高效草菇分子标记辅助杂交育种方法的建立与应用

【目的】建立一种高效草菇分子标记辅助杂交育种方法,并将其应用于选育低温高产草菇的单孢杂交中。【方法】通过出菇试验筛选获得高产草菇菌株,与低温出菇菌株VH3一同作为杂交亲本;采用交配型基因分子标记区分草菇单孢子的交配型,并完成杂交配对工作;最后结合快速筛选耐低温草菇菌种技术与杂交子真实性的鉴定方法,在栽培出菇试验前剔除部分不耐低温的草菇杂交子。【结果】出菇试验表明,屏优1号的生物转化率最高,用作杂交育种的高产亲本菌株。单孢杂交配对后,最初的496株草菇可能杂交菌株经初筛后,只剩余172株较耐低温的杂交菌株,使后期出菇试验的工作量减少了65%;杂交子出菇试验表明,在28 °C出菇温度下,VV093杂交菌株的生物转化率显著高于两个亲本菌株,且农艺性状较好。【结论】建立了一种高效草菇分子标记辅助杂交育种的方法,包括亲本菌株的筛选、单孢交配型的区分、单孢杂交、杂交子的鉴定和筛选等,并在低温高产草菇单孢杂交育种中成功应用。     

稀土动植宝在草菇丰产栽培上的应用技术

草菇又叫兰花菇、包脚菇。其营养丰富 ,粗蛋白含量高达37.4% ,每百克鲜菇含维生素Ｃ 15 8.5毫克 ,还含有组成人体蛋白质的 2 0种氨基酸。新鲜草菇脆嫩可口 ,食味甚佳 ,制成干菇香味更浓。此外还可加工成罐头、粉和酱油 ,是深受国内外消费者欢迎的食用菌。 (1)在草把堆叠栽培法上应用 ,播菌种后一般 7- 8天菌丝即可长满草把料面 ,此时拿走旧报纸等遮光物。 2 - 3天后即出现菌丝扭结 ,此时可揭去料面覆盖的薄膜。每天向空中喷水 2 - 3次 ,以提高空气对湿度。 1～ 2天后即可出现菇蕾 ,此时空气相对湿度应提高到 90 %以上 ,并用每毫升稀土动植宝…     

小包脚菇属分类研究进展

小包脚菇属Volvariella又名草菇属,是一类具有较高经济价值的食用真菌,著名的栽培食用菌草菇Volvariella volvacea即为该属成员。文中从小包脚菇属的分类历史、资源现状、分子系统学研究等方面进行了综述。小包脚菇属分类研究存在的主要问题是形态学研究的分类特征相对较少,已有的分子系统学研究涉及的类群和基因片段偏少,不能很好的反映种、属间的系统发育关系,其确切分类地位需进一步研究;解决上述问题是今后小包脚菇属分类研究的主要方向。     

聚赖氨酸联合1-MCP处理对草菇保鲜效果的影响

草菇营养丰富,但不耐贮藏,现有保鲜方法无法有效延长其贮藏期,因此延长草菇保鲜期是草菇产业化工厂生产亟待解决的关键技术。本研究以V23草菇为材料,分别用1-甲基环丙烯（1-MCP）、聚赖氨酸（ε-PL）、ε-PL联合1-MCP处理草菇,比较不同处理方法对贮藏期草菇感官、理化品质的影响,筛选出草菇贮藏的最优方法。结果表明：与其他处理组相比,ε-PL联合1-MCP处理能显著减少草菇的水分散失、保持菇体质构及表面色泽（P<0.05）;最佳组合处理浓度为0.3g/kg ε-PL和0.75µL/L 1-MCP,该处理下草菇能够保持良好的感官品质,维持较高水平的CAT、SOD活性,减少失水和MDA积累,抑制PPO活性,与其他不同处理组相比有显著性差异（P<0.05）。研究表明,0.3g/kg ε-PL联合0.75µL/L 1-MCP处理可以显著延长草菇货架期,为食用菌保鲜提供一个新思路。     

