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相似文献
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1.
本文首次提出用ABC(AvidinBiotinComplex)法标记细胞膜受体,通过FRAP(FluorescenceRecoveryAfterPhotobleaching)技术,测量细胞内吞过程中受体流动性变化的方法。实验选择巨噬细胞ConA受体,比较了用ConA-Biotin+Avidin-FITC(ABC法)和ConA-FITC(直接法)标记的膜表面ConA受体荧光强度和内吞过程中受体的流动性测量结果。结果显示ConA-Biotin+Avidin-FITC标记的巨噬细胞膜受体的平均荧光强度比用ConA-FITC标记的平均荧光强度高大约3倍;ABC法标记的受体,测量结果误差小、灵敏度高;ConA刺激15min后,巨噬细胞膜表面ConA受体的扩散系数和荧光恢复率较静息状态时明显下降。讨论了两种标记方法对测量结果的影响  相似文献   

2.
本文首次实现了细胞内吞过程中膜受体流动性的测量。实验选择巨噬细胞膜和伴刀豆凝集素A(ConA)。分别用ConA-Biotin+Avidin-FITC(ABC法)和ConA-FITC(直接法)两种方法标记巨哓细胞膜ConA受体,比较了这两咱方法标记的巨噬细胞ConA受体的荧光强度,利用FRAP技术。分别用两种标记方法测量了巨细胞ConA受体的流动性。结果显示ConA-Biotin+Avidin-FI  相似文献   

3.
本文用FRAP(fluorescencerecoveryafterphotobleaching)技术,测量了静息状态和刀豆素A刺激不同时间后巨噬细胞膜磷脂、ConA受体扩散系数和荧光恢复率的变化。结果显示ConA刺激后膜磷脂和ConA受体的扩散系数和荧光恢复率均较静息状态的巨噬细胞明显降低,磷脂流动性的变化与ConA受体流动性的变化呈正相关。提示受体介导内吞导致的膜磷脂流动性的降低,可能是由于配体与细胞膜上受体结合形成配体-受体复合体,增加了受体的负荷,使受体的流动性降低,进而使膜磷脂的流动性降低。巨噬细胞内吞过程中膜磷脂和ConA受体流动性的降低,可能还与ConA刺激后巨噬细胞胞浆pH值有关。  相似文献   

4.
FITC-dextran标记培养的小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体,ConA-FITC标记细胞内吞。用激光扫描共聚焦显微镜测量伴刀豆球蛋白(ConA)、ATP引起的巨噬细胞溶酶体pH动态变化和ATP对细胞内吞ConA-FITC的影响。结果显示ConA引起巨噬细胞溶酶体pH迅速增加,6min左右达到峰值(pH5.7);ATP刺激30min后再加入ConA,溶酶体pH无明显变化(pH4.0);同时加入ATP和ConA,5min左右溶酶体pH降到最低点(pH4.1);ATP对巨噬细胞内吞ConA-FITC有明显的抑制作用。探讨了受体介导内吞与溶酶体pH的关系。  相似文献   

5.
人食管鳞状上皮癌糖复合物表达的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
凝集素可与其相对应的糖复合物特异性结合。在癌症形成过程中细胞表面经历着显著的变化,本文用十种生物素化凝集素即UEA-I、RCA-I、DBA、PSA、PNA、BSL、LCA、WGA、ConA和SBA作为探针,对正常食管上皮和食管鳞状上皮癌进行研究,以确定正常食管上皮和食管鳞状上皮癌中糖复合物的改变,结果发现,PNA和PSA在正常食管和食管鳞状上皮癌中均无反应,RCA-I、DBA、BSL、LCA、ConA和SBA受体在正常和癌组织中有着特征性变化,BSL和DBA在食管中无反应,LCA、SBA和RCA-1正常食管和食管鳞状上皮癌中反应方式不同,ConA和WGA则在同一癌组织的不同部位都显示出不同的反应。尽管UEA-I在正常食管和食管鳞状上皮癌均呈阳性反应,但似乎未表现出有意义的变化。上述结果提示食管癌的发生与含α-D-GalNAc(DBA和SBA)、β-D-Gal/β-N-acetyl-D-Galactosamine(RCA-I)、α-D-Glc/α-D-Man(LCA和ConA)、[β-(1-4)-D-GlcNAc]2/NeuNAc(WGA)和α-D-Gal(BSL)等的糖复合物的改变有较为密切的关系。  相似文献   

6.
配体与膜受体结合可启动细胞信息传递通路,激活细胞并产生生物学效应。应用共聚焦激光扫描显微术,流式细胞分光光度计,生物活性测量等技术,研究MA与巨噬细胞膜受体结合后,膜下肌动蛋白丝构筑和含量随时间变化,以及细胞热能量改变。结果是ConA结合巨噬细胞膜受体后,膜下肌动蛋白多聚化加快,构筑成细胞内F-actin立体空间网络,F-actin含量增加具有时间相关性,细胞热能量增加。巨噬细胞内这些变化提示ConA通过膜受体诱导膜下肌动蛋白多聚化和构筑过程有信息传递和激活细胞等重要作用。  相似文献   

