凋亡相关基因p53、bcl-2在乳腺导管非典型增生中表达的研究

为观察凋亡相关基因-p53,bcl-2在乳腺导管非典型增生及乳腺癌中的表达,探讨其与乳腺癌组织发生的关系。本实验应用原位杂交方法检测凋亡相关基因p53,bcl-2mRNA,应用免疫组织化学方法检测p53蛋白在44例乳腺导管非典型增生组织中的表达,并与6例乳腺导管单纯性增生及26例乳腺癌对比分析,实验结果为,p53mRNA在乳腺导管单纯性增生组织中呈较强表达（66.7%),在乳腺导自欺欺人这非典型增生组织中阳性表达为40%（轻度;55.6%,中度：41.7%,重度;26.1%)。在癌组织中的表达率为19.2%(导管内癌：21.4%,浸润性导管癌：16.7%),p53蛋白在导管单纯性增生组无表达,在导管非典型增生组阳性表达为24%（轻度：11.1%,中度;25%,重度;34.8%)。在癌组织中的阳性表达为38.4%(导管内癌：35.7%,浸润性导管癌：41.7%),bcl-2mRNA在单纯性增生组无表达,在非典型增生组中阳性表达为轻度：11.1%,中度：16.7%,重度：39.1%,在乳腺癌组织中阳性表达为导管内癌;78.6%,浸润性导管癌83.3%。实验结果表明,在乳腺导管重度非典型增生组织中可检测到p53基因有较高的表达缺失,突变及bcl-2mRNA过表达。     

细胞程序死亡与bcl－2基因

细胞程序死亡(PCD),是有别于细胞坏死的另一种重要的衰老、死亡形式,它在胚胎发育、肿瘤发生、免疫系统的克隆选择中起重要作用.bcl-2是调控PCD的基因,但不能抑制所有类型的PCD.最近发现,bcl-X基因编码大小不同的两种蛋白,分别具有刺激和抑制PCD的功能.bcl-2通过抑制PCD可导致细胞癌变,因而bcl-2被看作第三类癌基因.     

Bcl—2家族与结直肠癌

bcl-2基因家族包括抑制细胞凋亡的基因和促进细胞凋亡的基因,其表达的蛋白在细胞凋亡：的调节中发挥重要作用。Bcl-2家族蛋白对肿瘤细胞凋亡的调节作用是当前肿瘤研究的热点之一。有关Bcl—2家族蛋白在结直肠癌方面的研究已不少。本文结合近年来国外的研究进展,对Bcl-2家族蛋白的主要结构、功能及其与结直肠癌的发生、发展、治疗、复发及预后的关系作一综述。     

Bcl-2、C-erbB-2基因与卵巢肿瘤的关系

目的探讨bcl-2凋亡抑制基因、c-erbB-2癌基因和细菌L型感染在卵巢肿瘤中的表达及其意义.方法采用免疫组化和革兰染色方法,检测了101例卵巢肿瘤中的bcl-2、c-erbB-2基因的表达,以及细菌L型的检出率.结果恶性肿瘤中Bcl-2、C-erbB-2蛋白产物的表达率明显高于良性肿瘤(P＜0.01),Bcl-2、C-erbB-2蛋白在卵巢恶性肿瘤中临床分期Ⅲ、Ⅳ期中的阳性表达率,明显高于Ⅰ、Ⅱ期,病理分级Ⅲ级的表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ级(P＜0.01).细菌L型的检出率与腹腔淋巴结有转移、有腹水者比无转移及无腹水者差异有显著性(P＜0.05),而细菌L型的检出率与肿瘤的类型、临床分期、病理分级差异无显著性(P＞0.05).结论bcl-2、c-erbB-2基因在卵巢肿瘤中有不同程度异常表达,两种基因的表达与肿瘤的临床分期及病理分级有明显相关性(P＜0.01).L型感染极有可能导致基因的变异,因此L型感染可能成为诱发肿瘤形成的因素之一.bcl-2凋亡抑制基因、c-erbB-2癌基因的过度表达和变异,以及细菌L型感染可能相互协同在卵巢肿瘤发生和发展过程中起重要作用.     