聚赖氨酸和1-MCP联合处理对草菇贮藏期间表面细菌变化的影响

【背景】草菇具有很高的营养价值和药用价值,草菇采后品质易劣变主要是由其表面腐败菌引起的。保鲜处理条件下草菇表面菌的研究目前未见相关报道。【目的】探究聚赖氨酸(ε-polylysine,ε-PL)和1-甲基环丙烯(1-methylcyclopropene,1-MCP)联合处理对草菇贮藏期间表面细菌变化的影响。【方法】采用平板培养与16S rRNA基因高通量测序技术两种方法,分离、鉴定ε-PL和1-MCP联合处理后草菇贮藏期间的表面微生物,确定草菇贮藏期间菇体表面优势腐败菌。【结果】平板培养法结果表明,草菇子实体表面的菌落总数随着贮藏时间的延长逐渐上升。贮藏6d时,处理组(PC)草菇表面菌落总数为7.16 lg (CFU/g),极显著(P<0.01)低于CK组[7.42 lg (CFU/g)];从PC组、CK组分离鉴定的细菌分别为16株和19株,以假单胞菌属、金黄杆菌属、芽孢杆菌属和寡养单胞菌属为主;16S rRNA基因高通量测序结果表明,PC组共鉴定出370个属的细菌隶属于27个门;CK组共鉴定出366个属的细菌隶属于25个门;寡养单胞菌属为相对丰度最高的优势菌。【结论】寡养单胞菌...     

生理生化指标与草菇开伞时间的相关性分析

通过对保藏在福建农林大学菌物研究中心的36株不同来源的草菇菌株菌丝阶段8个生理生化指标检测并做出菇实验,探究草菇性状的多样性及各因素与草菇子实体开伞时间的相关性。结果表明:供试菌株中各性状的变异系数都比较少,品种资源均一化程度较高;二次多项式逐步分析获得了一个拟合程度较好的草菇开伞情况预测模型,根据方程得出果胶酶、漆酶、羧甲基纤维素酶(CMC酶)、菌丝浓密度、耐酸能力以及它们的互作对草菇开伞有密切关系,作用力从大到小为果胶酶耐酸能力与果胶酶互作CMC酶漆酶与果胶酶互作耐酸能力菌丝浓密度与CMC酶的互作菌丝浓密度与漆酶互作耐酸能力与漆酶互作漆酶,而菌丝生长速度、多酚氧化酶、木聚糖酶对草菇开伞难易影响不大。     

草菇厚垣孢子的生物学特性

草菇(Volvariella volvacea)的有性过程以同宗结合为主。即可以不经过两株不同单孢子形成的初生菌丝配命,就可以形成能结菇的次生菌丝。草菇菌丝体不论其环境条件适宜与否,当生长到一定时期,总要形成厚垣孢子(Chlamydospore)。草菇的厚垣孢子呈圆形,直径40-60微米,红褐色至棕褐色。它的萌发温度略高于孢子,约39-41℃。萌发时先伸出一芽管;有的厚垣孢子萌发后膨大产生新的厚垣孢子,似芽殖分裂;有的则直接形成新的次生菌丝体。试验证明,草菇在营养基质十分贫瘠或在营养丰富的条件下,都能产生厚垣孢子。普遍认为,厚垣孢子的形成是草菇的遗传生理特性,而不是由于不良环境引起的。这一点与过去的说法不同。草菇的初生菌丝与次生     

