不同葡萄糖水平对C2C12细胞线粒体能量代谢相关基因表达影响的研究

本实验目的是通过细胞实验检测葡萄糖水平对线粒体能量代谢相关基因(PGC-1α,ERRα,NRF-1,TFAM和线粒体基因)表达的影响,为研究相关调控基因在2型糖尿病中所起到的作用打下基础。细胞实验通过用两种不同葡萄糖水平的培养基对C2C12细胞进行培养,QRT-PCR检测线粒体能量代谢关键调控基因表达水平。结果显示,细胞培养过程中PGC-1α、ERRα、NRF-1、TFAM和线粒体基因(12S r RNA和COX2)表达变化趋势基本一致,60 h高糖组的基因相对表达量高于低糖组。在C2C12肌细胞中,适度的葡萄糖能诱导PGC-1α及其下游基因ERRα、NRF-1、TFAM的表达水平上升,增加mt DNA数量,促进肌细胞能量代谢,提高对糖的利用能力。     

单唾液酸神经节苷脂对体外循环大鼠海马神经元的影响

目的:探讨单唾液酸神经节苷脂(GM1)对体外循环大鼠海马神经元凋亡的影响及机制。方法:18只健康成年雄性SD大鼠,随机分为3组:正常对照组、CPB组和GM1组。经右颈静脉插管引流,右颈动脉插管灌注建立CPB,转流时间60 min,建立CPB动物模型。CPB后3 h时处死大鼠,4%多聚甲醛灌注固定后取左侧大脑组织,利用TUNEL法观察海马神经元凋亡,免疫组化法检测海马神经元Caspase-3蛋白表达,并用电子显微镜观察神经元超微结构变化。结果:与正常组比较,GM1组和CPB组海马神经元凋亡细胞平均积分光密度(IA)、Caspase-3蛋白表达均增强(P<0.01)。GM1组海马神经元凋亡细胞平均积分光密度(IA)为8.94±0.42,与CPB组(14.87±0.70)相比明显降低(P<0.01);GM1组海马Caspase-3阳性神经细胞平均积分光密度比CPB组降低了38.84%(P<0.01)。电镜下CPB组海马可见异染色质明显边集、凝聚,线粒体嵴减少或空泡变性,细胞器消失等不可逆性的损伤改变;GM1组神经元细胞核圆形,线粒体嵴少量减少,细胞器仍可见。结论:单唾液酸神经节苷脂对体外循环大鼠海马神经元凋亡具有明显的抑制作用,其机制与抑制Caspase-3的表达有关。     

广西巴马小型猪2型糖尿病模型骨骼肌糖代谢及能量代谢相关基因的表达差异

目的探讨糖代谢及能量代谢过程中的关键调控基因(PGC-1α、Glut-4、ERRα、NRF-1、TFAM和线粒体基因)在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)发生中的作用。方法以广西巴马小型猪T2DM模型建立的发病组和未发病组的背最长肌为实验材料,利用QRT-PCR实时荧光定量的方法对糖代谢及能量代谢相关基因mRNA和线粒体基因的表达情况进行检测。结果在广西巴马小型猪背最长肌中,T2DM组PGC-1α、Glut-4、ERRα和NRF-1的相对表达量均显著高于非T2DM组,TFAM和线粒体基因的相对表达量则稍低于非T2DM组。结论在T2DM巴马小型猪骨骼肌中,上调PGC-1α及其下游基因Glut-4、ERRα和NRF-1的表达水平,有利于改善葡萄糖代谢;而线粒体合成不足,致使ATP合成量不够,或引起胰岛素抵抗,进而导致2型糖尿病的发生。     