7.
配体与膜受体结合可启动细胞信息传递通路,激活细胞并产生生物学效应。应用共聚焦激光扫描显微术,流式细胞分光光度计,生物活性测量等技术,研究MA与巨噬细胞膜受体结合后,膜下肌动蛋白丝构筑和含量随时间变化,以及细胞热能量改变。结果是ConA结合巨噬细胞膜受体后,膜下肌动蛋白多聚化加快,构筑成细胞内F-actin立体空间网络,F-actin含量增加具有时间相关性,细胞热能量增加。巨噬细胞内这些变化提示ConA通过膜受体诱导膜下肌动蛋白多聚化和构筑过程有信息传递和激活细胞等重要作用。  相似文献   

8.
蔡惠罗  李成勇 《动物学报》1995,41(3):299-304
位于突触体质膜的外向型(ecto)Mg^2-ATP酶具有水解ATP活性,能量偶联的AC-MA荧光淬灭实验表明Mg^2+-ATP酶水解ATP时向膜内转移质子,建立跨膜质子梯度,跨膜质子梯度可以被电中性K^+/H^+离子载体Nigericin消除,利用H^+敏感的BCECF荧光分子测定突触的pHi变化,结果表明水解ATP产生的质子转移突触体pHi下降了光分子测定突触的pHi变化,结果表示水解ATP产生  相似文献   

9.
用细菌/杆状病毒(Bac-to-Bac)系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白(GFP)与HCV抗原的双功能融合蛋白,经ELISA测定和荧光显微镜观查证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有HCV的抗原活性,实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原,为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础.  相似文献   

10.
为探讨肿瘤转移与细胞表面的糖结构的关系,对小鼠肝癌细胞的高、低淋巴道转移株Hca-F和Hca-P进行了蛋白质电泳及经蛋白质印迹术后的5种凝集素(ConA、WGA、UEA、SBA、PNA)结合糖蛋白谱的对比分析.结果表明:高、低转移两株细胞的SDS-PAGE谱基本相同;ConA特异结合糖蛋白共有5种(~72,80~90,~104,~150,~200kD);其中较明显的差异为~72kDConA特异结合糖蛋白,它在Hca-P细胞的表达明显高于Hca-F细胞.WGA特异结合糖蛋白1种(~150kD),在Hca-P细胞的表达略高于Hca-F细胞.此外,实验发现两种性质未明的蛋白质(~79,~130kD),后者在Hca-P细胞的含量明显高于Hca-P细胞.结果提示Hca-F和Hca-P细胞不同的转移表型可能与其糖蛋白的表达有一定的关联.  相似文献   

11.
本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞(PASMCs),观察了外源性血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)、BN52021(PAF受体拮抗剂)、吲哚美辛、维拉帕米对PASMCs产生血栓素A_2(TxA_2)、前列环素(PGI_2)及对细胞膜Ca~(2+)-ATPase活力的影响。结果表明:(1)基础状态下PASMCs存在花生四烯酸(AA)代谢。(2)外源性PAF通过受体后途径激活环加氧酶促进AA代谢致TXA_2及PGI-2增加,TXA_2/PGI_2比值无明显变化。(3)外源性PAF能直接抑制Ca~(2+)-ATPase活力。(4)维拉帕米可逆转PAF抑制PASMCs膜Ca~(2+)-ATPase活力的效应。  相似文献   

12.
为探讨正常大鼠与吞噬功能缺陷大鼠视网膜色素上皮(RPE)和视杆细胞外节(ROS)膜表面的甘露糖受体的存在和分布,本实验用胶体金标记物对12只Wistar大鼠和12只RCS大鼠的RPE细胞及临近其顶部的ROS表面的Con-A受体进行标记.结果表明。两种大鼠RPE细胞及ROS膜表面均有胶体金标记物.胶体金标记物在两种RPE细胞微绒毛上分布密度较低,而在两种大鼠ROS膜表面分布密度则高。说明两种大鼠RPE细胞和ROS膜表面均有Con-A受体分布。在两种大鼠ROS被RPE细胞吞入后,均无胶体金标记物。  相似文献   

13.
小鼠精子表面Con A结合糖复合物的形成与变化   总被引:4,自引:0,他引:4  
用辣根过氧化物酶标记的ConA(伴刀豆素A)对小鼠睾丸与附睾切片,以及对取自附睾和子宫(交配后)内的精子涂片进行了标记,旨在认识精子在发生、成熟和获能过程中表面糖复合物的形成与变化。本研究表明,睾丸内的生精细胞和支持细胞均呈ConA标记阳性。附睾的输出小管和附睾管上皮细胞,ConA标记呈中度至强阳性,有部位的差别。附睾头和附睾尾内精子表面的标记无明显差别,标记位置均主要在顶体区和尾部。精子在子宫内存留1.5小时后,顶体后区出现中度阳性标记,但存留3小时和6小时后,顶体和顶体后区的标记均减弱或消失。这些结果提示,(1)精子发生期即可合成ConA结合糖复合物,(2)精子在附睾成熟过程中表面的ConA结合糖复合物无明显变化,(3)精子获能后顶体后区出现的ConA结合糖复合物可能与受精能力有关。  相似文献   

