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t-PA cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
应用PCR方法,在t-PA cDNA5'端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽,与酵母表达载体pPIC9重组,构建表达质粒pSTE-Y,利用LiCl转化法转化酵母菌YS108,在MM和MD平板上筛选表型,PCR筛选t-PA cDNA与酵母染色体整合而形成的阳性克隆,阳性克隆经甲醇诱导表达后,用SDS-PAGE证明表达产物的分子量为6kDa左右,用酪蛋白板溶圈法测定t-PA的活性。Mut^s表型菌表 相似文献
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t-PA cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
应用PCR方法,在tPAcDNA5′端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽,与酵母表达载体pPIC9重组,构建表达质粒pSTEY,利用LiCl转化法转化酵母菌YS108,在MM和MD平板上筛选表型,PCR筛选tPAcDNA与酵母染色体整合而形成的阳性克隆,阳性克隆经甲醇诱导表达后,用SDSPAGE证明表达产物的分子量为6kDa左右,用酪蛋白板溶圈法测定tPA的活性。Muts表型菌表达产物活性最高为2500IU/ml,Westernblot证实表达产物具有天然tPA分子的免疫原性。 相似文献
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2min脉冲式10nmol鲑GnRH高效类似物sGnRH-A(Arg^6Trp^7Leu^8Pro^9NEt-LHRH)刺激导致离体灌流培育的鲤脑垂体迅速产生显著的GtH分泌峰,GtH分泌在刺激后30min内恢复到基础水平。4h10nmol/L sGnRH-A持续性刺激导致灌流培育的鲤脑垂体GtH分泌出现脱敏反应,整个过程包括刺激后迅速的GtH分泌峰相和随后持续低水平的GtH分泌相。无Ca^++的 相似文献
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菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质 总被引:3,自引:0,他引:3
利用硫酸铵分级沉淀,Sephedex G-50凝胶柱层析,FPLC Mono-Q和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了EPSP合成酶。该酶被纯化2961.6倍,比活性达到6219.4nmolmg^-1蛋白min^-1。该酶分子量经SDS-PAGE检测为51kD,等电点为pH5.7,酶促反应最适pH7.5,最适温度45℃。6.2μmol/L的除草剂草甘膦能抑制EPSP合成酶活性的50%。 相似文献
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亲和层析纯化HepG2细胞分泌的PAI—1 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道用抗PAI-1单克隆抗体(McAb)亲和层析建立了纯化PAI-1的简便方法。经免疫亲和层析,Sephacryl S200凝胶过滤,从HepG2细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的PAI-1,回收率为84%,PAI-1比活性为6.1×10^4IU/mg。糖基化PAI-1分子量为50kD,比活性5.8×10^4IU/mg。非糖基化PAI-1分子量43kD,占总PAI-130%,仍具有PA 相似文献
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内皮素—1对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞产生孕酮的影响 总被引:6,自引:1,他引:6
本文用离体细胞体外孵育法研究了内皮素-1(ET)对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞孕酮生成的影响及其作用机理。结果发现,ET能显著抑制hCG刺激下的孕酮产生,抑制作用在浓度为10-8mol/L时,即有显著意义(P<0.05,n=6),至10-7mol/L时则有非常显著的意义(P<0.01,n=6);不同浓度ET(10-7—10-7mol/L),对颗粒细胞基础孕酮的产生无明显影响。进一步研究表明,ET对hCG刺激下孕酮生成的抑制作用,在用免抗人内皮素抗血清(ET-A)1:1000及cAMP后能明显被逆转。实验中还观察到,ET使颗粒细胞LH/hCG受体数下降,亲和力降低。本文结果提示,ET可能为卵巢内的一种局部调节肽,通过作用于ET受体,干扰LH/hCG受体功能和cAMP生成而抑制颗粒细胞孕酮的产生。 相似文献
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γ—氨基丁酸(GABA)对离体大鼠卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
本文观察了GABA对大鼠分散颗粒细胞生孕酮的影响。结果表明:当GABA浓度为10^-^6mol/L时明显促进颗粒细胞基础孕酮分泌(P<0.05)。但更高浓度(10^-^5mol/L)时则表现抑制HCG刺激孕酮生成的效应(P<0.02)。提示颗粒细胞的激素分泌功能可能受到GABA的调控。 相似文献
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人血管内皮细胞生长因子受体Flt—1胞外区cDNA在毕赤酵母中的?… 总被引:2,自引:0,他引:2
将编码血管内皮细胞生长因子受体FIt-1胞外区1-3loop316个氨基酸残基的cDNA插入到含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母载体中,构建了重组表达质粒pPIC9K/FIt=1(1-3),转化酵母景菌GS115,筛选His^+Mut^s表型转化子,经插瓶培养,1%甲醇诱导表达4d后,SDS-PAGE结果显示,培养上清中FIt-1(1-3)表达这总蛋白的30-% 相似文献