桃叶珊瑚苷对光损伤HaCaT细胞Bax, Bcl-2, Caspase-3表达的影响

目的:探讨桃叶珊瑚苷对紫外线B诱导的HaCaT细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响,进一步阐明桃叶珊瑚苷抗光老化的作用机制。方法:将指数生长期HaCaT细胞随机分为正常对照组、模型对照组、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5) mol·L~(-1) AU处理组,采用64 m J·cm~(-2)的UVB照射建立细胞光损伤模型,以终浓度10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol·L~(-1)AU处理光损伤细胞,试剂盒检测ROS含量、Caspase-3活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达量。结果:UV照射的HaCaT细胞ROS含量、细胞凋亡率、Caspase-3活性、Bcl-2、Bax蛋白表达量均升高(P0.01),Bcl-2/Bax值降低(P0.01);不同浓度桃叶珊瑚苷处理后,ROS含量、Caspase-3活性、Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量、Bcl-2/Bax值升高,10~(-6)、10~(-5) mol·L~(-1)桃叶珊瑚苷组与模型对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05,0.01)。结论:桃叶珊瑚苷通过清除ROS,下调Bax、Caspase-3表达,上调Bcl-2表达,抑制细胞凋亡,保护受损的HaCaT细胞,拮抗光老化。     

桃叶珊瑚苷在初级糖尿病脑病中的神经保护作用

在初级糖尿病脑病中海马神经元细胞的凋亡与认知能力相关．在本研究中,研究桃叶珊瑚苷在初级糖尿病脑病大鼠中的神经保护机制．实验大鼠被随机分为3组：空白对照组、STZ诱导糖尿病组及STZ诱导糖尿病桃叶珊瑚苷治疗组．除空白对照组以外,所有大鼠接受60mg／kg链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病．桃叶珊瑚苷治疗组的大鼠在第65天开始连续腹腔注射5mg／kg的桃叶珊瑚苷,共注射15天,利用Y迷宫检测动物行为学变化．在第87天进行脑组织的组织学检测,用光学显微镜进行海马CA1区存活神经元细胞计数,应用透射电子显微镜对CA1区神经元细胞的超微结构观察和凋亡细胞数量计数．为了弄清桃叶珊瑚苷的神经保护机制,应用Western Blot和免疫组化方法对Bcl-2和Bax两种凋亡蛋白的表达进行了分析．结果显示,桃叶珊瑚苷抑制了海马CA1区神经元细胞凋亡,并起到降低血糖浓度、增加体重、改善糖尿病大鼠的学习状况,最终使Bcl-2和Bax两种凋亡蛋白的表达比例得到了平衡．结果暗示桃叶珊瑚苷抑制神经元细胞的凋亡可能是通过调控Bcl-2和Bax两种凋亡蛋白的表达来完成．     

菟丝子总黄酮对内分泌衰退痴呆模型小鼠学习记忆功能的影响及保护作用机制

目的:研究菟丝子总黄酮对内分泌衰退痴呆模型小鼠学习记忆功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将50只昆明种雌性小鼠随机分为模型组,雌激素对照组(0.3 mg·kg-1),菟丝子总黄酮低剂量组(35mg·kg-1),菟丝子总黄酮中剂量组(70 mg·kg-1)和菟丝子总黄酮高剂量组(140 mg·kg-1),采用背部去卵巢法切除双侧卵巢,另取10只小鼠作为假手术对照组,建立内分泌衰退小鼠模型,术后各治疗组进行灌胃给药治疗三个月,假手术组和模型组均给予0.9%生理盐水。给药结束后采用Morris水迷宫观察小鼠行为学变化;放射免疫法检测小鼠血液中雌激素的水平;HE染色光镜观察海马神经元病理形态;流式细胞仪检测小鼠海马神经细胞凋亡率和免疫印迹法检测海马区神经细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Csapase-3)及Cyt-c蛋白的表达水平。结果:与假手术组相比,模型组小鼠学习记忆能力明显下降(P0.01);血液中雌激素水平显著降低(P0.01);海马神经细胞凋亡率显著增加(P0.01);Cyt-c、Caspase-3、Bax蛋白表达水平大大增加(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低明显(P0.01)。与模型组相比,TFSC各治疗组小鼠学习记忆能力显著增强(P0.05,P0.01,P0.01);血液中雌激素水平上升显著(P0.05,P0.01,P0.01);小鼠海马区神经细胞凋亡率明显下降(P0.05,P0.01,P0.01);同时Cyt-c、Caspase-3、Bax蛋白表达水平均大大降低,Bcl-2蛋白表达均明显增加(P0.05,P0.05,P0.01)。结论:TFSC可上调脑细胞中Bcl-2蛋白的表达水平,抑制Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白的表达量,进而增强神经元的可塑性和营养性,以防止神经细胞从内源性线粒体途径丢失或凋亡,进一步改善内分泌衰退型痴呆小鼠的学习记忆能力。TFSC可能是通过促进或增强下丘脑-脑垂体-性腺轴功能,从而达到增加雌激素水平和改善内分泌系统功能的目的。     

