人类免疫缺陷病毒1／2型抗体检测酶联免疫试剂盒的研制

采用二聚体合成肽（ＨＩＶ－１ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ｐ２４和ＨＩＶ－２ｇｐ３６）包被酶标板条制备成固相抗原,与鼠抗人ＩｇＧ单克隆抗体酶标记物、底物ＴＭＢ及阴阳性参考血清配套制备成ＨＩＶ抗体ＥＩＡ试剂盒,专供检测人血清或血浆ＨＩＶ１／２抗体之用。以荷兰、韩国及万泰试剂作为对照,用该试剂盒对检定所的Ｐａｎｅｌ标准及献血员１５５５０例（其中ＨＣＶ抗体阳性１２８例,ＨＢｓＡｇ阳性４６例）进行检测,四种试剂对检定所Ｐａｎｅｌ标准的１３份阳性血清均呈阳性反应,２８份阴性血清均为阴性;献血员１５５５０例,四种试剂对其中１份血清均呈阳性反应,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验证实为阴性,四种试剂的阴性检出率均为９９．９９％。连续制备三批试剂经中国药品生物制品检定所检定,所检项目全部合格;同时委托检定所进行临床考核,４７份阳性血清全部呈阳性反应,１５０份阴性血清全部为阴性。说明该试剂盒具有很好的敏感性和特异性。     

静脉注射吸毒人群HIV／AIDS数学模型分析

建立了四川省西昌市静脉注射吸毒人群HIV／AIDS传播的数学模型,给出了模型的理论分析和数值模拟结果．通过必要的分析,给出了各类平衡点的存在性和稳定性,系统的一致持续生存,以及基本再生数的数学表达式和具体取值．揭示了该静注人群中的HIV／AIDS有进一步蔓延的趋势,但如果采取适当的干预措施,该静注人群中HIV／AIDS流行可得到有效的控制．     

我国HIV—1B‘／重组流行株Tat蛋白的表达、纯化及功能分析

根据全国HIV分子流行病学研究发现,B’和C亚型HIV－1在我国发生了重组,并以优势株形式在我国广泛流行。为了探讨这种HIV－1B’／C重组毒株tat基因的变异与其表型之间的关系。利用pET表达系统大肠杆菌中高效表达了三种不同基因变异类型的tat蛋白,重组蛋白占菌体总蛋白的26％,Western blot显示较好的反应原性,并通过金属鏊合层析纯化了目的蛋白。荧光素酶活性检测表明：体外表达的Tat蛋白具有明显的生物学活性,可以反式激活HIV LTR引导的报告基因的表达;三种Tat蛋白在激活活性上的差异与流行现场检测的病毒载量的高 存在明显的对应关系,说明tat基因的变异可以引起病毒生物学特性的改变,进而影响病毒的流行特征,此结果为进一步研究我国HIV重组毒株的基因变异特征及变异规律奠定了基础。     

D1／D2／Cyt—559复合物的共振拉曼光谱

光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）反应中心Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ－５５９复合物在４８８ｎｍ处激发的共振拉曼谱显示４个主要谱带,其峰位分别在１５３２（ｖｌ）１１６５（ｖ２）１０１０（ｖ３）和９７０（ｖ４）ｃｍ＾－１处,表明ＰＳⅡ反应中心结合的β－胡萝卜素分子是全反式构型。Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ－５５９复合物在色素抽提液的拉曼光谱也显示４个主要的拉曼峰,其中ｖ４谱带的强度急剧下降,说明ＰＳⅡ反应中心内部结合的β－胡萝卜素     

CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞与黑龙江省HIV／AIDS患者病情相关性的研究

目的：比较黑龙江省H1V／AIDS患者与健康对照者（healthy controls,HCs）外周血cD4＋CD25＋F0xP3＋调节性T细胞数量、免疫抑制功能的变化,探讨CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞在HIV／AIDS感染过程中的作用。方法：采用流式细胞仪检测21例HIV／AIDS患者及20例健康对照组的外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞数量的百分比及绝对数量;采用共同培养方法检测HIV／AIDS患者外周血cD4℃D25十FoxP3＋调节性T细胞免疫抑制功能的变化;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-FQ-PCR）检测HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞中FoxP3mRNA的表达。结果：黑龙江省HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25下oxP3＋调节性T细胞比率明显高于HCs（P〈O．01）,而CD4-CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的绝对计数显著下降,且与CD4＋T细胞绝对计数成反比;混合淋巴细胞共同培养结果显示,HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的抑制功能无明显变化;HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的FoxP3mRNA相对表达量无显著变化。结论：黑龙江省HIV／AIDS患者cD4℃D25＋FoxP3＋调节性T细胞的数量变化与病情相关。     

伪狂犬病病毒上海株gE^-／gI^-／GFP^＋缺失株的生物学特性初步研究

在构建了伪狂犬病病毒上海株的缺失载体pgEI-GFP基础上,将pgEI-GFP转染感染了PRV-SH株的BHK-21细胞,待出现80％以上的细胞病变时收获病毒,并以绿色荧光蛋白为标志,通过蚀斑法得到纯化重组病毒gE^-／gI^-／GFP^ 缺失株。研究了该缺失株的的安全性、在细胞上的生长特性以及对断奶仔猪的安全性、免疫原性等生物学特性。试验结果显示,缺失了gE^-和gI^-后,不影响其在RK细胞上的生长状况和病毒的滴度。该疫苗株对小鼠的半数致死量比亲本毒低且对家兔的致死性的时间延长了,这表明该疫苗的毒力比亲本毒有所下降。该缺失株对断奶仔猪安全,无不良接种反应,接种断奶仔猪能抵御高剂量PRV-SH株强毒的感染,攻毒后试验猪的发热期、散毒天数均低于对照组。该缺失株接种仔猪后在试验期间一直维持较高水平的中和抗体。     

