基因工程菌里氏木霉染色体DNA的提取方法

研究基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma Teesei)染包体DNA的提取方法。采用冷冻研磨CTAB法、氯化苄SDS法和冷冻研磨SDS法三种提取DNA的力法。通过琼脂糖凝胶电泳埘提取的DNA进行检测。结果表明：冷冻研磨CTAB法更适合此类DNA的提取。对冷冻研磨CTAB法提取条件进行了优化。用该法提取的DNA上的外源基因t—PAcDNA部分片段进行PCR扩增,获得良好结果。用本实验冷冻研磨CTAB法提取的DNA完全适用于PCR和其它的分子生物学操作的要求。     

松科植物基因组总DNA提取方法的比较

目的:研究对比了用不同方法提取红松、樟子松和红皮云杉等3种松科植物叶片基因组DNA的效果,以寻找适合提取松科植物叶片基因组DNA的方法。方法:分别比较了用传统的CTAB法、SDS法以及3种改良的CTAB法提取的上述3种松科植物叶片基因组DNA的电泳、纯度和酶切效果。结果:采用不同方法提取的3种松科植物叶片基因组DNA的质量差异较大。结论:常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量松科植物基因组DNA,而改良后的CTAB法的提取效果较好。     

响应面法优化胆木基因组DNA的提取方法

为了得到较高质量的胆木基因组DNA,并将该方法应用于其他茜草科植物。本研究采用DX8Trial软件分别对PVP、β-巯基乙醇、Na Cl、CTAB、EDTA等胆木DNA提取因素进行设计,同时加入醋酸钠进行单因素试验,确定胆木基因组DNA的最佳提取方案,并将该方案应用到6种茜草科植物进行基因组DNA提取。结果得出最优提取方案为5%PVP、3.25%β-巯基乙醇、4.24%NaCl、2%CTAB、3%EDTA,提取过程中加入75%乙醇720μL以及醋酸钠90μL,该方案同时也适用于6种茜草科植物基因组DNA提取。响应面法的应用为胆木植物DNA提取提供了依据,为其分子生药学研究提供依据。     

梨不同DNA提取方法的效果研究

以7个梨品种为实验材料,比较分析了SDS法、CTAB法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、高盐低pH值法、分步离心法对梨总DNA提取的效果。结果表明:利用以上6种方法提取的梨总DNA在纯度和量上有很大的差别。所得到的平均DNA量从大到小依次为:分步离心法、SDS法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、CTAB法、高盐低pH值法。DNA提取纯度依次为分步离心法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、高盐低pH值法、CTAB法、SDS法。RAPD和自交不亲和基因(S基因)特异性引物扩增实验结果都比较理想,但分步离心法和SDSCTAB法提取的DNA双酶切效果较好。分步离心法提取的梨总DNA更适用于后续的分子生物学实验操作。     

磁珠法快速提取基因组DNA的实验研究

针对临床标本基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,提取步骤繁琐,需要进行离心操作,并且提取过程中会用到苯酚、氯仿等有机试剂,会对操作人员有一定的危害性等不足,本研究拟建立一种适用于临床标本的基因组DNA快速提取方法。在传统的基因组DNA提取试剂和方法的基础上,本研究采用二氧化硅修饰的超顺磁珠设计了一种基因组DNA快速提取方法;探讨磁珠用量、裂解液p H、盐酸胍浓度等因素对基因组DNA提取效率的影响并采用凝胶电泳实验进行验证。当磁珠用量在50~100μg/100 mg样品,裂解液p H约为6,盐酸胍的浓度为6 mol/L时基因组DNA提取效果好、效率高,且磁珠的用量与吸附表面积成正比,但达到一定用量后不会增加提取量,对于100 mg肺组织,适宜的磁珠用量为80μg。此基因组DNA提取方法高效省时,简便快捷,性价比高,适用临床大量样本基因组DNA提取。     