Smac调控Caspase-3对耐药肺腺癌细胞株生物活性及相关信号的研究

摘要 目的：探讨Smac基因调控Caspase-3表达对紫杉醇耐药肺腺癌细胞株生物活性及经典凋亡信号通路的作用机制。方法：取构建好的耐药A549细胞,将其分为A549细胞（LC）组、A549细胞+Smac-NC（SN）组、A549细胞+Smac抑制剂（SI）组、A549细胞+Smac激动剂（SM）组、A549细胞+Caspase-3-NC（CN）组、A549细胞+Caspase-3抑制剂（CI）组、A549细胞+Caspase-3激动剂（CM）组、A549细胞+Smac激动剂+Caspase-3激动剂（MM）组;Real-time PCR法检测正常肺上皮细胞及4种肺腺癌细胞系中Smac、Caspase-3表达水平,将阴性对照、Smac、Caspase-3类似物转染至紫杉醇耐药肺腺癌细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹法检测经典凋亡信号通路表达,并分析Smac与Caspase-3的相关性。结果：肺腺癌细胞系中的Smac、Caspase-3 mRNA表达量显著低于正常肺上皮细胞系BEAS-2B（P＜0.05）,其中A549的Smac、Caspase-3 mRNA值最小（P＜0.05）,因此选取其作为此次实验细胞;LC组与SN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与SN组相比,SI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与SI组相比,SM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;LC组与CN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CN组相比,CI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与CI组相比,CM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;SM组与CM组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CM组相比,MM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;Smac与Caspase-3呈现正相关（r=0.470,P=0.002）,组间具有显著差异。结论：Smac基因可显著改善紫杉醇耐药肺腺癌细胞株细胞生物活性,并激活经典凋亡信号通路,其作用机制可能与调控Caspase-3表达有关。     

高原低氧条件下不同时间大鼠海马CA1区神经细胞粘附分子的表达

目的:观察高海拔低氧条件下不同时间大鼠海马CA1区神经细胞粘附分子的表达变化,探讨NCAM在机体对低氧应激反应中的作用。方法:将平原SD大鼠运至海拔(4100m)地区,在第2、5、9、15天取大鼠海马,常规免疫组化及RT-PCR检测高原环境下NCAM的表达变化。结果:NCAM在高海拔大鼠海马CA1区神经细胞NCAM的表达在第2、5、9天是明显低于正常(P0.05),在第15天达到正常(P0.05)。结论:高原低氧应激反应后NCAM基因表达先降低后升高,提示其在神经损伤修复过程中可能起重要作用。     

黄芩苷对巨细胞病毒神经系统感染小鼠学习记忆功能及海马中细胞凋亡的调节作用

新生儿感染巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)能够引起中枢神经系统不可逆损害,遗留神经功能缺损,危害较大,但缺乏有效的防治手段。黄芩苷是中药材黄芩中的黄酮类活性物质,具有抗凋亡、抗氧化、抗炎等功能,对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤具有保护作用。基于此,本研究将黄芩苷用于小鼠巨细胞病毒(Mouse cytomegalovirus,MCMV)感染新生KM小鼠的干预,并探究黄芩苷对MCMV感染后中枢神经损害的保护作用。为研究黄芩苷对MCMV神经系统感染小鼠学习记忆功能及海马中细胞凋亡的调节作用,本研究将新生KM小鼠随机分为对照组、MCMV组、黄芩苷组、黄芩苷+U0126组,后三组腹腔注射MCMV病毒悬液以获得MCMV神经系统感染模型,MCMV组给予生理盐水灌胃,黄芩苷组给予黄芩苷灌胃,黄芩苷+U0126组则给予黄芩苷灌胃及U0126腹腔注射。比较四组学习记忆功能指标及海马组织中MCMV载量、细胞凋亡率、凋亡基因表达量、信号通路基因表达量。结果显示:与对照组比较,MCMV组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.05),穿平台次数明显减少(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量、细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显增加(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、p-ERK1/2的表达量明显降低(P0.05);与MCMV组小鼠比较,黄芩苷组小鼠的逃避潜伏期明显缩短(P0.05),穿平台次数明显增多(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量无明显变化(P0.05),海马组织的细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显降低(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、pERK1/2的表达量明显增加(P0.05);与黄芩苷组比较,黄芩苷+U0126组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.05),穿平台次数明显减少(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量无明显变化(P0.05),海马组织的细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显增加(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、p-ERK1/2的表达量明显降低(P0.05)。综上,黄芩苷能够改善MCMV神经系统感染小鼠的学习记忆功能,通过激活MEK1/ERK1/2途径抑制海马中细胞凋亡是其可能的分子机制。     

