目的研究改良离心集菌法,测定其是否能使抗酸杆菌的诊断更为安全简便。方法选取传统的抗酸杆菌直接涂片法1＋和1＋以下的阳性标本100例,用改良离心集菌法复检;再配制浓度为10000、5000、1000和100条／mL的痰菌液各100份,分别用直接涂片法和改良离心集菌法检测其检出限和检出率;最后以日常门诊标本1036例分别用两种方法进行临床应用检测和分析。结果100例直接涂片法1＋和1＋以下的阳性标本改为改良离心集菌法复检,结果为4＋有93例、3＋为7例;直接涂片法和改良集菌法的检出限分别为1000和100条／mL;10000、5000、1000和100条／mL的痰菌液用直接涂片法和改良离心集菌法检测其检出率分别为97％、53％、5％、0％和100％、100％、94％、7％。1036例日常标本用直接涂片法和改良集菌法检测的阳性率分别12．74％和16．47％。结论改良离心集菌法的阳性率高于直接涂片法,检出限低于直接涂片法,不但大大改善了实验室和实验人员生物安全,还弥补了直接涂片法中对结核杆菌在痰液中分布不均一性带来的漏检的方法局限性,因此改良离心集菌法是安全、简便的抗酸杆菌实验室值得推广使用的新诊断方法。     

非人灵长类结核病的诊断方法及进展

目前非人灵长类结核病的诊断方法单一,给饲养和管理带来影响。通过总结和讨论人的结核病诊断技术,结合非人灵长类的实际情况,指出在结核病检疫中,虽然结核菌素是经典的早期诊断的方法,但血清抗体的检测是结核菌素试验的有效辅助手段,尤其对无反应猴群的结核病检测具有独特的优势。然而,IFNγ的检测有望替代结核菌素试验,实现体外检测结核病。传统的结核菌培养技术时间长,假阴性多,污染率高,给猴的结核病的确诊带来困难。原位PCR技术,能加快诊断速度,提高检出率,特别有利于对小病灶区的病源诊断。虽然目前该技术还不能替代细菌学诊断技术,但两种方法的有效结合将有利于提高非人灵长类的结核病的病源诊断。     

结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖尿检用于儿童结核病诊断的研究进展

结核病(tuberculosis, TB),特别是儿童结核病,仍是影响全球健康的重要因素。由于传统的结核病诊断技术灵敏度、特异度较差,结核病病例常因为无法得到准确、及时的诊断而被延误治疗。儿童结核病病灶含菌量低,且患儿常无法咳出痰,因此,儿童结核病诊断较成人结核病诊断更具有挑战性。脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan, LAM)是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)细胞壁上的特异性抗原,可以在结核患者的尿液标本中检测到,尿LAM检测有助于快速、准确地诊断结核病。本综述旨在总结LAM检测用于儿童结核病诊断的研究进展。     

通用PCR法在痰标本真菌检测中的临床应用价值分析

目的:探讨通用PCR法在痰标本真菌检测中的临床应用价值。方法:选择2015年9月至2017年9月本院收治的免疫力低下患者178例作为研究资料,各收集痰标本2份,其中一份用于PCR扩增,另一份经培养后若观察到真菌或可疑菌落,则提取后在此进行PCR扩增测序。比较3种方法对真菌的检出情况、真菌阳性率,与组织病理学结果进行比较,分析3种方法的诊断效能。结果:178份痰标本经平板培养可观察到107份真菌生长,其余71份未见真菌生长。挑取真菌及可疑菌落行PCR结果显示阳性、阴性分别115、63份。对痰标本直接PCR结果显示,阳性、阴性分别124、54份。PCR扩增产物测序结果显示大多是白色念珠菌感染,仅3份是曲霉菌感染。内对照扩增验证结果显示有1份阴性标本存在扩增抑制现象。3种方法的真菌阳性率:直接PCR法痰培养后PCR法痰培养,但组间无显著差异(P0.05)。3种方法诊断效能总体趋势:直接PCR法痰培养后PCR法痰培养,其中直接PCR法与痰培养后PCR法的特异度、准确度均显著高于痰培养法(P0.05),直接PCR法的敏感度显著高于痰培养法(P0.05)。结论:通用PCR法在痰标本真菌检测中的临床应用价值较高,直接PCR具有操作简单、快速等优势。     