造血干／祖细胞的基因转移

近年来发展的造血干／祖细胞基因转移技术被广泛用于血液遗传病的体细胞基因治疗研究。ＣＤ３４＾＋造血细胞含有高比例的原始造血干／祖细胞,是血液遗传病基因治疗的最佳受体细胞。以反转录病毒、腺相关病毒基因组为骨架构建的病功体因其高度感染特性而成为造血干／祖细胞基因转移的常用载体。随着珠蛋白基因表达调控规律的逐步阐明,人们已开始对人类最常见的血液遗传病－地中海贫血进行基因治疗的探索。     

大鼠心肌缺血／再灌及高脂血症的心肌膜损伤

通过大鼠心肌缺血／再灌及高脂血症的模型证实,两者均有明显的生物膜损伤,主要表现为膜磷脂的降低、胆固醇及胆固醇／磷脂比增高、膜脂流动性及膜酶(Ca²⁺, Mg²⁺-ATPase)活性降低,这些异常变化与氧自由基引发的脂质过氧化增强或脂质交换有关.     

Rel／NF—κB／IκB／IKK信号转导途径研究进展

真核细胞枋转导因子Ｒｅｌ／ＮＦ－κＢ家族广泛调控着自昆虫至人类的免疫和炎症反应中一系列基因的表达。静息状态下,ＮＦ－κＢ二聚体与抑制性蛋白ＩκＢ结合而存在于胞质中,当细胞受外源性刺激哩,ＮＦ－κＢ活化进入核内发挥其功能。目前,外源性信号活化ＮＦ－κＢ的机制已初步阐明,Ｒｅｌ／ＮＦ－κＢ／ＩκＢ／ＩＫＫ信号转导途径在蛋白质水平的相互调控,以及在肿瘤发生中的意义的研究也已获得一定进展。本文综述了近年来     

伪狂犬病病毒鄂A株TK－／gG－／LacZ＋突变株的构建

为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒pSTK1-4,进一步改造成为转移质粒pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化,然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/LacZ^ 突变株基因组DNA共转染PK－15细胞,等完全病变后,收毒作空斑试验,PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化3次,随机挑取空斑进行PCR扩增,证实所获得的病毒为均一的无TK^-/LacZ^ 突变株污染的TK缺失的重组病毒,分别以TK缺失株病毒与鄂A野毒株为模板对TK基因进行PCR扩增,扩增产物经酶切分析和测序后发现：TK缺失重组病毒的TK基因缺失了205个碱基,XhoⅠ和SalⅠ位点消失,SmaⅠ酶切片段发生变化,两种病毒在PK－15细胞上形成空斑的大小和增殖 滴度无明显的差别。进一步提取TK缺失突变株基因组DNA,与含gG-LacZ的转移质粒pUSKZ通过磷酸钙法共转染PK－15细胞,待完全病变后,在X-gal存在下筛选蓝斑,将桃取的蓝斑纯化3次后,对纯化的重组病毒进行TK、LacZ扩增,结果既能扩增出较以鄂A野毒株为模板扩增的要小的TK基因片段,同时又能扩增出LacZ基因,证实所得到的重组病毒为TK^-/gG^-/LacZ^ 突变株。此双缺失突变株的构建成功,为在我国最终根除伪狂犬病提供了有用的工具。     

血清／血浆microRNA及其应用

微小核糖核酸（microRNA,miRNA）在生物体的生长、发育及疾病的发生发展等过程中起着十分重要的作用。目前,人们关注的主要是miRNA在组织细胞内的功能。然而,最近的研究发现血清／血浆中存在一些循环的miRNA,血清／血浆miRNA在肿瘤、糖尿病等多种疾病中呈特异性表达,提示血清miRNA可作为潜在的生物标记物用于疾病的诊断和治疗。     

PEG／LiAc转化酵母细胞方法的改进

ＰＥＧ／ＬｉＡｃ法转化酵母适用于酵母双杂交系统的大量筛选,并能获得１０＾６转化子／μｇ质粒以上的转化率,但如果没有进口的ＰＥＧ３３５０而采用分子量接近的国产ＰＥＧ４０００进行转化的话,转化率仅为１０＾４,远低于文献报道的水平。我们报道了一个改进的ＰＥＧ／ＬｉＡｃ方法,采用国产ＰＥＧ６０００,转化率也能达到１０＾６,且能将的热激时间从２０ｍｉｎ缩短为２ｍｉｎ。     

FGFs／FGFRs信号传递的研究进展

成纤维细胞生长因子（ＦＧＦｓ）和成纤维细胞生长因子受体（ＦＧＦＲｓ）所形成的信号传递通路与疾病有着密切的关系。对阻断其信号传递的研究已成为治疗治疗和药物开发的新靶点。本文就ＦＧＦｓ／ＦＧＦＲｓ信号传递及与疾病关系的研究进展进行了综述。     

菠菜叶绿体光系统Ⅱ反应中心D1／D2／cyt b559长寿命荧光组分的来源

通过多频相位调制法测得菠菜叶绿体光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）反应中心Ｄ１／Ｄ２／ｃｙｔｂ５５９复合物的荧光衰减包括４个组分,其寿命分别大约为１、６、２４和７３ｎｓ,所占整个荧光的比例依次为５％、３４％、３５％和２６％。而寿命为６ｎｓ的组分来源于与电荷分离不相关的ｃｈｌａ分子,寿命为１ｎｓ的组分所占的比例很小,其来源不清楚。其中两个长寿命组分都与样品的光化学活性相关,但彼此又是不相关的,很可能来源于电荷分离后的两个不同的重组过程。