草菇子代单孢菌株的菌落类型与A因子分布规律研究

根据菌株在培养皿中的生长情况,草菇V23的124个单孢分离菌株可分为气生型和匍匐型两大类,气生型菌株为44株,匍匐型菌株为80株。根据草菇A因子相关特异性分子标记,PCR验证单孢萌发菌株的A因子中的A1、A2分子标记的分布情况,探讨了A因子与不同菌落形态的相关性。试验结果表明:124株菌株中,同核体101株,异核体为23株,所占比例分别为81.45%和18.55%。气生型的草菇单孢菌株A1因子为20株,占气生型菌株比例为45.45%,气生型的草菇单孢菌株A2因子为15株,其比例为34.09%;匍匐型的草菇单孢菌株A1因子为15株,占匍匐型菌株比例为18.75%,匍匐型的草菇菌株A2因子为51株,其比例为63.75%,未能发现A因子与菌落形态之间的明显相关性。选用不同A因子,不同菌落表型的草菇菌株相互交配,经PCR筛选,获得20株真正的杂交菌株,杂交菌株的菌落形态气生型与匍匐型占的比例为1:1。表明只要气生型菌丝参与杂交,其杂交菌株的菌落形态则是以气生型为主;匍匐型与匍匐型杂交后的菌丝也不全是气生型,而是以匍匐型为优势群体。选取8株杂交菌株进行岀菇,只有1株产生子实体。     

“食用菌”的教学参考资料

对人类有益的真菌一般分为食用真菌和药用真菌。我国主要的食用菌大约有360多种,但是被广泛食用的只有25种,如:双孢蘑菇、香菇、平菇、草菇、黑木耳、银耳、松菇、滑菇、凤尾菇、朴菇、口蘑、猴头、竹荪、羊肚菌、鸡(土从)、鸡油菌、牛肝菌等。茯芩、猪苓、灵芝、雷丸、马勃、冬虫夏草、密环菌、麦角菌等则列为药用菌。食用菌的绝大多数有医疗价值,药用菌的大多数都能食用,两类并无严格的区别。     

草菇子实体多肽提取工艺及其抗氧化活性

为了优化草菇子实体多肽的提取工艺和探究其抗氧化活性,以草菇子实体为原料,采用酶解法提取草菇子实体多肽,通过单因素试验得出最佳的酶解工艺,并使用Box-Behnken设计试验组合。结果表明：草菇子实体提取多肽的最佳工艺为料液比1:52 (g/mL)、加酶量7 200 U/g、酶解温度43 ℃,此工艺条件下的多肽得率为67.76%。从1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力、铁离子还原能力、超氧阴离子自由基清除能力和羟自由基清除能力4个方面研究其体外抗氧化能力,结果表明,草菇子实体多肽对DPPH自由基清除率为74.11%,超氧阴离子自由基和羟自由基清除率分别在69.64%和91.83%达到稳定,草菇子实体多肽还具有一定的还原力,说明草菇子实体多肽可以作为优质抗氧化肽的良好来源。该研究为草菇多肽的高效制备和抗氧化肽等高附加值产品的研发提供理论依据。     

草菇Vvrin1基因RNAi转化子的筛选及其转录组分析

草菇味道鲜美,食用价值高,是我国主要栽培的商业食用菌之一。MADS-box转录因子对真核生物的生长发育和信号传导具有关键性的调控作用。本研究通过农杆菌介导的方法获得5个草菇MADS-box转录因子Vvrin1基因的RNA干扰转化子,并进一步对转化子的表型进行分析,发现5个转化子菌丝在PDA固体培养基和栽培料中的生长速度均显著小于（P<0.05）转化野生型菌株H1521,且转化子菌丝颜色呈黄白色,较粗,较稀疏。出菇实验发现,RNA干扰转化子生长停滞在菌丝阶段未能形成原基出菇。转化子菌丝阶段的转录组测序数据发现,上调基因主要富集在核糖体、氨基酸生物合成和次生代谢物的生物合成等途径;下调基因主要富集在MAPK信号通路、脂肪酸氧化、磷脂酰肌醇信号系统等途径。进一步推测MADS-box转录因子Vvrin1基因表达水平降低会影响MAPK信号通路和磷脂酰肌醇信号通路的表达,进而降低菌丝生长速度,影响原基形成。     