鼻咽癌患者的Smad2/4基因突变分析

利用PCR—SSCP银染技术对30例鼻咽癌患的Smad2／4基因的所有外显子进行突变分析,以探讨Smad2/4基因与鼻咽癌发病的可能相互关系。结果在所有病例的所有外显子上没有发现任何类型的突变。Smad2/4基因可能不是鼻咽癌的易感基因,TGF-β／Smad2/4信号通路可能不参与鼻咽癌的发病。     

大鼠坐骨神经切断后外源性bcl-2对脊髓运动神经元的保护作用

采用大鼠坐骨神经切断损伤模型,行神经外膜端端对线缝合,术中依不同组别,动物于神经缝合处远端0．5cm处分别注射人的正义和反义bcl-2重组腺病毒(Ad／s-bcl-2、Ad／as-bcl-2),报道基因重组腺病毒(Ad／lacZ)和生理盐水。术后48h,7d,15d和30d常规灌注固定大鼠,取L4-L6脊髓节段,应用X-gal染色、bel-2原位杂交和免疫组化染色、TUNEL染色以及乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学染色方法,观察到外源基因能在脊髓中表达,同时外源性Ad／s-bcl-2能显著减少L4到L6节段脊髓前角运动神经元凋亡的数目,减少脊髓前角运动神经元中因坐骨神经切断导致的AChE活性的降低幅度,并加快其恢复。而Ad／as-bcl-2可显著增加坐骨神经切断诱导的脊髓前角运动神经元凋亡数目以及AChE活性降低幅度,并延缓其恢复。这些观察结果表明,外源性bcl-2能保护周围神经切断后引起的脊髓运动神经元损伤。     

bcl—2基因在免疫系统中的作用

bcl-2是在滤泡型淋巴瘤中是先发现的与t(14;18)染色体易位相关的一种癌基因,最近研究表明bcl-2对细胞凋亡具有调控作用,并与T细胞发育,B细胞分化以及淋巴瘤的发生,发展等方面有关。     

bcl－2基因家族对细胞凋亡的调节

ｂｃｌ－２基因为一原癌基因,因其在淋巴瘤和白血病中出现重排而得名。近年研究表明,ｂｃｌ－２基因是细胞凋亡的重要抑制基因,它的过度表达是癌症和自身免疫病发生的重要原因。最近又发现了几个与ｂｃｌ－２基因有不同程度同源性的调节基因,也在细胞凋亡中发挥作用。     

低氧预处理提高离体培养的下丘脑细胞缺氧耐受性及其与线粒体膜电位稳定性的关系

本文用新生大鼠下丘脑培养细胞,研究了低氧预处理对下丘脑细胞缺氧耐受性的影响及其与线粒体膜电位的关系.结果显示：在急性缺氧条件下,低氧预处理可以提高细胞存活率,减少乳酸脱氢酶漏出,此外,低氧预处理可以使线粒体膜电位在缺氧时保持相对高的水平,并诱导B淋巴细胞／白血病－2（B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)高表达,结果提示,低氧预处理能提高下丘脑细胞的缺氧耐受性,其机制与线粒体膜电位稳定性增强有关;低氧预处理诱发bcl-2高表达可能是线粒体膜电位稳定性增强的机制之一。     

胎儿下颌髁状突发育中软骨细胞凋亡及bcl-2的表达

目的 研究不同胎龄的胎儿下颌髁状突软骨发育中的细胞凋亡及bcl-2蛋白的表达。方法 32例胎儿下颌髁状突软骨按胎龄分为两组：A组（13-22周,17例）;B组（23-33周,15例）,采用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组织化学法观察胎儿髁状突软骨发育不同时期细胞凋亡及bcl-2蛋白的表达,并对表达结果作定量分析。结果 两胎龄组中均有TUNEL及bcl-2阳性表达,凋亡细胞A组较B组多,凋亡细胞主要分布于增殖层及成软骨细胞层,肥大层较少;bcl-2阳性细胞主要分布于成软骨细胞层,其次为增殖层,肥大层阳性细胞明显减少,B组bcl-2阳性率高于A组。结论 细胞凋亡参与胎儿下颌髁状突软骨发育,bcl-2与髁状突软骨细胞分化及细胞凋亡有关。     

应用原位杂交技术检测鼻咽癌组织中bcl-2基因断裂点

为探讨ｂｃｌ┐２基因断裂与鼻咽癌发生的关系,采用分子原位杂交技术检测４１例鼻咽癌组织ｂｃｌ┐２基因的两个断裂热点。结果显示４１例鼻咽癌发生ｂｃｌ┐２基因断裂有４例,阳性率为９．８％,各组织学分级间无明显差异。鼻咽良性病变为阴性。结果说明ｂｃｌ┐２基因断裂非淋巴瘤的特异性改变,ｂｃｌ┐２基因断裂与鼻咽癌细胞的分化程度和恶性生物学行为间无明显关系,在鼻咽癌发生过程中的作用有限     

