采后龙眼果肉自溶过程中PME基因的表达分析

采用RT-PCR和RACE-PCR相结合的方法,研究了果胶甲酯酶基因(PME)表达与采后龙眼(Dimocarpus longan Lour.)果肉自溶的关系.从龙眼果实中分离得到3个包含3'非翻译区的PME基因片段,分别命名为DlPME1、DlPME2和DlPME3,其推导的氨基酸序列与多种植物的PME蛋白有较高的同源...     

龙眼花芽与叶芽差异蛋白分析

以龙眼(Dimocarpus longan Lour.)花芽和叶芽为材料,对龙眼花芽与叶芽分化发育过程中的差异蛋白质进行分析和鉴定,并探讨其生物学功能.本研究共鉴定出10个差异蛋白质:ATP synthase beta subunit,fructokinase,LHCII type Ⅰ chlorophyll a/b binding protein,peroxidase,ascorbate peroxidase,14-3-3 protein,14-3-3 family protein,putative cytosolic cysteine synthase 7,retrotransposon protein,putative,Ty1-copia subclass,Protein Group similar to late embryogenesis abundant proteins.这些差异蛋白质可能与龙眼花芽与叶芽的物质和能量代谢、自由基清除和抗氧化作用、信号转导和基础代谢、氨基酸代谢等生理过程密切相关.     

棉花种子活力劣变的差异蛋白质组学研究

该研究以新疆本地审定且大面积推广应用的陆地棉品种‘新陆早33’、‘新陆早36’、‘新陆早50’种子为研究材料,采用高温高湿(40℃,RH100%)人工老化方法获得不同活力种子,双向电泳分离‘新陆早50’活力劣变种子总蛋白并对差异蛋白点进行二级质谱(MALDI-TOF/TOF)鉴定分析,以明确棉花种子活力劣变过程中蛋白质组表达的变化,探讨棉花种子老化的分子机制。结果显示:(1)经人工老化获得不同活力水平的种子,经生活力检测发现‘新陆早50’的种子活力随老化时间的延长呈线性下降,可作为蛋白质组研究材料。(2)TCA-丙酮法分别提取‘新陆早50’对照和劣变种子的总蛋白,经2-DE分离,获得了分辨率和重复性较好的蛋白质组差异表达图谱,在等电点4~7、分子量14.4~97.4kD之间发现约350个肉眼可辨的蛋白点,其中上调2倍以上且达到99%统计学显著水平的差异表达蛋白点30个。(3)二级质谱分析发现,有29个蛋白点被成功鉴定,生物信息学分析和功能分类结果表明,与贮藏相关的蛋白有13个,免疫相关蛋白2个,脂代谢相关蛋白1个,能量代谢相关蛋白1个,肌动蛋白2个,功能未知蛋白5个,调控相关蛋白2个,次级代谢物1个,细胞修复防御相关蛋白1个,分泌性蛋白1个。研究认为,分离鉴定的29个差异蛋白的变化可能与棉花种子活力劣变有关。     

脊髓全横断损伤后差异表达蛋白的蛋白质组学分析

 对脊髓全横断损伤前后的大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出18种蛋白质.脊髓损伤3 d后表达上调的蛋白质有巨噬细胞游走抑制因子、S期激酶相关蛋白 1、热休克蛋白 27、多配体蛋白聚糖 3、T细胞受体β链可变区、膜联蛋白Ⅲ、腺苷酸激酶 1、半乳凝素 3、丙酮酸脱氢酶、磷脂酶 B、嗜铬粒蛋白 A、热休克蛋白70凝结蛋白 1;同时表达下调的蛋白质有磷酸丙糖异构酶、神经鞘氨醇磷酸化受体、热休克蛋白10、肽酰 脯氨酰 顺反式异构酶 A多数差异蛋白质涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程,为进一步阐明中枢神经系统的损伤和修复机制提供了理论依据.摘要 对脊髓全横断损伤前后的大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出18种蛋白质.脊髓损伤3 d后表达上调的蛋白质有巨噬细胞游走抑制因子、S期激酶相关蛋白 1、热休克蛋白 27、多配体蛋白聚糖 3、T细胞受体β链可变区、膜联蛋白Ⅲ、腺苷酸激酶 1、半乳凝素 3、丙酮酸脱氢酶、磷脂酶 B、嗜铬粒蛋白 A、热休克蛋白70凝结蛋白 1;同时表达下调的蛋白质有磷酸丙糖异构酶、神经鞘氨醇磷酸化受体、热休克蛋白10、肽酰 脯氨酰 顺反式异构酶 A多数差异蛋白质涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程,为进一步阐明中枢神经系统的损伤和修复机制提供了理论依据.     