THP基因的重新克隆及草菇表达载体的构建

草菇 (Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａｖｏｌｖａｃｅａ)是一种高温型的食用菌 ,在 4℃低温条件下 ,其菌丝自溶死亡 ,子实体发软、液化直至腐烂[1～ 3 ] 。草菇的这一特性严重地限制了草菇的生产、新鲜草菇的流通、低温冷冻保鲜和出口创汇以及草菇菌种的低温冷冻储藏。草菇是同宗结合的真菌 ,生活史复杂[4 ] ,菌丝没有锁状联合 ,杂种选择缺乏标记 ,这给草菇的杂交育种带来极大的困难[5,6] 。基因工程的发展为解决草菇不耐低温冷藏这一难题提供了可能。ＴＨＰ(ＴｈｅｒｍａｌＨｙｓｔｅｒｅｓｉｓＰｒｏｔｅｉｎ)基因—热滞后蛋白基因 ,是加拿大科学…     

竹荪简介

至今国内外已经发现的食用菌约有400种,我国各地常见的有平菇、凤尾菇、草菇、松菇、香菇、蘑菇、口蘑、金针菇、羊肚菌、牛肝菌、青头菌、构菌、鸡纵、银耳、黑木耳、猴头菌、灵芝、茯苓等。竹荪也是食用菌大家庭中的一员,从野生采集到人工栽培的历程中,它是后起之秀,是食用菌中的佼佼者。     

MADS-box转录因子编码基因Vvrin1在草菇不同发育时期的表达分析

草菇是我国土特产出口的主要种类之一,而采后易开伞问题限制了草菇的贮藏及运输。MADS-box转录因子对植物的成熟衰老和真菌的子实体发育起到重要的调控作用。目前尚未见草菇MADS-box转录因子的相关报道。本研究通过生物信息方法及分子生物学的手段对草菇的基因组、转录组数据进行分析,获得了草菇MADS-box转录因子基因Vvrin1。该基因全长1 392bp,含2个内含子,编码419个氨基酸残基。该转录因子含有一个MADS-box结构域,序列与双孢蘑菇Agaricus bisporus、斑玉蕈Hypsizygus marmoreus和灰盖鬼伞Coprinopsis cinerea的MADS-box转录因子相似性分别为71%、67%和61%。通过表达谱数据及荧光定量PCR分析表明Vvrin1基因在草菇子实体伸长期菌柄的表达量出现高峰,具有极显著性差异（P<0.01）,推测该转录因子参与调控草菇菌柄的伸长,菌盖的开伞。这些结果为草菇成熟衰老（特别是开伞）的调控研究提供数据支持。     

参与草菇子实体分化的VvHox1基因的鉴定及表达分析（英文）

通过草菇基因组注释,得到一含有同源框(homeobox)保守结构域的转录因子VvHox1,根据其在草菇不同生长发育阶段的基因表达量变化,推测其可能与草菇的子实体分化相关。利用转录组数据分析该基因结构,发现VvHox1由2 856个碱基组成,包含4个外显子和3个内含子。荧光定量PCR和数字基因表达谱结果显示VvHox1在草菇的异核菌丝体、原基期和蛋形期的表达量不断升高,并且在蛋形期表达量达到最高,但是,在伸长期的表达量却显著下降。因此,我们推测转录因子VvHox1可能调控子实体发育过程中的相关基因,从而影响草菇子实体的形态发生。     

