恶性疟原虫抗原表位的亚单位疫苗与DNA疫苗的联合免疫

构建了含有恶性疟原虫抗原基因 ( AWTE)的真核表达质粒 p CMV- AWTE,以及能在大肠杆菌中得到分泌性表达的原核表达质粒 p MC0 5 ,表达的蛋白 AWTE保持了疟原虫抗原的抗原性。将 p CMV- AWTE以及 AWTE两者混合各 1 0μg鼻腔免疫小鼠 ,一次后诱导机体产生了较高水平的体液免疫及细胞免疫     

生产疫苗的植物表达系统

综述了近些年来转基因植物作为疫苗表达系统的新进展,比较了植物表达系统相对其他表达系统的优点,介绍了不同介导方式的植物表达系统,包括农杆菌介导的转化和重组植物病毒表达疫苗,讨论了提高表达效率的载体构建策略,对其应用前景提出了展望。     

用转基因植物生产病原微生物亚单位疫苗的研究现状

利用转基因植物生产病原微生物亚单位疫苗是一个新兴的领域,本文就生产流程、在转基因植物中表达成功的病原微生物亚单位疫苗和转基因植物疫苗的优缺点,提高亚单位疫苗抗原在转基因植物中的表达量,以及加强机体黏膜免疫反应的措施等方面作一综述.     

不同DNA疫苗联合接种可有效增强免疫效果

造反乙型肝炎（乙肝）病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇＡ）、ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）及单纯疱疹病毒ｇＤ抗原（ＨＳＶ－１－ｇＤ）基因为目的基因,进行ＤＮＡ疫苗联合免疫的研究。通过对不同基因片段的表达研究,选择了能在哺乳动物细胞中高效表达乙肝病毒核心抗原、ｅ抗原和单纯疱疹病毒ｇＤ抗原的质粒ＤＮＡ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。结果显示：表达乙肝病毒核心抗原和单纯疱毒ｇＤ抗原的ＤＨＡ疫苗单独免疫,能有效刺激机体产生体液免疫和细     

菌体表面表达与活菌疫苗

展示表达是将目的蛋白基因与细胞表面结构蛋白融合,使目的蛋白表达并锚定于细胞表面的一项技术,微生物特别是细菌常用作展示表达的宿主。在大肠杆菌中,多种外膜蛋白、鞭毛蛋白、菌毛蛋白、脂蛋白等均已被用于表达和锚定外源蛋白,革兰氏阴性菌中,较明确的是蛋白Ａ可用以细胞表面的整合,Ｍ６蛋白也被尝试用于乳酸菌的展示表达,酵母表达体系中,将目的蛋白与凝集素融合可表达细胞表面,菌体表面表达的蛋白容易被免疫系统识别,能引起强烈的免疫反应。其中沙门菌、大肠杆菌、链球菌等展示表达的致病细菌或病毒的抗原和毒素用于免疫动物均能产生高滴度的中和抗体,用作疫苗大有前途。本文对表达体系和在疫苗方面的应用进行了概述     

恒河猴CGβ亚基(rmCGβ)DNA在HeLa细胞中的表达及其对小鼠免疫反应的诱导

为了探讨人绒毛膜促性激素hCGβ亚基DNA避孕疫苗的可能性,以恒河猴绒毛膜促性腺激素rmCGβ亚基全长氨基酸编码序列的cDNA片段构建了真核质粒表达载体pCMV4-rmCGβ,通过脂质体转染的方法导入HeLa细胞,采用RT－PCR方法检测rmCGβ在mRNA水平上的表达,实验证明HeLa细胞在转梁后24h表达最强,48h和72h表达依次减弱,利用ELISA方法检测了pCMV4-rmCGβ在HeLa细胞中rmCGβ蛋白的表达,rmCGβ蛋白主要以细胞内或膜结合的形式存在,其含量可达0.5ug/10^6细胞,pCMV4-rmCGβDNA免疫接种雌性BALB／c纯系小鼠,能诱导小鼠产生强烈的体液免疫应答,滴度最高可达1：6000以上,高滴度的免疫反应持续10周以上,且免疫反应的强度与pCMV4-rmCGβDNA无剂量依赖关系。     

