miR-25抑制结肠癌细胞凋亡

为了通过结肠癌细胞实验,探究miR-25对结肠癌细胞凋亡的影响,本研究通过qRT-PCR检测结肠癌细胞中miR-25的表达情况;通过CCK-8法检测miR-25抑制剂转染组细胞活力状态;将miR-25抑制剂转染至结肠癌细胞,通过蛋白免疫印迹法检测结肠癌细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;通过Caspase-3活性检测试剂盒检测结肠癌细胞中Caspase-3表达情况;通过流式细胞仪检测结肠癌细胞中ROS水平;通过Elisa试剂盒检测4-HNE、GSH和MDA含量。结果表明:结肠癌细胞中miR-25表达明显高于正常结肠粘膜组;miR-25抑制剂转染结肠癌细胞后,结肠癌细胞活力明显低于空载体对照组;miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中Bax蛋白显著高于空载体对照组(p0.05),且Bcl-2蛋白低于空载体对照组(p0.05),Caspase-3活性高于空载体对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于空载体对照(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后结肠癌细胞中4-HNE (p0.05)和MDA (p0.05)含量明显增加,GSH (p0.05)含量显著降低。miR-25抑制剂可促进结肠癌细胞凋亡,其机制可能与增加结肠癌细胞中ROS水平导致氧化应激水平增强有关。     

Pten基因沉默可抑制子宫内膜细胞增殖

本研究将Pten-siRNA转染至子宫内膜细胞,通过蛋白免疫印迹检测子宫内膜细胞中Pten蛋白的表达情况;通过MTT法检测Pten-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)细胞增殖状态;通过蛋白免疫印迹检测Pten-siRNA转染组和对照组子宫内膜细胞中PCNA、Ki67蛋白表达情况;通过流式细胞仪检测子宫内膜细胞Pten-siRNA转染组和对照组中ROS的水平,以探究Pten基因对子宫内膜癌发生发展的影响。研究表明,Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞中Pten蛋白明显低于对照组;Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞增殖率显著高于对照组(p<0.05);Pten-siRNA转染后,细胞增殖相关蛋白PCNA和Ki67明显高于对照组(p<0.05);Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞中ROS水平明显低于对照组(p<0.05)。本研究初步结论显示Pten-siRNA可降低子宫内膜细胞中Pten蛋白表达,抑制子宫内膜细胞的增殖并增加子宫内膜细胞中ROS水平。     

rBTI通过上调PTEN的表达抑制Hep G2细胞增殖

磷酸酶及张力蛋白的同源基因(PTEN) 是一种抑癌基因,可以调控细胞的增殖,与癌症的发生和发展息息相关。本研究采用MTT法和流式细胞术分别检测了重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)对人肝癌细胞株Hep G2细胞的增殖以及周期的影响。免疫荧光及Western印迹法检测了PTEN和p PTEN的亚细胞定位及蛋白表达的变化。采用qRT-PCR及Western印迹法检测了周期相关蛋白的表达。旨在探究PTEN和p PTEN在rBTI抑制Hep G2细胞增殖和周期阻滞中的作用。结果表明,rBTI能显著抑制Hep G2细胞增殖,将细胞周期阻滞在G0/G1期,并呈时间和剂量依赖性;rBTI作用于Hep G2后,可显著上调PTEN和p-PTEN的表达。同时发现,p-PTEN主要分布于细胞核中,能与核仁发生共定位;周期相关蛋白检测表明,细胞内p53、p21转录水平和蛋白水平均增加。综上所述,rBTI通过上调PTEN的表达,使得细胞周期阻滞于G0/G1期,进而抑制Hep G2细胞的增殖。     