草菇锰过氧化物酶编码基因生物信息学分析及其转录水平和酶活性的测定

在草菇全基因组中发现了4个担子菌锰过氧化物酶MnP基因同源物(vv-mnp1、vv-mnp2、vv-mnp3和vv-mnp4)的基础上,对这4个MnP进行了生物信息学分析,并对其基因表达和酶活性进行测定。结果表明vv-mnp1与vv-mnp2基因结构相同,vv-mnp3与vv-mnp4基因结构相似。在4个草菇MnP基因启动子区域存在AP-2、cAMP、MRE、XRE和HSE等调控元件,预示着草菇中MnP基因的转录可能会受到氮源、碳源、重金属离子、芳香族化合物以及热击的影响。草菇MnP具有信号肽,不存在跨膜区域,表明其是分泌蛋白。草菇MnP中形成4个二硫键的8个半胱氨酸、潜在的锰离子和钙离子结合位点,在担子菌MnP中高度保守。系统进化树分析显示草菇MnP1和MnP2与香菇MnP1亲缘关系最近,而MnP3和MnP4与灰盖鬼伞过氧化物酶有较近的亲缘关系。RT-PCR检测到vv-mnp1、vv-mnp3与vv-mnp4能在含锰离子的培养基中表达,但运用锰离子氧化法没有检测到MnP活性,推测草菇中的MnP不具有将Mn2+氧化成Mn3+的能力。     

草菇蛋白酶的分离、纯化及等电点的测定

草菇是我国食用菌主要栽培品种之一,属典型高温真菌。低温将诱导草菇细胞内的蛋白质降解,导致草菇菌丝自溶、死亡。蛋白酶在草菇低温自溶过程中起了重要作用。在分离、纯化草菇蛋白酶的基础上,采用等电点聚焦电泳测定了蛋白酶的等电点,为草菇低温自溶与蛋白酶之间的关系的研究奠定了基础。     

草菇蛋白酶的分离、纯化及等电点的测定

草菇是我国食用菌主要栽培品种之一,属典型高温真菌。低温将诱导草菇细胞内的蛋白质降解,导致草菇菌丝自溶、死亡。蛋白酶在草菇低温自溶过程中起了重要作用。在分离、纯化草菇蛋白酶的基础上,采用等电点聚焦电泳测定了蛋白酶的等电点,为草菇低温自溶与蛋白酶之间的关系的研究奠定了基础。     

杨树菇凝集素AAVP具有抗病毒和促进菌丝分化功能

杨树菇凝集素 (AAVP)是一种新的真菌凝集素 .用半叶法检测证明 ,AAVP具有抑制烟草花叶病毒 (TMV)侵染的活性 .等电聚焦法证实了AAVP可以与TMV的外壳蛋白结合 .用滤纸圆片法检测 ,AAVP对 3种植物病原真菌没有抑制作用 .AAVP滴加在菌丝的表面 ,显著地促进了杨树菇和毛木耳的菌丝分化 ,促进子实体的形成 .Western印迹表明 ,AAVP存在于菌丝、菌柄和菌盖等组织中 ;假猴头 ,香菇 ,草菇 ,杏孢菇 ,灵芝等大型真菌的子实体中存在着多种与AAVP的抗血清有交叉反应的蛋白质 .大多数大型真菌中可能存在着与AAVP具有相似血清学特征的蛋白质家族 ,在防御反应及菌丝分化等多种生理过程中发挥重要的作用     

草菇冷诱导基因Cor1在低温下表达变化的研究

将草菇菌株V23和耐低温诱变草菇菌株VH3的菌丝在4℃下处理不同时间,分别提取RNA,反转录获得cDNA作为模板,构建含Cor1基因和GPD内标基因片段的质粒作为标准品,采用荧光定量PCR技术研究Cor1基因在低温下的表达变化。结果表明草菇V23菌株的Cor1基因未经低温处理的表达量最大,低温处理后表达量持续下降,在6h达到最低值,8h开始该基因的表达量上升;而VH3菌株Cor1基因低温处理后表达量明显增加,2h达到最大值,4h下降,但6h开始上升,10h又下降。通过推测Cor1基因表达与草菇耐低温特性有相关性,为今后利用草菇自身的抗寒机制进行遗传改造提供理论依据。