玉米基因组DNA提取及浓度测定方法评价

以非转基因玉米种子为材料,比较了常用的3种植物基因组DNA提取试剂盒及改良的CTAB法,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度及实时荧光PCR扩增检测,对提取得到的基因组DNA的纯度、得率及4种提取方法的重复性、提取时间进行分析;比较紫外分光光度法、Qubit荧光法、Pico Green荧光分光光度法,以实时荧光定量PCR检测结果为参照,对3种DNA浓度测定方法的准确性进行分析.结果显示,磁珠法(Promega)最适合应用于快速、简便、高效检测中的植物基因组DNA提取,能有效获得纯度高、完整性好的基因组DNA,并且磁珠法提取效率高,重复性好,提取时间短;在基因组DNA浓度测定中,紫外分光光度法、Qubit荧光法、Pico Green荧光分光光度法的相对误差分别为99.8％、49.8％和28.9％,表明Pico Green荧光分光光度法测定DNA浓度的准确度最高.     

木棉基因组DNA提取方法的比较研究

木棉组织细胞含有多酚类、糖类、萜类化合物和其他次生代谢物质,很难得到高质量的基因组DNA。为了获得高质量的木棉基因组DNA,本实验以两个不同地方采集的木棉成熟叶片为材料,采用CTAB法、SDS法、普通试剂盒、磁珠法试剂盒以及对以上4种方法进行改良后的4种方法,提取总的木棉DNA。通过微量紫外-分光光度计、琼脂糖电泳对所提取DNA的纯度、得率,毒害及耗时等方面进行了比较。结果表明:经改良后提取的DNA质量都有所提高,且改良的磁珠法试剂盒效果最佳,可直接用于下游分子生物学实验。     

木棉基因组DNA提取方法的比较研究

木棉组织细胞含有多酚类、糖类、萜类化合物和其他次生代谢物质,很难得到高质量的基因组DNA。为了获得高质量的木棉基因组DNA,本实验以两个不同地方采集的木棉成熟叶片为材料,采用CTAB法、SDS法、普通试剂盒、磁珠法试剂盒以及对以上4种方法进行改良后的4种方法,提取总的木棉DNA。通过微量紫外-分光光度计、琼脂糖电泳对所提取DNA的纯度、得率,毒害及耗时等方面进行了比较。结果表明:经改良后提取的DNA质量都有所提高,且改良的磁珠法试剂盒效果最佳,可直接用于下游分子生物学实验。     

粉蚧标本保存与DNA提取方法的比较

【目的】探讨适合粉蚧的标本保存及DNA提取方法。【方法】采用改良CTAB法、改良SDS法、Gen Mag Bio动物细胞组织/细胞基因组磁珠法以及Gene JET Genomic DNA纯化试剂盒法4种方法分别对新鲜活体4℃、无水乙醇﹣20℃和无水乙醇4℃3种保存方式且保存一年以上的扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis成虫进行DNA提取,并对不同提取方法所获取的DNA纯度与质量浓度进行分析比较验证。【结果】3种保存方式中,新鲜活体效果最好,其次为无水乙醇-20℃。无水乙醇4℃效果和无水乙醇﹣20℃无明显区别,均存在一定程度的降解。对于新鲜活体标本,以CTAB法提取的DNA质量最高,其次为Gen Mag Bio磁珠法和SDS法,Gene JET试剂盒法最差;对于无水乙醇﹣20℃和4℃保存时间较长的标本,磁珠法提取的DNA质量明显优于其余3种方法。【结论】无水乙醇﹣20℃可用于粉蚧长期保存,可满足后续分子研究需要;改良CTAB法对新鲜粉蚧成虫DNA提取效果较好,磁珠法对长时间保存DNA存在一定程度降解的粉蚧成虫效果较好。     