CD47基因对食道癌细胞增殖的影响

本研究将CD47-si RNA转染至食道癌细胞,采用蛋白免疫印迹检测食道癌细胞中CD47蛋白的表达,MTT法检测CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)食道癌细胞增殖状态,蛋白免疫印迹检测CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)食道癌细胞中PCNA蛋白表达,DCFDA染色流式细胞仪检测食道癌细胞CD47-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)中ROS水平,以探究CD47基因对食道癌发生发展的影响。研究结果表明,CD47-si RNA转染组食道癌细胞中CD47蛋白明显低于对照组;CD47-siRNA转染组食道癌细胞增殖率显著低于对照组(p<0.05);CD47-siRNA转染组细胞增殖相关蛋白PCNA低于对照组(p<0.01);CD47-siRNA转染组食道癌细胞中ROS水平明显高于对照组(p<0.05)。本研究初步认为:CD47-siRNA可降低食道癌细胞中CD47蛋白表达,抑制食道癌细胞的增殖并增加食道癌细胞中ROS水平。     

逆转录病毒介导CD基因在人结肠癌细胞中表达

构建了含有大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因（ＥＣ－ＣＤ）的重组逆转录病毒载体ＬＣＤＤＳＮ。经ＰＡ３１７细胞包装后,感染人结肠癌细胞株ＬｏＶｏ。Ｇ４１８筛选得一的稳定表达ＥＣ－ＣＤ基因的细胞克隆ＬｏＶｏ／ＬＣＤＳＮ。ＬｏＶｏ／ＬＣＤＳＮ鹜型ＬｏＶｏ相比,生长曲线无明显差异,细胞形态亦无改变。ＬｏＶｏ／ＬＣＤＳＮ都对５－ＦＵ很敏感（ＩＣ５０约为０．５μｍｏｌ／Ｌ）。表达ＣＤ基因使细胞对基本无毒性的原药５－ＦＣ     

miR27a对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:检测mi R196a、mi R146a、mi R27a和mi R200a在结肠癌患者中的表达情况,研究差异mi RNA对结肠癌细胞功能的影响。方法:用PCR检测mi R196a、mi R146a、mi R27a和mi R200a在结肠癌患者癌组织中的表达情况;用转染技术高表达和低表达mi R27a后,检测结肠癌细胞的增殖能力和侵袭能力。结果:结肠癌组mi R27a的表达水平与正常组和大肠炎组相比显著增加(P0.05);mi R27a mimics转染组结肠癌细胞的增殖速度和侵袭能力显著增高(P0.05),且mi R27a inhibitors转染组结肠癌细胞的增殖速度和侵袭能力明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:结肠癌患者mi R27a的表达水平显著增高,且mi R27a能增强结肠癌细胞的增殖能力和侵袭能力。     

红花多糖可显著抑制HT29结直肠癌细胞增殖

本研究采用MTT法检测红花多糖对HT29结肠癌细胞增殖的抑制作用,观察大肠癌细胞凋亡的形态,采用Annexin V和PI双染流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,采用蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白的表达,试图研究红花多糖对HT29结肠癌细胞增殖的抑制作用及其相关机制。研究结果表明各浓度组的抑制率均明显高于对照组(p0.05)。随着药物浓度的增加,抑制率更显著,IC50=201.908 mg/L。实验组的浓度分别为160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L。HT29细胞周期的影响主要体现在HT29细胞G2/M期和S期。在实验组的浓度为160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L时细胞凋亡率显著高于对照组(p0.05)。在160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L组Caspase-3蛋白表达显著高于对照组(p0.05)。随着浓度的增加,表达量增加。说明红花多糖能显著上调Caspase-3蛋白。本研究初步得出结论:红花多糖能显著抑制HT29结肠癌细胞,其诱导HT29细胞凋亡的机制可能与阻滞细胞G2/M期,S期,及上调Caspase-3蛋白的表达有关。     