痘苗病毒载体在病毒疫苗研制上的应用

痘苗病毒作为真核表达载体已广泛应用于外源基因的表达,并日益受到重视,本文就痘苗病毒的生物学特性,重组痘苗病毒的构建原则,外源基因在重组痘苗病毒中的表达情况及重组痘苗病毒作为活疫苗的优缺点等方面作一概括性综述。     

双顺反子质粒DNA疫苗的研究

肿瘤疫苗是转移性癌化疗的有希望的替代品。为达到有效而安全,治疗性癌苗应特异性靶向转移性肿瘤细胞上表达的抗原。抗非何杰金氏B细胞淋巴瘤表达的特异性表面免疫球蛋白或其独特型的疫苗,它符合这些标难,因为原发的或转移的肿瘤细胞皆表达肿瘤特异性免疫球蛋白。使用小鼠38C13B细胞淋巴瘤作为一种模型系统设计了一种质粒DNA疫苗,它表达编码38C13肿瘤表面轻链和重链两种肿瘤免疫球蛋白(独特型)的双顺反子mRNA。为提高该质粒DNA疫苗的免疫原性,将小鼠轻重链的可变区与其人免疫球蛋白相应的稳定区相融合。另外,构建的真核类表达盒在体内得产生鼠／人嵌合型免疫球蛋白的高水平表达,及引起保护性免疫应答。用特有的SfiI限制位点快速克隆任一肿瘤特异的免疫球蛋白独特型区,产生的系列质粒构建物用以试验J区和／或人C区插入SfiI限制位点的差异,发现这样的差异对表达和免疫原性都有显影响。原型独特型疫苗免疫小鼠产生了抗38C13肿瘤的保护性免疫应答。研究表明,双顺反子质粒DNA为基础的新疫苗可用于开发抗B细胞淋巴瘤的肿瘤特异性疫苗。     

细菌载体疫苗的研究进展

细菌载体疫苗是新兴现代疫苗的重要发展方向,所谓细菌载体疫苗是将所需的编码病原菌特异性抗原的DNA片段插入减毒的病原菌或者共生菌中,以提呈表达所编码的抗原,以期达到一种或多种疾病的作用。本文主要对当前研究的细菌载体疫苗加以介绍。     

禽流感病毒血凝素疫苗在转基因马铃薯中的表达

利用转基因马铃薯表达禽流感病毒血凝素疫苗,将含有禽流感病毒血凝素序列的表达载体导入农杆菌,再感染马铃薯的幼茎外植体。转化植株的再生及温室栽培,Western blot分析表明,83％的转化植株在其块茎组织中表达了重组血凝素,表达量占总蛋白量的0．03－0．04％,结果显示用马铃薯生产口服禽流感疫苗是可行的。     

用转基因植物生产基因工程疫苗

用转基因植物生产外源蛋白质产品是一个有吸引力的廉价生产系统,它有可能替代外源蛋白质的发酵生产系统。通过外源基因的瞬时表达或稳定表达方式,多种疫苗已在植物中产生,在植物中表达的抗原保持了它自身的免疫原性,植物在这方面的应用具有独特的优点。     

逆转录病毒载体在基因工程疫苗方面的应用

逆转录病毒载体是根据逆转录病毒的特性设计出的一种病毒表达载体,以其能够整合到宿主细胞染色体上并能稳定表达目的基因而被视为基因运载最有效的工具。目前广泛应用于基因治疗、外源基因表达、基因工程疫苗等方面。主要综述了逆转录病毒载体在基因工程疫苗方面的应用现状及前景,为该载体在生物医学领域方面的应用提供有价值的参考。     

转基因植物疫苗研究策略

利用转基因植物作为生物反应器生产疫苗受到越来越多的关注。对转基因植物疫苗的研究、生产策略进行了介绍 ,重点对提高植物疫苗表达所采用的生物技术策略进行综述 ,探讨转基因植物疫苗的发展及面临的问题。     

转基因植物与食用疫苗

转基因植物与食用疫苗宋长征,韩金祥,王美玲（山东省医学科学院生物技术中心,济南）转基因植物技术是随着ＤＮＡＩ组、基因的遗传转化、植物的组织培养、目的基因的整合与表达的检测等技术手段的建立而发展起来的生物技术。利用转基因植物作为生物反应器,把外源基因引...     