双磁珠法质粒DNA提取技术及应用

质粒是基因合成与测序领域中使用最为频繁的基因运载工具,然而传统的质粒DNA提取方法面临提取通量低、生产成本高等问题,无法满足日益增长的需求。本研究基于质粒提取原理,开发了双磁珠法(double-magnetic-bead method, DMBM)质粒提取技术,探究了磁珠投入量、质粒DNA片段大小、菌液投入量等因素对质粒提取的影响,并且对比了本技术与商业化质粒DNA提取试剂盒提取DNA质量、提取通量及提取成本。结果表明,双磁珠法质粒DNA提取技术可满足不同细胞密度、不同片段长度的质粒DNA提取。此外,该技术搭载96通道全自动核酸提取仪,提取的质粒DNA纯度更高、提取时间缩短80%、提取成本缩减57.1%,从而实现了质粒DNA提取的高通量、低成本,有效助力基因合成与测序。     

亚硫酸氢钠测序法检测水稻FIE基因CpG岛甲基化状态

建立了适用于水稻基因组特定基因甲基化检测的亚硫酸氢钠测序法,并利用此方法对FIE2A基因CpG岛部分片段的甲基化差异进行了研究。采用CTAB法提取水稻叶片和胚乳细胞的基因组DNA,经亚硫酸氢钠化学修饰后,针对已修饰的FIE基因序列设计特异引物并结合巢式PCR扩增,TA载体克隆、测序,最后对测序结果进行分析。结果表明巢式PCR能够增加特异性产物的产生,FIE基因CpG岛在对称的CG和CNG位点甲基化水平较高,而在非对称CNN位点甲基化水平最低,此外在叶片中的平均甲基化水平较高。由此表明本研究建立的亚硫酸氢钠测序法适用于水稻基因组特定基因甲基化状态的检测。     

一种改良的植物基因组DNA通用提取方法

高质量的基因组DNA是分子生物学研究的基础,而从富含糖类和次生代谢物且异质性强的植物材料中分离DNA相对困难。本方法在CTAB法和商业DNA提取试剂盒的基础上,在裂解细胞之前,对植物材料进行预处理．去除干扰DNA提取的代谢物,并在后续步骤中进行了一些优化。该方法适于多种不同的植物种类,所提取的基因组DNA质量较好,能满足下一步基因操作的要求,是一种通用的植物基因组DNA提取方法。     

麦冬基因组DNA提取方法研究

为了从富含多糖、多酚的顽拗植物麦冬中分离出高质量基因组DNA,分别建立了改良CTAB法和改良SDS法。通过使用核分离液和CTAB/NaCl溶液、提取液中加入0.35倍体积无水乙醇等最大限度地除去杂质。将两种方法提取的8种麦冬DNA与两种离心柱式试剂盒提取的DNA在纯度、产率等方面进行对比,并进行双酶切和SRAP分析。麦冬类植物SRAP反应体系的建立尚属首次。结果表明,改良CTAB法和改良SDS法均能从8种麦冬叶片中提取到高质量的基因组DNA,改良CTAB法提取纯度更高,提取幼叶DNA纯度可以与离心柱式试剂盒媲美,能够满足多种分子生物学试验要求。在后续试验中,用改良CTAB法从20多种沿阶草族植物中提取到了高纯度DNA。该方法通用性好,提取的DNA纯度高,对其他顽拗类植物基因组DNA的提取具有借鉴意义。     

适于涡虫基因组DNA快速制备的改良的CTAB法

提取得到高质量的DNA样品是进行分子生物学研究的必要前提。为了找到一种适用于提取涡虫基因组DNA的常规方法,我们以东亚三角头涡虫为材料,分别用改良的CTAB法、SDS法、SDS-蛋白酶K法对涡虫的基因组DNA进行了制备,并对3种方法制备的涡虫基因组DNA进行了检测与比较。根据比较结果,我们认为改良的CTAB法最适合于涡虫基因组DNA的快速制备,为涡虫的分子生物学研究打下了基础。     

4种黑曲霉基因组DNA提取方法的比较

目的:筛选适合提取曲霉DNA的方法.方法:比较2个菌落培养时间段(3d内和10d左右)提取DNA质量的差异;运用氯化苄法、石英砂+CTAB法、Biospin法和微波法分别提取黑曲霉基因组DNA,然后用直接电泳、浓度测定、PCR扩增等方法比较所提DNA的浓度和质量.结果:培养3d内的菌落提取的DNA纯度较高,无需纯化即可用于后续实验;4种方法制备的DNA均可用于PCR等后续实验,其中以石英砂+CTAB法提取的DNA纯度好,产率最高.结论石英砂+CTAB法是一种适用于曲霉DNA提取的简便方法.     