羽扇豆醇通过抑制RhoA-ROCK1信号通路抑制结肠癌细胞增殖

该文探讨了羽扇豆醇(Lupeol)对人结肠癌HCT116和SW620细胞增殖的影响及相关作用机制。使用不同浓度的Lupeol处理HCT116和SW620细胞后,用MTT法检测细胞活性,CCK8法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blot检测相应mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光检测β-Catenin蛋白细胞内分布情况。通过构建shRNA敲低两种结肠癌细胞中RhoA,进一步研究Lupeol影响细胞增殖的分子机制。结果显示,Lupeol处理后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显下降,克隆形成能力受到抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞内RhoA、ROCK1、β-Catenin、Cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平均显著下降,β-Catenin蛋白胞质和胞膜上分布减少。敲低RhoA后抑制了细胞增殖,同时使得RhoA-ROCK1-β-Catenin信号通路蛋白受到抑制,β-Catenin蛋白胞质和胞膜上分布减少。综上所述,Lupeol可通过抑制RhoA-ROCK1信号通路,抑制β-Catenin蛋白表达,进而抑制HCT116和SW620细胞增殖,Lupeol有望成为临床结肠癌治疗的新药物。     

转TK基因的人结肠癌细胞对多种原药敏感性的研究

构建了含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK）的重组逆转录病毒载体LTKSN．经PA317细胞包装后,感染人结肠癌细胞株LoVo．用G418筛选到稳定表达HSV-TK基因的细胞克隆LoVo／LTKSN．LoVo／LTKSN与野生型LoVo细胞相比,生长曲线无明显差异,细胞形态亦无改变．细胞毒试验证明LoVo／LTKSN对GCV的敏感性很高,半杀伤浓度IC50为0.5μmol/L,比野生型细胞提高了4000倍以上．三种不同的原药GCV,ACV和BVDU对LoLo／LTKSN具有效果不等的杀伤作用．BVDU和GCV联合作用效果更好．旁杀伤效果十分明显,低浓度GCV就可以将合10%LoVo／LTKSN的混合细胞中的大部分肿瘤细胞杀死．     

活性氧所致超氧化物歧化酶肽链断裂的观察

探究活性氧所致铜锌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）肽链断裂的情况。将过氧化氢或抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）分别作用于马来酰亚胺标记的ＳＯＤ,然后用高效液相反相色谱（ＲＰＨＰＬＣ）分析,经１ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ用ＲＰ－ＨＰＬＣ分离出二个肽段,用顺磁共振检测显示只有一个肽段具有马来酰亚胺信号,经５ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２处理后ＳＯＤ有四个肽段生成,其中有一个肽段具有马来酰亚胺信号,用５ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸和０．０１ｍｍｏｌ／ＬＦｅＣｌ３处理后ＳＯＤ有三个肽段生成,用５０ｍｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸及１．０ｍｍｏｌ／ＬＦｅＣｌ３处理后ＳＯＤ也产生相同的三个肽段,只是肽段的量多．结果提示Ｈ２Ｏ２所致ＳＯＤ肽链断裂无“定点”现象,而抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）所致ＳＯＤ肽链断裂呈“定点”断裂。     

植物中活性氧的检测方法

主要对超氧阴离子自由基(O2-·)、过氧化氢(H2O2)等活性氧的检测方法,包括化学发光法、分光光度法、荧光染色法,EPR波谱学方法、DAB组织染色法和电子显微技术检测法等进行了综述,并简单介绍了最近发展起来的一些新技术。     

腺病毒介导转化生长因子β1 诱导结肠癌细胞凋亡的研究

目的:探讨腺病毒介导的转化生长因子β-1(TGF-β1)对结肠癌细胞凋亡的诱导作用。方法:结肠癌细胞系HCT116细胞培养后分实验组及对照组,实验组以腺病毒为载体将TGF-β1转染,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)以及免疫组织化学检测其m RNA及蛋白的表达,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。结果:实验组的TGF-β1 mRNA以及蛋白的表达明显增强;实验组细胞的吸光度波动较小,在低值区相对稳定,各时相点无明显变化,24 h的细胞增殖抑制率为50%,其后在70%-80%之间;对照组细胞吸光度显著升高,与实验组各时相点比较,差异有统计学意义(P0.01)。实验组24 h、36 h、48 h、60 h、72 h的凋亡率分别为(7.55±0.03)%、(8.53±0.11)%、(13.47±0.23)%、(15.51±0.26)%、(16.59±0.26)%,与对照组细胞各时相点比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:TGF-β1能够显著地抑制HCT 116细胞的增值及诱导其凋亡。     