14.
利用APAGE,荧光原位杂交技术和RFLP标记,对导入黑麦(SecalecerealeL.)多小穗等性状创制的小麦新种质10-A进行了分子标记检测,APAGE分析发现,10-A与其他1RS/1BL易位系一样,含有1RS的醇溶蛋白标记位点Gld1B3。以黑麦基因组总DNA作探针,用中国春(Triticumaestiumcv.ChineseSpring)基因组DNA作封阻,与10-A根尖细胞有丝分裂染  相似文献   

15.
重组人GM—CSF基因在昆虫细胞中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)带β-Galactosidase基因标记的非融合蛋白基因转移载体pBlueBac将人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因成功地插入病毒AcNPV的基因组中.hGM-CSF基因在感染重组病毒的草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)培养细胞Sf9中得到表达,感染后的Sf9细胞培养液能刺激人骨髓细胞在体外形成典型的集落,表达水平可达2.7×1055CFU/ml。以hGM-CSF单抗所作的WesternBlotting表明,表达的hGM-CSF对是3种糖基化程度不同的产物,分子量分别约为15kd,18kd和20kd。  相似文献   

16.
脱落酸对植物线粒体膜生物物理特性的影响   总被引:3,自引:1,他引:2  
采用1,6-二苯基-1,3,5-已三乙烯(DPH)荧光偏振法和中性红法分别研究了脱落酸(ABA)对玉米黄化芽及大豆子叶离体线粒体膜的微粘度(η)、表面电位(ψ)等生物物理特性的影响。结果表明:ABA有降低线粒体膜的微粘度及提高线粒体膜的表面电位作用,并导致呼吸速率升高,呼吸控制和氧化磷酸化偶联下降。ABA对线粒体膜微粘度的作用具有浓度饱和效应;ABA对线粒体膜表面电位的提高作用,因植物不同而有差异,对玉米的作用要大于对大豆的。追踪线粒体A(350)值的变化,还证实,ABA提高了大豆线粒体的A(350)值,即导致大豆线粒体的相互聚集(aggregation)。  相似文献   

17.
运用ABC法研究50例乳腺癌三种凝集素受体(Lectin-R)的表达,并以乳腺纤维瘤和乳腺小叶增生症各10例作为对照。结果表明:该三种凝集素受体在乳腺良、恶性病变中的表达率无显著性差异。COnA-R在乳腺癌以胞浆型定位为主,在纤维腺瘤则以胞膜型多见(P<0.05)。LCA-R和PSA-R在乳腺三种病变中均以胞浆型为主。ConA-R与乳腺癌分化程度具良好的相关性;LCA-R与乳腺癌瘤体大小有关。该三种凝集素受体与ER、PR及CEA的表达未显示密切的关联。  相似文献   

18.
用TBA法测定了三尖杉酯碱的膜脂氧化效应;用纳秒荧光偏振技术研究了氧化膜脂对DPH标记大鼠心肌肌质网膜脂、ANM标记心肌肌质网Ca2+-ATPa功能及磷酸化微区运动状态的影响。随膜脂中氧化磷脂的增加,肌质网膜脂双层的微粘度增加,磷脂分子摆动角减小:DPH的荧光强度减弱,荧光寿命缩短。Ca2+-ATPase的ATP水解活性降低。ANM标记Ca2+-ATPase磷酸化微区的r(t)曲线半衰期减至68±4nsec。结果提示,膜脂中氧化磷脂的含量影响膜脂双层的流动性及Ca2+-ATPase的ATP水解活性和磷酸化微区的微细结构。  相似文献   

19.
本文用荧光标记的受体底物〔Gnβ1-2Mα1-6(Gnβ1-2Mα1-3)Mβ1-4Gnβ1-4(Fucα1-6)Gn-PA〕,结合高效液相层析(HPLC)建立了细胞表面β1-4半乳糖基转移酶的活性检测方法。用这种方法研究HL60细胞,发现不同的培养时间,其细胞表面的酶变化明显,在24小时酶活性最高,此时细胞处在分裂间期。用佛波酯(PMA),视黄酸(RA)等细胞诱导分化剂处理HL60细胞株时,发现其表面活性发生了明显的变化,PMA诱导的细胞其表面酶活性在24小时变化最大,升高到对照的1.3倍;而RA处理的细胞其表面酶活性在72小时变化最大,升高到对照的1.72倍。  相似文献   

20.
五种栎属植物订正周浙昆(中国科学院昆明植物研究所,昆明650204)NotesonFiveQuercusfromChinaZHOUZhe-Kun(KunmingInstituteofBotany,TheChineseAcademyofScience...  相似文献   

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