重楼皂苷VII对SW-480 细胞凋亡和周期的影响及机制研究

目的：探讨重楼皂苷VII (Paris saponin VII, PSVII) 对人结肠癌SW480 细胞凋亡和周期的影响及其机制。方法：采用Cell Counting Kit-8（CCk-8）试剂盒方法观察PSVII 对SW-480 细胞增殖的影响;流失细胞术研究PSVII对SW480细胞凋亡和周期的 作用;培养SW-480 细胞并给予1.0 umol/L、2.0 umol/L 和4.0 umol/L PSVII 24 h后,采用Western blot 法检测凋亡相关蛋白 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2 及周期相关蛋白Cdk-4、Cdk-6、CyclinD1 和p21 的表达变化。结果：PSVII可明显抑 制SW-480 细胞增殖,并诱导其凋亡,其IC50值为5.25± 0.46 umol/L;PSVII 可促进SW-480 细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、 Bax及p21 的表达,降低Bcl-2、Cdk-4、Cdk-6和CyclinD1 的表达。结论：PSVII可以通过线粒体和死亡受体途径诱导SW-480 细胞 凋亡;将SW-480 细胞周期阻滞于G1 期是通过上调p21,抑制Cdk-4、Cdk-6 与Cyclin D1 周期调控蛋白的表达。     

松果菊苷对多柔比星心脏毒性保护作用及机制研究

目的:观察松果菊苷(ECH)能否减轻多柔比星(DOX)心脏毒性并初步阐明其作用机制。方法:通过单次腹腔注射大剂量多柔比星(15 mg/kg)建立急性心脏毒性小鼠模型,DOX处理后每日通过腹腔注射ECH(50 mg/kg/day)。实验分组如下:正常组(Control组);单纯松果菊苷处理组(ECH组);多柔比星处理组(DOX组);多柔比星+松果菊苷处理组(DOX+ECH组)。给药5天后检测左心室功能、心肌组织病理改变、氧化应激和心肌凋亡情况。结果:与Control组相比,DOX组小鼠心脏收缩和舒张功能明显减弱,心肌细胞出现空泡变性,心肌MDA含量、凋亡率以及促凋亡蛋白Bax和cleaved Caspase-3表达明显增加,而抑制凋亡蛋白Bcl-2表达量、SOD与GSH-Px活性明显下降。与DOX组相比,松果菊苷能明显改善心脏功能,缓解心肌空泡变性,降低MDA含量、凋亡率以及Bax和cleaved Caspase-3表达量,而提高Bcl-2表达量、SOD与GSH-Px活性(均P 0.05)。结论:松果菊苷可以通过抑制心肌组织氧化应激损伤和凋亡缓解多柔比星诱导的急性心脏毒性。     

红托竹荪多糖诱导肿瘤细胞凋亡的作用初探

探讨红托竹荪多糖对小鼠腹水瘤S180细胞凋亡的作用。分别使用不同浓度的红托竹荪多糖处理S180细胞24h,Western blot法检测Bcl-xl、Bax、caspase-9和Caspase-3等蛋白表达,使用流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot 法检测结果显示Bcl-xl表达量随竹荪多糖剂量增加而降低,Bax表达量则相反,每组Bax/Bcl-xl的比值增加,Caspase-9、Caspase-3表达量增加;流式细胞仪检测结果显示：0、25、50和100mg/L组细胞凋亡率分别为5.12%±0.11%、9.61%±0.61%、16.39%±0.19%和17.05%±0.13%,与对照组相比细胞凋亡率增高,差异具有统计学意义（P<0.05）,推断红托竹荪多糖具有诱导S180细胞凋亡的功能。     