bcl-2癌基因蛋白在鼻咽癌以及单克隆癌细胞裸鼠体内连续传代中的表达

用免疫组织化学Ｓ－Ｐ方法,检测了４０例低分化鼻咽癌、３０例鼻咽癌克隆细胞裸鼠移植瘤、１０例慢性鼻咽炎及８例人胚鼻咽上皮组织石蜡包埋切片中抗凋亡基因ｂｃｌ－２癌蛋白的表达;并进一步检测了鼻咽癌克隆株在裸鼠体内演进中ｂｃｌ－２癌蛋白的表达以及与淋巴结转移之间的关系。结果表明：鼻咽癌及其裸鼠移植瘤组织中ｂｃｌ－２癌蛋白的表达率分别为６２．５％和７０％,慢性鼻咽炎中ｂｃｌ－２癌蛋白的表达率为１０％,人胚鼻咽上皮组织中不表达ｂｃｌ－２癌蛋白,鼻咽癌及其裸鼠移植瘤组织中ｂｃｌ－２癌蛋白的表达率明显高于慢性鼻咽炎组织中（Ｐ＜０．０１）;鼻咽癌克隆株演进中癌细胞ｂｃｌ－２癌蛋白的表达不断升高,其淋巴结转移率亦不断升高。提示：抗凋亡基因ｂｃｌ－２癌蛋白的表达可能和鼻咽癌的发生、演进及转移能力密切相关     

鼻咽癌组织中蛋白酶ICH的表达及其与bcl-2的表达关系

探讨蛋白酶ＩＣＨ１ 与凋亡基因ｂｃｌ２ 的关系及在鼻咽癌发生中的作用。应用免疫组化方法对４６例鼻咽癌组织中ＩＣＨ１ （ＩＣＨ１Ｌ和ＩＣＨ１Ｓ） 和ｂｃｌ２ 的表达进行观察。结果发现１１ 例良性病变中２ 例ＩＣＨ１Ｌ阳性, １ 例ＩＣＨ１Ｓ阳性。４６ 例鼻咽癌中１６ 例ＩＣＨ１Ｌ阳性, ２２ 例ＩＣＨ１Ｓ阳性, 阳性率分别为３４８％ 和４７８％ , 各组织学分型间无明显差异（Ｐ＞ ００５）。癌细胞ＩＣＨ１ 表达较良性病变增加, 但ＩＣＨ１Ｌ与良性病变比较无显著性差异 （Ｐ＞ ００５）。良性鼻咽上皮ｂｃｌ２ 阴性。４６ 例鼻咽癌中３８ 例ｂｃｌ２ 阳性, 阳性率为８２６％ , ｂｃｌ２ 表达与组织分型也无明显关系 （Ｐ＞ ００５）。ＩＣＨ１Ｌ与ｂｃｌ２ 呈反向表达关系。提示ＩＣＨ１ 和ｂｃｌ２ 表达异常可能与鼻咽上皮的癌变有关。ｂｃｌ２ 对ＩＣＨ１Ｌ表达可能有影响。     

鼻咽癌Epstein－Barr病毒受体（EBVR／CR＿2）基因的病毒结合区的序列测定

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究ＥＢＶ与鼻咽癌（ＮＰＣ）的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗ＥＢＶ受体（ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２）单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的基因结构仍需研究。我们采用ＰＣＲ扩增和不对称ＰＣＲ直接测序法,首次检测了１０例ＮＰＣ及３例正常人胚鼻咽上皮（Ｈｕｍａｎｅｍｂｒｙｏｎｉｃｎａｓｏｐａｒｙｎｇｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＨＥＮＥ）组织样本中ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的ＥＢＶ结合区的编码序列。这一片段的ＤＮＡ序列测定结果显示,人ＮＰＣ细胞和正常ＨＥＮＥ细胞的ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的ＥＢＶ结合区的编码序列,与正常人Ｂ淋巴细胞的ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的相应序列完全相同,提示ＥＢＶ感染鼻咽上皮细胞可能与ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２基因的ＥＢＶ结合区结构改变无直接关系。     

Purification of novel UBAP1 protein and its decreased expression on nasopharyngeal carcinoma tissue microarray

