三苯氧胺对乳腺癌和宫颈癌细胞增殖的影响

目的：研究三苯氧胺(tamoxifen,TAM)对人乳腺癌Bcap-37和宫颈癌HeLa细胞增殖的影响并探讨其可能的机制。方法：采用细胞培养、细胞计数、MTT、流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术。结果：TAM(10^-6mol／L)使Bcap-37细胞的生长曲线下移,使HeLa细胞的生长曲线上移。TAM(10^-8～10^-6mol／L)剂量依赖性的抑制Beap-37细胞的增殖,促进HeLa细胞的增殖作用。TAM(10^-6mol／L)使Bcap-37细胞发生凋亡,凋亡率达到97．5％,而使HeLa细胞周期由G1期加速向S期转化,G1期的DNA含量由对照组的55．5％下降到加药组的32．8％,S期的DNA含量由对照组的29．0％上升到加药组的49．4％。激光共聚焦检测到TAM(10^-6mol／L)可使Bcap-37细胞和HeLa细胞内的Ca^2 浓度显著升高。结论：TAM可以通过调节细胞周期各阶段DNA含量和胞内Ca^2 浓度水平,从而调节Bcap-37细胞和HeLa细胞的增殖活动,提示使用TAM治疗乳腺癌时可能会对子宫颈产生副作用。     

C-erbB2与乳腺癌三苯氧胺耐药细胞生长关系的研究

目的:探讨获得性三苯氧胺(TAM)抵抗乳腺癌细胞的生长调节途径及三苯氧胺(TAM)获得性抵抗的发生机制。方法:TAM诱导野生型人乳腺癌细胞系MCF-7/WT构建TAM抵抗的细胞系MCF-7/TAMR,RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学方法比较MCF-7/TAMR与MCF-7/WT细胞系中C-erbB2 mRNA、蛋白表达及其活化状态的不同,用C-erbB2单克隆抗体herceptin对两种细胞系进行干预,观察细胞生长变化。结果:与MCF-7/WT细胞相比,MCF-7/TAMR细胞中CerbB-2的mRNA增加3倍(P＜0．05)．蛋白增加1．5倍(P＜0．05)．Herceptin处理MCF-7/TAMR细胞,明显抑制了细胞的生长。结论:表皮生长因子受体特异性配体的自分泌释放作用可能通过CerbB-2/MAPK途径引起MCF-7/TAMR细胞的生长。     

多西紫杉醇与紫杉醇联合顺铂同步放化疗治疗晚期宫颈癌的疗效比较

目的:比较多西紫杉醇与紫杉醇联合顺铂同步放化疗治疗晚期宫颈癌的疗效。方法:选择2006年6月至2012年6月我院收治的宫颈癌晚期患者180例作为研究对象,依据随机数字表将患者分为紫杉醇组(n=90)和多西紫杉醇组(n=90),两组患者在放疗基础上分别接受紫杉醇135 mg/m~2,每周1次,多西紫杉醇25 mg/m~2,每周1次,4周一疗程,维持两个疗程,比较两组患者的近期疗效、生存时间和毒副作用发生情况。结果:紫杉醇和多西紫杉醇组近期治疗的总有效率分别为81.11%和87.78%,差异无统计学意义(P=0.217);且均未出现进展期的病例。紫杉醇组3年生存率为58.89%,明显低于多西紫杉醇组的75.56%,差异有统计学意义(P=0.017);紫杉醇组骨髓抑制和消化道反应的发生率分别为35.56%和37.78%,明显高于多西紫杉醇组的22.22%和26.67%,差异有统计学意义(均P0.05)。结论:多西紫杉醇联合顺铂同步放化疗治疗晚期宫颈癌能显著提高患者3年生存率,降低毒副作用发生率,且用药量更少,相对安全、合理,患者可耐受,值得进一步临床研究。     