Antioxidant Combination Inhibits Reactive Oxygen Species Mediated Damage

We examined the preventive activity of naturally occurring antioxidants against three reactive oxygen species using a protein degradation assay. The hydroxyl, hypochlorite, and peroxynitrite radicals are typical reactive oxygen species generated in human body. Previously, we found that hydrophobic botanical antioxidants exhibited specific antioxidant activity against hydroxyl radicals, whereas anserine and carnosine mixture, purified from chicken extract and vitamin C, exhibited antioxidant activities against hypochlorite and peroxynitrite radicals respectively. Since ethanol, used as a solvent in the experiments, also showed an antioxidant action against the hydroxyl radical, we re-assessed antioxidant activities using aqueous solutions of botanical antioxidants. Among the seven hydrophobic antioxidants examined, ferulic acid exhibited the strongest antioxidant activity against the hydroxyl radical. An antioxidant preparation of anserine-carnosine mixture, vitamin C, and ferulic acid prevented oxidative stress by reactive oxygen species. Loss of deformability in human erythrocytes and protein degradation caused by reactive oxygen species were completely inhibited.     

2,3,7,8-Tetrachlorobenzo- p -dioxin Inhibits Proliferation of SK-N-SH Human Neuronal Cells Through Decreased Production of Reactive Oxygen Species

Oxidative stress has been known to be involved in the mechanism of toxic effects of various agents on many cellular systems. In this study we investigated the role of reactive oxygen species (ROS) in 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo- p -dioxin (TCDD)-induced neuronal cell toxicity using SK-N-SH human neuroblastoma cells. TCDD inhibited proliferation of the cells in a dose-dependent manner, which was revealed by MTT staining, counting of cells stained with trypan blue and [ 3 H]thymidine uptake assay. TCDD also suppressed the basal generation of ROS in a time- and concentration-dependent manner assessed by 2',7'-dichlorofluorescein fluorescence. In addition, TCDD induced a dose-dependent inhibition of lipid peroxidation, a biomarker of oxidative stress, whereas it significantly increased the level of glutathione (GSH), an intracellular free radical scavenger in the cells. Moreover, TCDD altered the activities of major antioxidant enzymes; increase in superoxide dismutase (SOD) and catalase, but decrease in glutathione peroxidase (GSH-Px) and glutathione reductase (GSH-Red). Pretreatment with l -buthionine- S , R -sulfoximine (BSO, 50 &#119 M), an inhibitor of GSH synthesis, significantly prevented the TCDD-induced reduction in lipid peroxidation and cell proliferation. Interestingly, exogenous application of an oxidant, H 2 O 2 (50 &#119 M) markedly restored the inhibited cell proliferation induced by TCDD. Taken together, these results suggest that alteration of cellular redox balance may mediate the TCDD-induced inhibition of proliferation in human neuronal cells.     

活性氧在创伤愈合中作用的研究

：创伤愈合是一个复杂的生物学过程,包括出血与凝血、炎症渗出、血管和肉芽组织的形成、再上皮化、纤维化和瘢痕改建等,在这一系列的生物学活动过程中都需要能量支持;高等动物使用氧气作为终端氧化剂,通过对碳水化合物的氧化作用为愈合过程中的各种生命活动提供能量,但该过程却可以产生大量的活性氧,这些活性氧在创伤愈合的过程中扮演着重要的角色,在低浓度情况下可以促进伤口的愈合,而在高浓度时会抑制伤口愈合,而活性量浓度的过高过低都会影响创口的正常愈合过程。