PGC-1α基因在HIV-1包膜糖蛋白gp120诱导神经元线粒体功能障碍中的作用及机制研究

人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency viru,HIV)包膜糖蛋白gp120具有神经毒性,可引起神经元损伤,与HIV相关性痴呆的发生有关,但gp120引起神经元损伤的机制尚不清楚.有研究报道gp120能够引起神经元出现线粒体功能障碍,而PGC-1α是促进神经元内线粒体生成的关键基因.因此,本研究将分析PGC-1α基因在HIV-1包膜糖蛋白gp120诱导神经元线粒体功能障碍中的作用及机制.原代培养皮层神经元细胞后分为对照组、gp120组、空白质粒组、gp120+空白质粒组,gp120+PGC-1α质粒组、PGC-1α质粒组,检测细胞活力OD490nm线粒体膜电位(△ψm)水平、三磷酸腺苷(ATP)含量、活性氧簇(ROS)含量、凋亡率及PGC-1α、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达水平.结果 显示,gp120组皮层神经元的PGC-1α表达水平、OD490nm水平、△ψm水平、ATP含量均低于对照组,ROS含量、凋亡率、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达水平均高于对照组;过表达PGC-1α后,gp120+PGC-1α质粒组皮层神经元的PGC-1α表达水平、OD490nm水平、△ψm水平、ATP含量均高于gp120+空白质粒组,ROS含量、凋亡率、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达水平均低于gp120+空白质粒组.以上结果表明,gp120诱导皮层神经元出现线粒体氧化呼吸功能减退、线粒体途径凋亡等线粒体功能障碍的表现,抑制PGC-1α基因表达是gp120诱导线粒体功能障碍的相关机制之一.本研究的创新点在于探究了gp120诱导神经元线粒体功能障碍的分子机制,研究发现抑制PGC-1α基因表达是gp120诱导神经元线粒体功能障碍的相关机制之一,这为今后阐明gp120诱导神经元损伤及HIV相关性痴呆的发病机制提供了实验依据.     

龙牙百合多糖对人肝癌细胞HepG2凋亡的影响

为研究龙牙百合多糖(LP)对人肝癌HepG2细胞抑制和凋亡的影响,采用MTT法考察了3组LP不同浓度对人肝癌HepG2细胞抑制作用,采用Annexin-V/PI双染法和Western blotting法探究了LP1和LP42个组分对人肝癌HepG2细胞凋亡作用机制。LP对人肝癌HepG2细胞抑制呈剂量依赖关系,LP4组1 mg/mL对HepG2细胞的抑制率达46.36%,效果最佳;LP1组8 mg/mL最高抑制率达43.23%;LP2组4 mg/mL最高抑制率达24.35%;LP1和LP4对HepG2细胞的晚期凋亡率显著高于早期。激活Caspase-3、Bax、蛋白表达显著升高(p0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(p0.05)。研究表明,LP通过激活死亡受体凋亡途径和线粒体途径,诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

miR-34a在幼鼠海马神经元细胞增殖和凋亡中的作用

目的:探讨miR-34a在幼鼠海马神经元细胞增殖凋亡中的作用。方法:分离幼鼠海马神经元细胞,转染miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(inhibitor control)、miR-34a模拟物(miR-34a mimics)、模拟物对照(mimics control),RT-PCR检测细胞中miR-34a表达水平。MTT检测转染后细胞增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞中Cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平。结果:转染miR-34a inhibitor可以抑制miR-34a的表达,miR-34a mimics可以促进miR-34a的表达。miR-34a mimics对细胞增殖抑制率明显高于mimics control组(P0.05),miR-34a inhibitor组抑制率明显低于inhibitor control组(P0.05)。miR-34a inhibitor组神经元细胞凋亡率明显低于inhibitor control组(P0.05),miR-34a mimics组神经元细胞凋亡率明显高于mimics control组(P0.01),inhibitor control组和mimics control组神经元细胞凋亡率差异不显著(P0.05)。miR-34a inhibitor组Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量低于inhibitor control组,差异显著(P0.05);miR-34a inhibitor组Bcl-2蛋白表达量高于inhibitor control组,差异显著(P0.05);miR-34a mimics组Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量高于mimics control,差异显著(P0.05);miR-34a mimics组Bcl-2蛋白表达量低于mimics control,差异显著(P0.05)。结论:miR-34a抑制海马神经元细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与调控Cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax表达有关。     