耐三苯氧胺乳腺癌异种移植瘤动物模型建立与评价

目的：建立耐三苯氧胺（TAM）人乳腺癌的裸鼠移植瘤模型,为研究和治疗乳腺癌对TAM耐药提供研究工具。方法：采用雌激素受体阳性,对TAM耐药的人乳腺癌细胞系LCC2,接种于BALB/c裸鼠皮下,观察肿瘤生长趋势,用免疫组化方法进行鉴定。结果：在接种细胞数大于5×106/只时,Matrigel能够显著促进移植瘤的生长。肿瘤组织病理学检测证实为浸润性导管癌,且Pgp和Her-2为阳性表达。结论：该方法建立的耐TAM人乳腺癌移植瘤模型,周期短,成瘤率高,保留了与细胞系相同的肿瘤生物学特征。     

耐三苯氧胺乳腺癌异种移植瘤动物模型建立与评价

目的:建立耐三苯氧胺(TAM)人乳腺癌的裸鼠移植瘤模型,为研究和治疗乳腺癌对TAM耐药提供研究工具。方法:采用雌激素受体阳性,对TAM耐药的人乳腺癌细胞系LCC2,接种于BALB/c裸鼠皮下,观察肿瘤生长趋势,用免疫组化方法进行鉴定。结果:在接种细胞数大于5×106/只时,Matrigel能够显著促进移植瘤的生长。肿瘤组织病理学检测证实为浸润性导管癌,且Pgp和Her-2为阳性表达。结论:该方法建立的耐TAM人乳腺癌移植瘤模型,周期短,成瘤率高,保留了与细胞系相同的肿瘤生物学特征。     

紫杉醇脂质体联合顺铂同步放疗对老年宫颈癌有较好疗效

本研究将178例具有危险因素的老年宫颈癌术后患者随机分为研究组和对照组各89例,对照组给予紫杉醇联合顺铂同步放化疗方案,研究组给予紫杉醇脂质体联合顺铂同步放化疗方案,观察2组患者治疗期间的毒副反应及1年、2年、3年生存率、局部复发率和远处转移率,以期探讨老年宫颈癌患者术后不同化疗方案联合同步放疗的有效性和安全性。研究结果表明:研究组骨髓抑制、消化道反应、肝肾功能异常、脱发发生率低于对照组(p<0.05);研究组1年、2年、3年生存率与对照组相比较均无统计学差异(p>0.05);研究组与对照组1年、2年、3年局部复发率和远处转移率相比较差异均无统计学意义(p>0.05)。本研究初步结论认为,老年宫颈癌患者术后采用紫杉醇脂质体联合顺铂同步放化疗方案更为安全有效,采用紫杉醇脂质体代替紫杉醇注射液值得在临床推广应用。     

紫杉醇联合顺铂和氟尿嘧啶治疗进展期胃癌的疗效观察

目的:研究紫杉醇(PTX)联合顺铂(DDP)和氟尿嘧啶(5-Fu)治疗进展期胃癌的疗效及不良反应,以期提高进展期胃癌手术的根治性切除率,改善病人的预后,为胃癌患者的治疗提供理论依据,进而丰富进展期胃癌治疗方法。方法:36例经病理学或细胞学确诊为进展期胃癌的患者,给予紫杉醇35 mg/m2,第1、8天静滴,顺铂20 mg/(m2·d),第1、2、3天静滴,氟尿嘧啶500 mg/m2持续静滴,第1~5天,28天为1个周期,连用2个周期后评价疗效。按照实体瘤疗效评价标准(RECIST)评价客观疗效,按世界卫生组织(WHO)标准评价不良反应。结果:所有患者均接受2个周期的化疗后进行治疗效果的评价。36例进展期胃癌中2例达到CR,17例PR,9例SD,8例PD,总有效率为52.8%,临床受益率为72.2%。镜检25例(69.4%)出现组织病理学改变,如肿瘤组织坏死、淋巴细胞浸润、癌细胞凋亡、以及间质水肿纤维组织增生等。主要毒性反应为骨髓抑制、消化道反应和脱发,其中白细胞减少发生率为47.2%,恶心、呕吐的发生率为41.7%,脱发反应发生率为55.6%。全组未见化疗相关性死亡。结论:紫杉醇联合顺铂和5-氟尿嘧啶的联合化疗方案是治疗进展期胃癌具有较好的总有效率和临床受益率,毒副反应可耐受,可使肿瘤组织产生显著的组织病理学改变,可改善患者的生存质量,是治疗进展期胃癌有效安全的方法之一,值得进一步研究。     