戊型肝炎疫苗的研究进展

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的一种非甲非乙型病毒性肝炎。HE主要在亚非拉等发展中国家流行,但在欧美等发达国家也有散发病例。HEV是一种非包膜单股正链RNA病毒,具有四种基因型,仅有一种血清型,所以有望能够研究出对HEV所有基因型均有保护性的疫苗。因HEV尚无合适的细胞培养系,目前,戊肝疫苗研究开发主要集中于基因工程疫苗。戊肝病毒开放阅读框2(ORF2)含有重要的中和抗原表位,目前已有ORF2许多片段在不同表达系统中成功地进行了表达,如原核、昆虫、酵母、植物细胞等表达系统,且表达产物均具有一定的免疫原性。虽然戊肝疫苗的研究已开展多年并取得了很大进展,迄今全球仍无戊肝疫苗被批准上市。但有两种戊肝候选疫苗现已进入Ⅲ期临床试验阶段,有望成为预防戊肝的有效手段。     

乙型肝炎病毒重组腺病毒载体疫苗的免疫研究进展

以人类腺病毒（Ａｄ）为表达载体发展多价展组口服活疫苗,尤其在乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）疫苗研制上成效显著,表达ＨＢｃＡｇ,ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ的重组人类Ａｄ７型（ｄ７）活载体疫苗在实验动物免疫上取得良好效果。在重组Ａｄ活载体疫苗研制方面是一项重大进展,表达ＨＢｓＡｇ的重组Ａｄ７活载体口服疫苗已有人体初次免疫试验的报道。     

痘苗病毒载体研究进展

制备高活性的真核蛋白,必须使用哺乳动物细胞,痘苗病毒为这一工作提供了简便、实用的工具．痘菌病毒宿主范围广,无致癌性,插入长达20多kb的外源基因后仍有感染性,能够高效表达外源蛋白,有效地加工表达产物．而且,痘菌病毒的表达产物可刺激机体免疫系统产生良好的体液免疫和细胞免疫．利用这些特点构建成的哺乳动物细胞高效表达系统将是基因工程药物和基因工程疫苗的有效工具.     

狂犬病病毒保护性抗原与亚单位疫苗的研究进展

本文论述了狂犬病毒糖蛋白,尤其是核蛋白或核糖核蛋白（ＲＮＰ）作为狂犬病重要保护性抗原的特性。鉴于核蛋白诱生狂犬病细胞免疫的重要保护作用,以及脂质体中同时加入核蛋白及糖蛋白后,其保护水平与狂犬病全病毒疫苗相似,故以研制狂犬病双价亚单位疫苗为妥。杆状病毒载体优点多,其表达的狂犬病病毒核蛋白及糖蛋白可制备安全、有效疫苗的大规模使用,乃至口服使用。     

突变型乙肝病毒核心抗原DNA疫苗的体外表达

目的:构建突变型核心抗原核酸疫苗,观察该核酸疫苗在体外蛋白的表达.方法:采用基因工程定点突变技术,构建5种突变型核酸疫苗,分别去除乙肝病毒核心抗原N端的第1、2位氨基酸,命名为M12,去除3、4位氨基酸命名为M34以及去除5、6位的氨基酸命名为M56,用上述构建的核酸疫苗与野生型HBc核酸疫苗(pJW4303/Hc)及空载体质粒pJW4303分别用脂质体转染293T细胞,应用蛋白印迹法检测核心蛋白的表达.结果:经过pstl和BgI双酶切和测序鉴定结果突变型核心抗原核酸疫苗构建成功.在去除2个氨基酸的核酸疫苗结果中显示:野生型pJW4303/HBe、M12、及M56体外转染293T细胞后,在细胞上清和裂解中能很好的表达,而M34上清未见表达,仅裂解中可见极少量疑似表达条带;在原有基础上分别去除第3位和第4住氨基酸,命名为M3和M4,结果显示M3上清未见表达,裂解液中可见少量表达,而M4在上清和裂解中均可见明显的表达.结论:去除核心抗原N端第3位的氨基酸(M3)可以明显影响核心抗原的表达,HBcAg氨基端第3位氨基酸对蛋白的表达可能起到重要的作用.     

应用植物表达系统生产疫苗的研究概况

随着重组DNA技术、植物转基因技术和分子植物病毒学的迅猛发展,使得应用植物作为疫苗抗原的表达载体成为可能。本对应用转基因植物和基于植物的病毒载体两种植物表达系统生产疫苗抗原的研究概况进行了评述。