miR-486-3p对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的调控作用研究

为探讨miR-486-3p对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的调控作用,采用qRT-PCR法和Western blot法测定24例乳腺癌组织和癌旁正常组织miR-486-3p和凋亡相关蛋白的表达水平;采用qRT-PCR法测定乳腺癌细胞MCF-7、HBL101和正常乳腺细胞MCF10A中miR-486-3p的表达水平。将MCF-7、HBL101和MCF10A细胞分为正常对照组、模拟物对照组、miR-486-3p模拟物组、抑制物对照组和miR-486-3p抑制物组,各组细胞转染后进行培养,采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况,采用细胞划痕法测定MCF-7和MCF10A细胞的迁移情况,采用Transwell法和流式细胞术测定各组细胞侵袭和凋亡情况,采用qRT-PCR和Western blot法测定凋亡相关蛋白mRNA和蛋白的表达水平。该研究得出乳腺癌组织中miR-486-3p表达水平较癌旁正常组织显著降低(P0.05),乳腺癌组织中Bcl-2蛋白表达水平较癌旁正常组织显著增加(P0.05),而Bax和Caspase-3蛋白表达水平较癌旁正常组织显著降低(P0.05)。乳腺癌细胞MCF-7和HBL101中miR-486-3p表达水平较正常乳腺细胞MCF10A显著降低(P0.05),其中以乳腺癌细胞MCF-7中miR-486-3p表达水平最低。miR-486-3p模拟物组乳腺癌细胞MCF-7和HBL101中miR-486-3p的表达水平较模拟物对照组显著升高(P0.05),miR-486-3p抑制物组miR-486-3p的表达水平较抑制物对照组显著降低(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7和HBL101细胞在24 h、48 h和72 h时的吸光度值较模拟物对照组显著降低(P0.05),而miR-486-3p抑制物组在24 h、48 h和72 h时吸光度值较抑制物对照组显著升高(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞划痕宽度显著宽于模拟物对照组(P0.05),而miR-486-3p抑制物组乳腺癌MCF-7细胞划痕宽度显著窄于抑制物对照组(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞穿膜细胞数量较模拟剂对照组显著降低(P0.05),而miR-486-3p抑制物组穿膜细胞数量较抑制物对照组显著升高(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞凋亡数量较模拟物对照组显著升高(P0.05),而miR-486-3p抑制物组细胞凋亡数量较抑制物对照组显著降低(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较模拟物对照组显著降低(P0.05),Bax和Caspase-3表达水平显著升高(P0.05),miR-486-3p抑制物组Bcl-2表达水平较抑制物对照组显著升高(P0.05),Bax和Caspase-3表达水平显著降低(P0.05)。总之,miR-486-3p是乳腺癌的抑癌基因,可能通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白的表达,而对乳腺癌细胞的凋亡起促进作用。     

重楼皂苷Ⅶ对SW-480细胞凋亡和周期的影响及机制研究

目的:探讨重楼皂苷Ⅶ(Paris saponin Ⅶ,PSⅦ)对人结肠癌SW480细胞凋亡和周期的影响及其机制。方法:采用Cell Counting Kit-8(CCk-8)试剂盒方法观察PSⅦ对SW-480细胞增殖的影响;流失细胞术研究PSⅦ对SW480细胞凋亡和周期的作用;培养SW-480细胞并给予1.0μmol/L、2.0μmol/L和4.0μmol/L PSⅦ 24 h后,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2及周期相关蛋白Cdk-4、Cdk-6、Cyclin D1和p21的表达变化。结果:PSⅦ可明显抑制SW-480细胞增殖,并诱导其凋亡,其IC50值为5.25±0.46μmol/L;PSⅦ可促进SW-480细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax及p21的表达,降低Bcl-2、Cdk-4、Cdk-6和Cyclin D1的表达。结论:PSⅦ可以通过线粒体和死亡受体途径诱导SW-480细胞凋亡;将SW-480细胞周期阻滞于G1期是通过上调p21,抑制Cdk-4、Cdk-6与Cyclin D1周期调控蛋白的表达。     