C—erbB2与乳腺癌三苯氧胺耐药细胞生长关系的研究

目的：探讨获得性三苯氧胺（TAM）抵抗乳腺癌细胞的生长调节途径及三苯氧胺（TAM）获得性抵抗的发生机制。方法：TAM诱导野生型人乳腺癌细胞系MCF-7/WT构建TAM抵抗的细胞系MCF-7／TAMR,RT—PCR、Westem blot及免疫细胞化学方法比较MCF-7／TAMR与MCF-7/WT细胞系中C—erbB2mRNA、蛋白表达及其活化状态的不同,用C—erbB2单克隆抗体herceptin对两种细胞系进行干预。观察细胞生长变化。结果：与MCF-7/WT细胞相比,MCF-7／TAMR细胞中cerbB-2的mRNA增加3倍（P〈0．05）,蛋白增加1．5倍（P〈0．05）。Herceptin处理MCF-7／TAMR细胞,明显抑制了细胞的生长。结论：表皮生长因子受体特异性配体的自分泌释放作用可能通过CerbB-2／MAPK途径引起MCF-7／TAMR细胞的生长。     

长春瑞滨联合顺铂治疗三阴性乳腺癌的临床观察

目的：观察长春瑞滨联合顺铂治疗三阴性乳腺癌临床疗效。方法：选择我院2007年5月～2011年8月期间收治经细胞学或病理学诊断并确诊TNBC患者85例,术后免疫学化疗证实ER、PR、HER-2均呈阴性,随机分组入试,长春瑞滨联合顺铂（NP组）45例,第1、8天予以静脉滴注长春瑞滨25 mg/m2,前3天辅以顺铂25 mg/m2滴注,21天为1个周期,治疗2个周期后观察临床疗效;紫杉醇联合顺铂（TP组）40例,第1天小剂量滴注紫杉醇135～175 mg/m2,,顺铂用量、用法及用药周期同上所示。对比观察病症缓释情况和毒副作用。结果：NP组总有效率（RR）48.89%,控制率（PD）为77.78%,TP组总有效率（RR）为37.50%,控制率（PD）55.56%,两组间有效率及控制率比较差异有统计学意义（P〈0.05）。两组常见毒副反应为骨髓抑制、消化道和胃肠道反应。NP组消化道反应和骨髓抑制微重于TP组,两组间比较有显著差异（P〈0.05）。结论：长春瑞滨联合顺铂（NP）新辅助化疗方案针对三阴性乳腺癌患者耐受性好、毒副反应较小、有效率高、不良反应可逆等优势,可作为临床推广药物。     

紫杉醇、长春瑞滨联合顺铂方案治疗晚期乳腺癌的临床疗效

目的:探讨紫杉醇(PTX)、长春瑞滨(NVB)两药与顺铂(DDP)联用方案对晚期乳腺癌的临床疗效及副反应。方法:将2009年2月至2014年2月于我院就诊的60例晚期乳腺癌患者随机分为TP方案和NP方案两组,每组30例。TP方案组:顺铂25mg/m2,d1~d3,紫杉醇175 mg/m2,d1;NP方案组:顺铂25 mg/m2,d1~d3,长春瑞滨25 mg/m2,d1和d8。比较两组患者的临床有效率并记录相关不良反应。结果:TP方案有效率56.7%(17/30),中位缓解期7.5个月。NP方案有效率53.3%(14/30),中位缓解期7.7个月。组间疗效及缓解期差异无统计学意义(P0.05)。TP与NP方案组出现血小板减少、白细胞减少、贫血、恶心呕吐的发生率分别为26.7%、76.7%、56.7%、43.3%和26.7%、76.7%、56.7%、43.3%,两方案血液毒性差异无统计学意义(P0.05)。静脉炎及关节肌肉反应的发生率分别为30.0%、13.3%和16.7%53.3%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:紫杉醇、长春瑞滨与顺铂联用治疗晚期乳腺癌疗效相当,不良反应可耐受,都可做为晚期乳腺癌治疗的一线用药方案。     

