G_3基因工程菌发酵中pH值对包涵体形成及目的蛋白表达的影响

在不同pH值条件下摇瓶及罐发酵G3双体分子重组菌．探讨pH值对G3双体分子包涵体形成及目的蛋白表达水平的影响,确定G3双体分子重组菌发酵最佳pH值为生长期pH7．0—7．2,生产期pH6．7－6．8．     

镰刀菌李瑟组研究：Ⅲ.镰刀菌李瑟组的生长发育和培养基pH值关系的…

培养基的ｐＨ值能影响李瑟组镰刀菌的生长速度,菌落形态,色泽,产孢量及大孢子形状等。ｐＨ３－４菌落偏向红色,ｐＨ６－７菌落为紫色,ｐＨ１０则有此菌株变为淡蓝色,灰色。但菌株能改变基物的ｐＨ值。李瑟组镰刀菌的６个菌株最适生长发育ｐＨ值为６－７。     

镰刀菌李瑟组研究Ⅲ．镰刀菌李瑟组的生长发育和培养基pH值关系的研究

培养基的ｐＨ值能影响李瑟组镰刀菌的生长速度、菌落形态、色泽、产孢量及大孢子形状等。ｐＨ３－４菌落偏向红色,ｐＨ６－７菌落为紫色,ｐＨ１０则有些菌株变为淡蓝色、灰色。但菌株能改变基物的ｐＨ值。李瑟组镰刀菌的６个菌株最适生长发育的ｐＨ值为６－７。     

聚β—羟基丁酸产生菌Z5—GⅡ发酵条件的研究

对聚β－羟基丁酸（ＰＨＢ）产生菌Ｚ５－ＧⅡ的发酵培养基及发酵条件进行优化研究;结果表明：该菌株在蔗糖１％,酵母粉０．３％,酵母浸汁０．３％,Ｋ２ＨＰＯ４０．２％;ｐＨ７．２￣７．４的优化发酵培养基中,接种量８％,种２８ｈ,发酵培养３６ｈ,细胞干重为６．８７ｇ／Ｌ,ＰＨＢ产率可达的细胞干重的６１．８６％。该菌株还可利用葡萄糖生产废液为碳源生产ＰＨＢ,具有实现工业化生产的潜力。     

花生乳的乳酸菌发酵研究Ⅱ．乳酸菌的筛选和发酵产物初测

利用溶钙圈等方法从不同生境中分离乳酸菌,从中筛选出能利用花生乳生长发酵的三株菌ＴＬ－Ｐ３、ＴＬ－Ｂ１３和ＴＬ－Ｓｔ。此三株菌在３８℃发酵１０ｈ后,花生乳ｐＨ值可从６．５降至５．０。定性测出发酵产物中有乳酸和双乙酰。发酵后的花生乳具有特殊香味,有凝乳现象产生。     

温度和pH对B.s.C3—41菌株生长和毒力的影响

本文报道了不同培养温度和液体培养基的起始州值对球形芽孢杆菌Ｃ３－４１菌株的生长和毒力的影响绪果。在２０－４０℃下分别进行摇瓶发酵实验时,以３５℃下培养的发酵液菌数最高,杀蚊毒力最强,其生长周期最短;当将液体培养基ｐＨ分别调至５、６、７、８、９、１０在３０℃以２２０ｒ／ｍｉｎ进行摇瓶发酵时,证明在ｐＨ７下培养的发酵液毒力最强。     

单宁酶的固定化及其在酯型儿茶素水解反应中的应用

采用自制的壳聚糖为载体对单宁酶（ＴＡ）固定化,ＴＡ与壳聚糖配比１：２．５,３０℃固定２ｈ,活力回收达２３．６％～３３．１％;偶联效率为８４．９％～８８．０％。固定化单宁酶（ＩＴＡ）的表观Ｋｍ值（以没食子酸丙酯为底物）为２２．２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ,ＴＡ的Ｋｍ值（以没食子酸丙酯为底物）为１０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ,ＴＡ和ＩＴＡ的最适反应温度分别为４０℃和５０℃;６０℃处理１５ｍｉｎ,残存活性分别为１３．６％和６０．３％。ＴＡ和ＩＴＡ的最适ｐＨ值分别为５．８和６．４;ＴＡ在ｐＨ４．８～７．８活力稳定,而ＩＴＡ活力稳定范围在ｐＨ４．８～６．８．ＩＴＡ作用于ＥＧＣＧ的半衰期为７８．７ｈ,ＥＧＣＧ水解率达９０．３％。对茶多酚提取物进行水解,其所含的酯型儿茶素ＥＧＣＧ和ＥＣＧ水解率分别为９６．４％和９６．８％,非酯型儿茶素ＥＧＣ和ＥＣ的含量显著增加。     

苹果渣发酵生产饲料蛋白的工艺条件

采用经试验所筛选出的菌种组合,通过试验,获得了苹果渣发酵的适宜工艺条件：接种比例为１：５－１：１０,接种量１５－３０％,料水比１０：７－１０：８,ｐＨ值为６－７,发酵时间３－４ｄ,静止发酵料层厚度不超过３０ｍｍ。发酵产物测定结果显示,粗蛋白含量达到２９．３０％,提高到４５．７７％。蛋白质含量达到２７．５６％,提高了８２．８８％,粗纤维含量降低了２３．２７％。     