淋病奈瑟菌感染的实验室诊断技术概述

淋病奈瑟菌是淋病的病原菌,淋病不及时诊断和治疗会引起严重的并发症,早期诊断和治疗是控制淋病传播的关键。试验诊断技术在淋病的诊断和治疗中具有十分重要的作用。目前,常用的试验诊断方法有涂片镜检、分离培养、免疫学方法、分子生物学检查和快速检查等。分泌物直接涂片染色镜检大多常用革兰染色,但是有其局限性,细菌培养是诊断淋病的金标准,也是目前诊断淋病最可靠的方法,但淋病奈瑟菌培养困难,仅做细菌学培养检查,诊断意义有限。随着新仪器的研发以及现代分子生物学理论和技术的发展,快速、准确、特异、敏感的分子生物学技术已经成为试验诊断的重要手段,具有广阔的应用前景,临床上还需要开发新的核酸扩增试验技术,以便更好地指导临床治疗。临床医生在实际诊疗过程中应该根据患者的实际情况正确选择检测方法,有时建议选择两种以上的检测方法以提高阳性检出率。本文就淋病奈瑟菌感染的试验诊断技术的研究进展加以概述。     

P53基因PCR-SSCP银染检查痰标本诊断肺癌初步探索

目的：为了解痰标本检测肺癌患者Ｐ５３基因突变的可行性及其对临床诊断的意义。材料与方法：采用改良Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法浓缩及保存痰标本,部分涂片找癌细胞,其余标本进行痰细胞ＤＮＡ提取及多聚酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）共检测２２例病人,其中确诊肺癌病人１５例（涂片或活检找到癌细胞）、临床高度怀疑肺癌病人５例（涂片或活检均阴性）、２例非肿瘤病人（１例为结节病,另１为左中叶肺炎）,同     

结核分枝杆菌滤过型的初步研究

目的研究结核分枝杆菌滤过型的生物学特性与检测方法。方法菌阴肺结核患者的结核分枝杆菌及其L型的液体培养物经0.45μm滤膜过滤后,涂片观察细菌形态,滤液分别进行分枝杆菌及其L型培养,并采用荧光基因定量法进行结核菌DNA检测。培养物用免疫组化染色鉴定,并采用透射电镜观察。结果30例痰、血滤前、滤后FQ-PCR检测同时阳性为53%,同时阴性为13%,滤前、滤后FQ-PCR结果符合率为67%。滤过后液体培养9例涂片见少许抗酸颗粒或椭圆性球菌。透射电镜见细胞壁缺失的"致密体"样细菌和细胞壁缺如菌。结论菌阴肺结核痰及血培养物中存在结核菌滤过型,滤过型携带遗传信息并可自我复制,采用生物学方法可以对其进行检测。     

痰标本涂片检查与培养结果分析

目的：探讨痰标本涂片检查在细菌培养以及临床治疗中的意义。方法：送检标本首先直接涂片革兰染色镜检,同时将合格痰标本划分为以阴性杆菌、阳性球菌、霉菌为主和普通标本四大类。再对合格痰标本行细菌学培养及药物敏感测定。结果：314份痰标本合格率为62．4％(196／314)。196份合格痰标本共检出145株病原菌,培养阳性率74．0％。涂片以阴性杆菌、阳性球菌、霉菌为主的标本与培养结果符合率分别为93．1％、68．4％和41．2％。结论：痰培养结果的准确性受痰标本是否合格、病原菌的生长速度以及是否使用过大剂量抗生素等因素直接影响。临床医生必须依据临床症状及涂片结果判断作出何种为真正的病原菌。     

抗酸性颗粒的结核流行病学意义

抗酸性颗粒的结核流行病学意义江苏省武进市人民医院武进２１３０００孙建中国内外结核病发病呈上升趋势,探讨抗酸性颗粒（即Ｌ型）对控制结核流行病学意义及临床诊断治疗都是有价值的。１材料与方法１．１标本采自肺结核患者２６２例痰标本,常规涂片,抗酸染色。１．２...     

应用PCR技术检测结核分枝杆菌的临床分析

采用聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｎｓｅ Ｃｈｉａｎ Ｒｅａｔｉｏｎ,即ＰＣＲ）技术检测结核分枝杆菌Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ,一年多来共检测了１００例结核（肺、肾结核）患者的痰和尿液标本,结果ＰＣＲ检出阳性率为８１％,对照用储菌涂片抗酸染色法,阳性率为５８％,用常规培养法阳性率为２０％。而对５０例非结核患者的痰和尿液标本的检测,ＰＣＲ法仍有６％的阳性率,而用涂片或常规培     

我院痰培养标本中病原菌的临床分布及耐药性分析

结合痰培养和痰涂片的结果,比较引起ICU病人和非ICU病人肺部感染的病原菌分布和耐药性的区别.为协助临床诊断和合理用药提供真实可靠的实验依据.监测本院2011年1月至2011年12月普通病房与重症监护室ICU病房送检的痰标本进行涂片及培养并对阳性菌株做药敏实验.经痰涂片发现普通病房送检的标本合格率高于ICU病房,但是ICU病房送检的痰培养标本阳性率高于普通病房;阳性菌药敏的耐药性两者也有不同.病人痰标本的培养结果要结合标本的涂片,并根据病人的临床表现、所在的病房环境进行综合考虑,客观评价后给予合理用药,方能控制医院内多重耐药的蔓延.