siRNA对乳腺癌细胞Cyclin E表达和生长抑制作用

研究siRNA对乳腺癌MCF-7细胞株cyclin E表达的抑制及对细胞生长的影响。化学合成针对cyclin E基因的小干扰RNA（siRNA）,转染MCF-7细胞株;分别应用荧光定量PCR和免疫印迹测定cyclin E mRNA和蛋白质的表达,CCK-8测定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,软琼脂培养检测细胞克隆形成能力。10、50、100nmol／L siRNA-cyclin E分别使MCF-7细胞cyclin E基因表达降低了24．7％、62．5％和71．0％,蛋白质表达降低了40．8％、66．5％和71．3％。转染siRNA-cyclin E后,G1期细胞增多,S期减少,增殖受到抑制,软琼脂克隆形成率降低。结果提示,在MCF-7细胞株中,导入针对cyclin E的siRNA,可有效抑制cyclin E的表达,进而使细胞增殖减缓,逆转其恶性表型。     

靶向VEGF小干扰RNA协同5-FU诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡机制的研究

探讨慢病毒介导的靶向VEGF小干扰RNA联合应用化疗药物5 FU诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制。以携带VEGF siRNA的慢病毒载体感染MCF-7细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测各组VEGF mRNA、VEGF蛋白及凋亡相关蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,慢病毒VEGF siRNA干扰组细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组,凋亡相关蛋白P53及P21表达上调,而SIRT1、Bcl-2及Survivin表达下调。流式细胞术检测显示慢病毒干扰组及5-FU组细胞凋亡率显著升高,联合治疗组的协同作用更为明显。上述结果表明：慢病毒介导的RNA干扰能明显抑制MCF-7细胞VEGF的表达,通过下调SIRTI蛋白的表达,导致P53蛋白表达上调,并调控其下游P21、bcl-2和Survivin的表达,从而诱导MCF-7细胞的凋亡,并且提高了MCF-7对5-FU的敏感性。     

利用小干涉RNA抑制肿瘤细胞MCF-7中NF-IL6的表达

RNA干扰被证明是-项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。转录因子NF-IL6特异地在肿瘤组织中过量表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。构建能够沉默转录因子NF-IL6表达的小干涉RNA（siRNA）质粒,转染肿瘤MCF-7细胞后,用Western印迹法和荧光酶活性实验检测NF-IL6表达水平和转录活性的改变。结果发现NF-IL6的表达水平被下调80％,转录激活能力降低了60％,转染细胞内部出现大量空洞,细胞增殖停滞。     

Insulin-Like Growth Factor-1 Signaling Regulates miRNA Expression in MCF-7 Breast Cancer Cell Line

In breast carcinomas, increased levels of insulin-like growth factor 1 (IGF-1) can act as a mitogen to augment tumorigenesis through the regulation of MAPK and AKT signaling pathways. Signaling through these two pathways allows IGF-1 to employ mechanisms that favor proliferation and cellular survival. Here we demonstrate a subset of previously described tumor suppressor and oncogenic microRNAs (miRNAs) that are under the direct regulation of IGF-1 signaling. Additionally, we show that the selective inhibition of either the MAPK or AKT pathways prior to IGF-1 stimulation prevents the expression of previously described tumor suppressor miRNAs that are family and cluster specific. Here we have defined, for the first time, specific miRNAs under the direct regulation of IGF-1 signaling in the estrogen receptor positive MCF-7 breast cancer cell line and demonstrate kinase signaling as a modulator of expression for a small subset of microRNAs. Taken together, these data give new insights into mechanisms governing IGF-1 signaling in breast cancer.     

脱氧核酶抑制Akt1基因对MCF-7乳腺癌细胞生长的影响

目的应用脱氧核酶抑制Akt1的表达,观察MCF-7乳腺癌细胞生长及凋亡情况。方法采用噻唑蓝比色法（MTT）检测脱氧核酶抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖作用;DAPI染色法分析细胞凋亡形态学的变化;流式细胞术检测脱氧核酶对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响;运用蛋白免疫印迹检测分析Akt1、pro—caspase-3、pro-caspase-9的变化。结果Aktl脱氧核酶对MCF-7乳腺癌细胞在体外的生长具有抑制作用;DRz1组的细胞早期凋亡率显著高于未处理组;荧光显微镜下可见典型的凋亡形态学变化;脱氧核酶作用后,免疫印迹检测Aktl蛋白表达降低,pro—caspase-3、9均被活化。结论AktlDRzl能有效下调MCF-7乳腺癌细胞Akt1的蛋白表达水平,抑制MCF-7细胞的生长,且凋亡途径可能依赖于caspase-3、9的相关的线粒体凋亡途径。     