小麦叶绿体中细胞分裂素结合蛋白的特性

小麦叶绿体中的ＣＴＫ结合蛋白属热敏感蛋白,它与６－ＢＡ结合的最适温度约为２５℃;最适ｐＨ为８左右;在其蛋白分子上存在两类ＣＴＫ结合位点,高亲和力位点与６－ＢＡ结合的Ｋα值为１．１×１０－９ｍｏｌ／Ｌ,低亲和力位点的Ｋα值为９×１０－７ｍｏｌ／Ｌ;激动素、玉米素对６－ＢＡ的结合只有部分抑制作用,而ＡＢＡ、ＧＡ３、ＩＡＡ及腺嘌呤则无竞争作用。ＣＴＫ结合蛋白分子中的中性氨基酸含量很高,在中性介质中带弱负电。     

黑曲霉A3木聚糖酶固体发酵研究

筛选了一株高产木聚糖酶的黑曲霉Ａ３菌株,研究了其在固体培养基中的发酵条件。该菌最适培养条件为：起始ｐＨ４．６。２８℃,１ｍｌ孢子悬液接种量,蔗渣粉：麸皮为１．５：１,发酵３天,木聚糖酶活力可达５１４７ＩＵ／ｇ培养基干重。氮源组成,温度、ｐＨ及发酵时间对曲中木聚糖酶和纤维素酶的比例有较大影响。与液体发酵相比,粗酶的最适反应温度均为５５℃,最适反应ｐＨ值分别为４．６和４．２,在不同温度下保温１ｈ,测得     

2—酮—L—古龙酸还原酶分离纯化及其理化,酶学性质的研究

从发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ和Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ２９８０混和菌株的无细胞抽提液中分离到了２－酮－Ｌ－古龙酸还原酶（ＫＧＲ）,测得其分子量为９０ｋＤａ。动力学性质研究表明它为一个典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对２－酮－Ｌ－古龙酸作用的Ｋｍ值为３．４２×１０＾－３ｍｏｌ,最适作用ｐＨ为６．５,最适作用温度为３０℃。２－酮－Ｌ－古龙酸还原     

地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediteranei)U-32硝酸还原酶的定位、纯化及性质

在力复霉素ＳＶ研究中,发现硝酸盐对抗生素合成呈现多效性作用,不仅大幅度提高产量,还对产生菌——地中海拟无枝菌酸菌生理产生多方面的影响,从而提出整体性调节的结论．这一多效性作用是由硝酸盐所引起的,为此对硝酸还原酶进行了研究．首先,通过原生质体渗透裂解发现地中海拟无枝菌酸菌Ｕ－３２的硝酸还原酶是一个胞质酶．该酶极不稳定,缓冲液中加入硝酸钾、甘油等保护剂能极大地提高其稳定性．通过硫酸鱼精蛋白沉淀,硫酸铵分级分离,Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ、Ｂｉｏ－ＧｅｌＡ１．５ｍＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析等多步纯化得到了电泳纯的硝酸还原酶．该酶为一７９ｋＤ的单亚基酶,每分子酶含有约２．２９原子的钼,但并不含有非血红素铁、酸不稳定硫、ＦＭＮ及ＦＡＤ,其等电点为６．２,反应最适ｐＨ为７．２,最适温度为４０℃．对硝酸根的Ｋｍ值为１３．３μｍｏｌ／Ｌ．同时分析了该酶的吸收光谱．     

Ap—2号溶磷黑曲霉深层发酵工艺的研究

为了实现Ａｐ－２号磷菌肥的工业化生产,对Ａｐ－２号溶磷黑曲霉进行了深层发酵工艺的研究。确定了最佳发酵条件：Ｃ／Ｎ１０：１;菊花糖４％,黄豆饼粉２％,麸皮１％,酵母粉０．５％,ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．０５％,Ｋ２ＨＰ０４,０．１％,温度３０℃,ｐＨ６,摇床转数１８０ｒ／ｍｉｎ,发酵９６小时,ｐＨ降至３．１,残糖降至１％以下,柠檬酸、草酸总量达３％以上,菌丝浓度达２．５ｇ／ｍｌ。采用ＥＳ－１５型自控发     

无花果蛋白酶在阴离子交换树脂上的固定化

无花果蛋白酶通过８％戊二醛活化载体,共价结合到聚苯乙烯阴离子交换树脂ＧＭ２０１上,固定化作用在ｐＨ７．７,酶浓度０．８ｍｇ／ｇ树脂,４℃下进行６ｈ。得到的固定化酶表观Ｋ_ｍ值（酪蛋白,１．１１×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）小于溶液酶Ｋ_ｍ值（１．９６×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）;固定化酶活性在ｐＨ６～８保持稳定,溶液酶最适ｐＨ为７．２;固定化酶最适温度由溶液酶的５０～６０℃移至３７℃;固定化酶２５℃保持７ｄ,重复水解酪蛋白７次后,保留８３．３％活性。固定化酶对酪蛋白水解度达４７．５％,对大豆球蛋白达１１．６％。     