Recently, the UBAPl gene, a putative nasopharyngeal carcinoma (NPC) related gene, which is located at human chromosome 9p21-22 where loss of heterozygosity frequently occurs in NPC, was cloned. The present study aimed to explore the purification approach to UBAP1 protein and its expression pattern in NPC with tissue microarray. The full length coding sequence of UBAP1 was subcloned into a prokaryotic expression vector, pGEX-4T-2, and expressed in Escherichia coli as a GST-fusion protein. With modification of the purification method, GST-UBAP1 fusion protein achieved a high level of purity. The New Zealand rabbit was immunized with the purified fusion protein to prepare polyclonal antiserum following standard protocols. With this antiserum, high-throughput analysis of UBAP1 protein expression using immunohistochemistry was performed on self-made tissue microarrays consisting of 316 nasopharyngeal specimens from 148 NPC and 168 non-cancerous nasopharyngeal epithelia with different morphological features. Consequently, we found that there was a significant decrease in the percentage of positive expression in all NPC on protein levels for UBAP1 (23%), compared to that of the non-NPC (89%) (P<0.01). The result suggests that UBAP1 might be a potential effective diagnosis candidate for NPC and decreased expression of UBAP1 protein is a possible point of dysfunction along the pathogenesis pathway for NPC that may contribute to malignant transformation.     

应用H.E染色的鼻咽癌细胞涂片进行DNA含量测定和EB病毒基因原位杂交的研究

分析鼻咽癌常规 H.E染色细胞涂片分别作 Feulgen染色检测 DNA含量和原位杂交检测 EB病毒编码 RNAs(EBERs)的效果 ;将常规 HE染色的 9例正常鼻咽细胞涂片和 38例鼻咽癌细胞涂片用 1%酸性酒精褪色 ,然后作 Feulgen染色 ,应用图象分析仪测定涂片细胞 DNA含量 ,并将 38例鼻咽癌细胞病例的阳性涂片进行 EBERs原位杂交检测 ;结果显示正常鼻咽细胞均为 DNA二倍体核型 ,38例癌阳性涂片中呈 DNA二倍体者 6例 ,DNA非二倍体者 32例 (84.2 % ) ,癌细胞核 EBERs阳性者 35例 (92 .1% ) ;结果表明 HE染色的鼻咽癌细胞学涂片经褪色后作 Feulgen染色和原位杂交检测 ,能较满意进行 DNA和 EBERs分析 ,表明常规 H.E染色和褪色处理均不影响 Feulgen染色和 EB病毒原位杂交的质量效果。本检测方法可靠、可行 ,适用于常规染色细胞学样本的回顾性研究和随访研究 ,并可用于鼻咽癌可疑病人的诊断和鉴别诊断     

用组织微阵列技术分析鼻咽癌变多阶段组织细胞周期蛋白D1过表达

为了探讨细胞周期蛋白D₁(Cyclin D₁)在鼻咽癌变多阶段病变组织中的蛋白质表达与鼻咽癌变的关系,应用组织微阵列（tissue microarray）技术,采用免疫组化方法检测Cyclin D₁在鼻咽癌旁粘膜上皮单纯性增生/化生(simple hyperplasia/ metaplasia,SH/SM)、异型增生/化生(atypical hyperplasia/metaplasia,AH/AM)和鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的蛋白质表达,阳性表达率分别为30.0%（3/10）、90.0%（18/20）和62.9%（39/62）,其中在异型增生/化生中呈“一过性增高”.表明Cyclin D₁高表达可能为鼻咽癌发生过程中的早期事件;异型增生/化生可能是鼻咽癌变的重要“关卡”.     

bcl-2癌基因蛋白在甲状腺癌中的表达及其意义

利用免疫组织化学技术,对６４例甲状腺癌进行了ｂｃｌ－２蛋白表达的检测,同时进行ｐ５３蛋白的对照检测。结果显示,甲状腺癌中ｂｃｌ－２蛋白阳性表达率为８１．３％（５２／６４）,但未分化癌无阳性表达。ｐ５３蛋白在甲状腺癌的阳性表达率为２０．３％（１３／６４）,而未分化癌全部为阳性表达。两种抗体在甲状腺癌的阳性表达率有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结果提示ｂｃｌ－２蛋白在甲状腺癌的表达与肿瘤细胞的分化程度有关,并与ｐ５３蛋白呈反比关系,ｂｃｌ－２与ｐ５３蛋白表达的不同分布可作为判断甲状腺癌预后的一个重要参考指标     

人鼻咽组织中Epstein-Barr病毒基因组存在状态的分析

Burkitt淋巴瘤和未分化型鼻咽癌的细胞中存在着Epstein-Barr病毒(EBV)的基因组,在前者虽经长期体外培养,病毒基因组仍持续存在,并部分地表达。这些现象提示,至少有一些EBV基因组是整合在寄主细胞的DNA中。Kieff等用染色体原位杂交检测Burkitt淋巴瘤Namalwa细胞株和EBV转化的人脐带血B淋巴细胞IB_4株,发现病毒DNA是整合在前者的1号染色体上,在后者则整合