重组人内皮抑素联合TP方案对MCF-7裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨重组人内皮抑素联合TP方案对MCF-7裸鼠移植瘤模型血管生成及肿瘤生长的作用.方法:将36只荷瘤鼠随机分为A、B两大组,A、B两大组内均设有单一化疗组、联合用药组及对照组;单一化疗组给予紫杉醇 顺铂(TP方案).联合用药组给予重组人内皮抑素 TP,对照组等体积生理盐水;比较A大组内各组裸鼠的抑瘤率,肿瘤生长曲线.ELISA方法检测血清血管内皮生长因子(VEGF),取肿瘤组织病理切片观察微血管密度(MVD)、凋亡指数,并观察B组所有动物生存期.结果:联合用药组VEGF,MVD,较单一化疗组及对照组低,凋亡指数比单一化疗组高,有统计学差异(P＜0.05),联合用药组与化疗组生存时间的差异无统计学意义(P＞0.05),与对照组比较有统计学差异,生存时间较对照组长(P＜0.05).结论:重组人内皮抑素联合TP方案对MCF-7裸鼠移植瘤对肿瘤生长及肿瘤血管抑制优于单一化疗,但1个周期联合化疗用药不能延长生存期.     

丙戊酸钠协同阿霉素抑制MUTZ-1细胞株增效作用的研究

目的:探讨丙戊酸钠协同阿霉素对MUTZ-1细胞株生长的抑制作用及其作用机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察药物对细胞生长的影响;发光比色法检测Caspase-3的活性.结果:小剂量丙戊酸钠可协同阿霉素抑制MUTZ-1细胞株生长,细胞生长抑制率在两药联合作用后比单独使用阿霉素明显增加,有剂量依赖性,与对照组相比有显著统计学意义.单药使用阿霉素时细胞的caspase-3活性上升,两药联合后caspase-3活性上升更明显.结论:小剂量的丙戊酸钠能增敏阿霉素诱导MUTZ-1细胞株发生凋亡,作用机制可能是通过上调caspase-3的活性来完成的.     

磺化壳聚糖对MCF-7的体外抑制作用研究

目的:研究磺化壳聚糖(SCTS)对体外培养的人乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡的作用.方法:用不同浓度磺化壳聚糖对体外培养人乳腺癌细胞MCF-7进行干预,MTT法检测SCTS对MCF-7细胞增殖的抑制作用;显微荧光法、流式细胞术检测细胞凋亡.结果:磺化壳聚糖抑制MCF-7细胞增殖,且呈时间、剂量依赖性;镜下可见凋亡细胞的形态学改变、FCM显示G0/G1期细胞增加,而S期细胞减少.结论:磺化壳聚糖可有效抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,促进细胞凋亡.     

谷氨酸对大鼠脂肪干细胞诱导分化神经细胞的影响及机制

目的:研究谷氨酸(Glu)对大鼠脂肪干细胞Adipose-derived stem cells(ADCSs)诱导分化神经细胞的作用及机制。方法:取成年大鼠腹股沟脂肪组织进行体外细胞培养,采用免疫组化方法检测证实为ADSCs。对照组为正常培养的ADSCs并诱导分化神经细胞,谷氨酸(Glu)处理组加入不同浓度的Glu,MTT比色法观察脂肪干细胞的存活率。结果:从ADSCs诱导分化的细胞包括神经元及神经胶质细胞,免疫组化结果显示神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色阳性和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性。Glu处理组给药24h后,与对照组比较ADSCs存活率明显降低,50μmol·L-1Glu组细胞存活率为83.98%,与对照组比较差异无显著性(P>0.05);100及1000μmol·L-1Glu组干细胞存活率(分别为66.82%和17.08%)低于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:Glu对ADSCs有损伤作用,随着Glu剂量的增加,ADSCs的存活率逐渐降低,二者呈剂量依赖关系。