正交试验设计法考察苏云金杆菌“140”－51培养基

我们运用了正变试验设计法对经过复壮、紫外线照射处理的苏云金杆菌“１４０”－５１菌株进行培养基的考察,采用Ｌ２７（３１３）的正交表来安排培养基中影响发酵单位的几个主要因子［１．２．３］,其它试验条件固定为;培养温度３０±１℃,１５ｍｌ装量／５００ｍｌ三角瓶,摇床转速２１０ｒ／ｍｉｎ,ｐＨ值控制在每一配比培养基灭菌后为ｐＨ６．８～７．２范围内。     

菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质

利用硫酸铵分级沉淀,Ｓｅｐｈｅｄｅｘ Ｇ－５０凝胶柱层析,ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｑ和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了ＥＰＳＰ合成酶。该酶被纯化２９６１．６倍,比活性达到６２１９．４ｎｍｏｌｍｇ＾－１蛋白ｍｉｎ＾－１。该酶分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为５１ｋＤ,等电点为ｐＨ５．７,酶促反应最适ｐＨ７．５,最适温度４５℃。６．２μｍｏｌ／Ｌ的除草剂草甘膦能抑制ＥＰＳＰ合成酶活性的５０％。     

蔗糖酶和GOD的共固定化研究

本文研究了用吸附交联技术共固定化蔗糖酶和葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）的方法,考查了共固定化酶的动力学性质。试验结果表明：与溶液酶相比较,固定化蔗糖酶和ＧＯＤ的响应滞迟期分别为３分钟和２分钟,４态响应时间增加６分钟和４分钟,Ｋｍ值增大,ｐＨ─活力曲线变宽,最适ｐＨ值分别增大０．７和０．６４,最适温度则降低７．３℃和１６℃。以活性氧化铝作载体,戊二醛作交联剂制备的共固定化蔗糖酶和ＧＯＤ,其蛋白质固定化率为９２．９％,分解葡萄糖的总速度为４４１．６ＩＵ,当蔗糖浓度在０．２％以内时其反应速度与蔗糖浓度呈正相关（ｒ＝０．９９６）,使用半衰期１６２３次,在４℃下保存１２０天活力残存为８３．７％。     

产碱菌麦芽四糖淀粉酶的底物特异性

产碱菌Ｇ４Ａ仅能水解由α－１,４－葡萄糖苷键连接的麦芽寡糖、淀粉或糖原。淀粉和糖原的水解产物为Ｇ４;麦芽寡糖Ｇ５,Ｇ６和Ｇ７的水解产物分别为Ｇ４＋Ｇ、Ｇ４＋Ｇ２和Ｇ４＋Ｇ３,水解速度为Ｇ５〈Ｇ６〈Ｇ７。直链淀粉的水解限度为１００％,其他淀粉为６０￣７４％,糖原仅３４％,表明该酶为从麦芽寡糖、淀粉或糖原非还原末端顺序切割第４个α－１,４－葡萄糖苷键的外切型淀粉酶。Ｇ４Ａ对Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７及直链淀粉、     

大肠杆菌精氨酰－tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化和基本性质

本文从含ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ基因ａｒｇｓ３０６ＫＲ的ｐＵＣ１８重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步柱层析,得到电泳一条带的ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ。纯酶的比活为２７９０单位／毫克。该酶氨酰化和ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力的最适ｐＨ分别为ｐＨ８．３和ｐＨ７．５。氨酰化活力对ＡＴＰ、Ａｒｇ和ｔＲＮＡ的Ｋｍ分别为２．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１４．０μｍｏｌ／Ｌ和５．０μｍｏｌ／Ｌ：Ｖｍａｘ为７６３０单位／毫克;ｋｏａｔ为９Ｓ－１。ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力对ＡＴＰ和Ａｒｇ的Ｋｍ分别为８．３ｍｍｏｌ／Ｌ和９９μｍｏｌ／Ｌ;Ｖｍａｘ为１６３２０单位／毫克;ｋｃａｔ为１８Ｓ－１。     

两相分配法制备玉米根质膜及其纯度鉴定

用ＤｅｘｔｒａｎＴ５００,ＰＥＧ３３５０两相体系制备玉米根质膜．首先在高盐浓度（２２ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）下选用五种不同的聚合物浓度（５．８％、６．０％、６．２％、６．３％、６．４％,Ｗ／Ｗ）,研究了玉米根质膜在两相体系中的分配情况,在此基础上进一步研究了Ｎａ－Ｃｌ浓度（２、４、５、１１、２２ｍｍｏｌ／Ｌ）对玉米根质膜的纯度及得率的影响．结果表明,制备玉米根质膜选用６．２％（Ｗ／Ｗ）聚合物浓度,７．５ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的两相体系比较合适．标志酶鉴定及低ｐＨ值磷钨酸染色电镜检测均表明获得了高纯度密实的正向型的质膜囊泡,质膜标志酶ＶＯ３－４－ＡＴＰａｓｅ的活性潜势达８８．９％．