精胺通过抑制内质网应激减缓柯萨奇B3 病毒诱导的心肌细胞损伤

目的:探讨外源精胺在柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3,CVB3)诱导的乳鼠心肌细胞损伤中的保护作用及其调控机制。方法:CVB3感染原代培养的乳鼠心肌细胞,将细胞随机分为3组:对照(control)组;病毒感染(CVB3)组;精胺干预(CVB3+Sp)组。MTT试剂检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、GRP78、CHOP、Caspase-12、p-PERK、PERK、p-eIF2α和e IF2α的蛋白表达。结果:与control组相比,CVB3组的细胞增殖率显著降低(P0.05);凋亡率显著增加(P0.05);Bcl-2的表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达增加(P0.05);GRP78、CHOP和Caspase-12的表达显著上调(P0.05);p-PERK和p-eIF2α的表达显著上调(P0.05)。与CVB3组相比,CVB3+Sp组的细胞增殖率显著上升(P0.05);凋亡率显著下降(P0.05);Bcl-2的表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达下调(P0.05);GRP78、CHOP和Caspase-12的表达显著下调(P0.05);p-PERK和p-eIF2α的表达显著下调(P0.05)。结论:外源精胺可以缓解CVB3诱导的乳鼠心肌细胞增殖降低和细胞凋亡增多等损伤,这可能与精胺抑制PERK-eIF2α信号通路介导的内质网应激有关。     

红景天苷对力竭大鼠心肌细胞凋亡通路的影响*

目的:探讨红景天苷(Sal)能否通过改善心肌缺血,调控心肌细胞死亡受体和线粒体介导的凋亡途径相关蛋白,减少心肌细胞凋亡,发挥对力竭心脏的保护作用。方法:雄性SD大鼠,随机分为4组(n=6):对照组(Con)、力竭组(EE)、低剂量和高剂量Sal预处理力竭组(SLE、SHE)。分别给予Sal 15、30 mg/(kg·d)或生理盐水(3 ml/(kg·d))腹腔注射15 d。Con组不进行游泳训练,EE组、SLE组、SHE组于腹腔给药结束后次日参照Thomas力竭标准,一次性游泳运动至力竭。力竭运动结束后即刻麻醉取血和心脏,观测心肌缺血缺氧面积和心肌细胞凋亡指数(AI),测定血清中缺血修饰清蛋白(IMA)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、脑钠肽(BNP)和心肌细胞Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的含量及心肌TNF受体超家族成员6 (Fas)、细胞色素C(Cyto-C)、天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8)、天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)的表达情况。结果:与Con组比较,EE组大鼠心肌缺血缺氧面积、血清IMA、cTnI、BNP含量、AI和Bax水平、心脏Fas、Cyto-C、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达均显著增加(P＜0.01),心肌Bcl-2表达水平明显降低(P＜0.01);与EE组比较,Sal显著改善力竭大鼠心肌缺血缺氧面积、明显降低力竭大鼠血清IMA、cTnI、BNP含量和AI、Bax水平及心肌Fas、Cyto-C、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的蛋白表达(P＜0.01),明显提高心肌Bcl-2表达水平(P＜0.01)。结论:红景天苷可通过改善心肌缺血,以及抑制死亡受体和线粒体凋亡通路相关蛋白Fas、Cyto-C、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达,减少心肌细胞凋亡,从而发挥对力竭心脏的保护作用。     

食物水限制对子午沙鼠海马组织HIF-1α相关活性物质表达的影响

目的探讨食物水限制对子午沙鼠Meriones meridianus海马组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)等相关活性物质表达的影响,阐明食物水缺乏对子午沙鼠海马组织的影响及相关机制。方法子午沙鼠随机分为食物水限制0 d、3 d、6 d、9 d组,每组6只。运用免疫组织化学方法检测海马组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Bax、Bcl-2的表达。结果食物水限制可引起海马组织HIF-1α、Bax表达增加(P0.05),Bcl-2生成减少(P0.05)。HIF-1α阳性细胞比率从0 d的低于10%增加到3 d的80%以上。食物水限制期间海马CA3区HIF-1α在食物水限制3 d组可见显著应答效应,而CA1反应晚于CA3区。HIF-1α与Bax的表达呈正相关,与Bcl-2的表达呈负相关。HIF-1α可能部分参与食物水限制期间海马Bax与Bcl-2表达的调节。