龙眼果实采后果肉自溶过程中细胞壁组分及其降解酶活性的变化

在(10±1)℃下贮藏的‘福眼’龙眼果实果肉自溶指数和自溶程度随着贮藏时间的延长而增加。果肉细胞壁干重、原果胶、纤维素、半纤维素和细胞壁蛋白含量不断减少。果肉果胶酯酶(PE)活性下降;多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性在贮藏6～12d以及纤维素酶活性在贮藏0～12d期间均明显增强,到第12天达到活性高峰,之后下降。但在贮藏0～24d期间,PE、PG和纤维素酶仍然保持较高活性,贮藏24d之后快速下降。β-半乳糖苷酶活性在贮藏0～24d期间略有下降,而在贮藏24d后,活性增强,尤其是贮藏30d后,活性急剧升高。     

乙醇法提取龙眼果肉黄酮及其鉴别

以‘储良’龙眼品种为试材,采用乙醇提取法对其果肉中黄酮进行定性和定量试验。颜色试验和纸层析结果表明,龙眼果肉含有黄酮类物质;其最大吸收波长为510nm,‘储良’龙眼黄酮含量为15.48±0.27mg/100g·fw,RSD 1.75%;回收率为103.3±3.65%。     

乌龙岭’龙眼胚胎发育时期特异性蛋白质的变化

应用IEF-SDS-PAGE技术分析龙眼胚胎分化发育过程中蛋白质组分的变化。结果表明,在各发育阶段大多数蛋白质组分的电泳图谱基本一致,但也有变化。其中花后38d存在TE1(27．1kD、p,7．3),TE2(17．5kD、pI8．2)2个特异蛋白,45d存在TE3(11．4kD、pI7．6),TE4(13．2kD、pI9．9)2个特异蛋白,52d存在TE5(22．6kD、pI7．2),TE6(18．6kD、pI8．3),TE,(23．5kD、pI3．6)3个特异蛋白。31d胚胎电泳图谱中的蛋白质点数相对较多,表明此时蛋白质旺盛合成与积累,这与蛋白含量的变化基本一致。龙眼胚胎发育过程中特异蛋白的出现或消失．对胚胎的分化发育具有重要作用。     

小麦种子萌发时期胚差异蛋白表达分析

为了解小麦种子在萌发时期胚蛋白质表达情况,通过双向电泳技术,对"晋麦-47"小麦种子未萌发和萌发3 h、16 h和25 h的胚进行蛋白质分离。结果发现,"晋麦-47"小麦种子未萌发和萌发3 h、16 h和15 h的胚在PDQuest图像分析软件可识别的蛋白点分别有127、131、135和141个,其中表达量变化2.5倍以上的蛋白点有17个。选取表达量在2.5倍以上的9个差异蛋白点进行质谱分析,初步鉴定出4个蛋白质,分别是核苷二磷酸激酶Ⅰ、17.5 kD热休克蛋白、ATP合酶和LEA蛋白27。     

真姬菇在高温胁迫下的差异表达蛋白分析

采用双向电泳分析Tris-饱和酚法获得的真姬菇菌丝体全蛋白,利用PDQuest8.0软件分析双向电泳图谱,比较最适温度(25℃)和高温胁迫条件下(42℃)真姬菇菌丝体蛋白的表达差异,筛选出与高温胁迫相关的蛋白,并对获得的差异蛋白进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果显示,共鉴定7个蛋白点中,Spa2同源结构域的表达量下调,DEHA2G15532p、肽酶M76家族、HSP70、SNF2家族的DNA修复蛋白、细胞色素p450及AM域家族和锌指蛋白的混合物的表达量上调。这些蛋白参与了信号转导、蛋白处理、DNA修复等多种抗逆反应生理过程。     

几个能量代谢相关蛋白在HeLa细胞自噬过程中表达下调

自噬是真核细胞中的一种保守的代谢信号通路。人们已经知道自噬与肿瘤发生等疾病密切相关,但对于自噬的分子机制仍然不是很清楚。鉴定更多的自噬相关蛋白对于进一步阐明自噬的分子机制具有重要意义。该研究使用饥饿法处理HeLa细胞,通过电镜观察以及检测自噬标记蛋白LC3-I的转换,证实HeLa细胞发生了明显的自噬。之后,使用双向电泳结合串联质谱分析鉴定细胞自噬时发生变化的蛋白质。结果发现果糖二磷酸醛缩酶A、GAPDH和ATP合成酶O亚基的量在HeLa细胞发生自噬后明显降低。实时定量PCR结果证明饥饿诱导后,这三种蛋白的mRNA水平都发生了明显的下降。使用自噬抑制剂3-Methyladenine预处理HeLa细胞后再行饥饿,三种蛋白mRNA的表达水平与正常细胞相当而明显高于饥饿诱导的细胞。结果表明这三种蛋白在饥饿诱导的自噬中表达下调,其分子机制还有待进一步研究。     

利用cDNA-AFLP技术分析龙眼子叶胚基因表达差异

分别提取'红核子'龙眼(Dimdcarpus longan Lour.)谢花后35 d(早期)和50 d(晚期)子叶胚RNA,建立cDNA-AFLP分析体系,获得指纹图谱.对41个差异片段回收克隆和序列分析,表明其中21个与已知功能基因具有高度同源性,这些基因的功能主要涉及侧牛器官的离轴极性、糖酵解、能最代谢、离子转运、细胞壁伸长、细胞周期调控、RNA转录、RNA翻译和调控、蛋白磷酸化调控和降解、信号转导等;其余片段与已知基因的同源性较低或没有.     

龙眼肉干制过程氨基酸组分分析

利用氨基酸自动分析仪分别测定加工前后的龙眼肉中的总氨基酸和游离氨基酸含量。结果,干制前后龙眼肉的氨基酸种类没有差别,但含量有明显差别,多数氨基酸的含量在干制后明显下降。结论:除丙氨酸和甲硫氨酸外,干制后的龙眼肉中的总氨基酸和游离氨基酸含量比干制前有明显下降,其中以碱性、酸性氨基酸含量的下降尤其显著。该差异可能是由于干制过程中发生美拉德反应造成的。     

Differential Expression of Specific Proteins during In Vitro Tomato Organogenesis1

The cotyledons of tomato (Lycopersicon esculentum L., cv. Jia Fen-10) seedlings were induced to produce calli and regenerate plants via organogenesis. Utilizing this system, the composition and content of stage-specific proteins associated with organogenesis were analyzed. Moreover, a comparison of the protein composition and content between embryogenic and nonembryogenic calli was conducted. The SDS-PAGE results and laser densitometric scanning maps showed that there were different specific proteins expressed at different stages. Among them, six proteins (61, 54, 38, 37, 35, and 23 kD) were associated with the morphogenesis of organs, and two proteins (39 and 24 kD) were related to the morphogenesis of calli. Although no distinctive difference in protein components of embryogenic calli was noted, there were different trends of changes, both for the content of the proteins 39 and 24 kD, and for the content of the total proteins, at different developmental stages of embryogenic calli. The results obtained from the embryogenic and nonembryogenic calli indicated that these two materials were distinct in the protein components as well as in its content; for example, the protein 54 kD was detected in nonembryogenic but not in embryogenic calli. The total protein content in nonembryogenic calli was lower than that in the embryogenic calli.     

丽江云杉体胚发生过程差异蛋白分析

以丽江云杉非胚性愈伤组织、胚性愈伤组织以及体胚发育过程的球型胚、鱼雷胚和子叶胚培养物为材料,采用双向电泳技术对体胚发生过程中特异表达蛋白进行分析.结果表明,丽江云杉非胚性、胚性愈伤组织及不同发育阶段体胚的蛋白质种类丰富(1 857-2 344个),胚性愈伤及发育体胚蛋白种类多于非胚性愈伤,球型胚蛋白种类最为丰富(2 344个).非胚性、愈伤组织及各发育阶段体胚共检测到44个差异表达蛋白,它们有明显的变化特点,子叶胚阶段的差异蛋白变化最为显著(23个,占特异蛋白总数的52.3％),鱼雷胚新出现大比例的分子量小于30 kD、pI为6.0左右的弱酸性小分子量特异蛋白(8个,占此阶段特异蛋白总数的88.9％),这些体胚发育晚期特异表达蛋白可能与体胚形态建成有密切关系.     

Comparative Transcriptomic Analysis of Storage Roots in Cassava During Postharvest Physiological Deterioration

Plant Molecular Biology Reporter - Cassava is an important starchy and food crop; however, the commercial value of cassava is seriously constrained by postharvest physiological deterioration (PPD)....     

失血性休克大鼠肝脏蛋白质的差异分析

 应用蛋白质双向凝胶电泳 (two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis, 2-DE) 技术,分析在急性重度失血性休克 (refractory hemorrhagic shock, RHS) 条件下,大鼠肝脏蛋白质组表达的差异.16 只雄性 Wistar 大鼠随机分成正常对照组 (sham hemorrhage shock, SHS) 和 RHS 模型组,每组 8 只.采用股动脉放血的方法制备模型,在规定时间内处死大鼠并分离肝脏,提取肝脏总蛋白质后进行 2-DE.运用 Image Master 2D Platinum v 5.0 凝胶图像分析软件对 2-DE 凝胶图像进行差异表达分析.有意义的差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行肽质量指纹图谱分析,借助 Swiss-prot 数据库进行蛋白质搜索和鉴定.SHS 组和 RHS 组肝脏的 2-DE 图谱,分别平均识别到 698±11 和 700±13 个蛋白质点,SHS 组和 RHS 组肝脏间平均匹配率达88%～92 %.共发现 10 个差异有意义的蛋白质点,鉴定出了肿瘤抑制性抗原gp96、葡萄糖调节蛋白58、过氧还蛋白Ⅰ、细胞色素b5、谷胱甘肽转移酶、ATP合酶β亚单位、二磷酸果糖酶 B、三磷酸甘油醛脱氢酶等8种蛋白质.结果表明,以 2-DE 技术得到重复性和分辨率都较好的 2-DE图谱,并初步鉴定急性重度失血性休克后大鼠肝脏的差异表达蛋白质,为深入研究失血性休克的生理病理机制及寻找失血性休克预防和治疗的生物标志物提供了依据.