蚧虫基因组DNA不同提取方法的比较

实验以日本龟蜡蚧CeroplastesjaponicusGreen,白蜡绵粉蚧PhenacoccusfraxinusTang ,朝鲜球蚧DidesmococcuskoreanusBorchseniush和瘤大球坚蚧EulecaniumgiganteaShinji等 4种蚧虫为材料 ,分别用十二烷基硫酸钠 (SDS)法、十六烷基三乙基溴化铵 (CTAB)法、醋酸钾 (KAc)法和氯化钠 (NaCl)法等 4种方法 ,对单只蚧虫进行基因组DNA提取 ,用 0 8%琼脂糖凝胶电泳检测所提DNA。结果表明 ,4种方法都可以提取到基因组DNA ,但是比较而言 ,CTAB法和NaCl法所提取的DNA质量明显优于SDS法和KAc法 ,并适用于PCR。因此认为 ,CTAB法和NaCl法是实验室提取单只蚧虫基因组DNA更有效而实用的方法。     

野生山梨基因组DNA提取方法和部位比较

以野生山梨(Pyrus ussuriensis Maxim)嫩叶、一年生枝韧皮部和成熟叶片为材料,分别用CTAB,改良CTAB+高盐+5%PVP和试剂盒3种方法提取基因组DNA,通过测OD值、DNA琼脂糖凝胶电泳和SSR引物扩增检验.结果表明:韧皮部和嫩叶是最理想的提取DNA材料,改良CTAB法是比较理想的方法,试剂盒是提取DNA最简便快捷的有效方法.     

大青杨基因组DNA提取方法的比较

本研究采用改良SDS法、常规CTAB法和改良CTAB法(1.5×CTAB,2×CTAB,3×CTAB)提取大青杨基因组DNA,并用紫外光普分析、凝胶电泳、限制性内切酶消化和RAPD方法进行鉴定.结果表明:5种方法中,改良SDS法DNA提取率最高,但CTAB法比改良SDS法提取获得的DNA纯度高,OD260/OD280为1.73～1.81.与常规CTAB法比较,改良SDS法和改良CTAB法能有效去除蛋白、多糖、酚类及次生代谢物质.综合分析确定改良2×CTAB法为大青杨基因组DNA的最佳提取方法.     

苔藓植物DNA提取方法研究

提取高质量的 DNA是对苔藓植物遗传多样性进行研究的基础。该文以苔藓植物为试材 ,用 5种方法 ,即快速提取法、改良 CTAB法、CTAB法、SDS法及高盐法 (第一种为自行设计 ,第二种是对原有方法的改进 )对苔藓植物 DNA提取方法进行了比较研究。结果表明 ,快速提取法和改良 CTAB法是 2种适合于苔藓植物 DNA提取的方法。这 2种方法提取的 DNA浓度和纯度均比较高 ,凝胶电泳显示无明显降解现象 ,适宜作为 PCR扩增的模板 ,并成功地进行了 RAPD扩增。     

番茄加工产品DNA提取方法研究

采用SDS法、CTAB法、热碱法和试剂盒法提取番茄加工产品的DNA,并通过PCR方法是否检测出番茄内源基因来评价DNA提取效果.结果显示,番茄加工产品经弱碱稀释处理后,CTAB法和热碱法提取的DNA利用嵌套PCR检测出内源基因,可以满足基因检测需求.同时对加工产品DNA提取及基因检测需注意的问题进行了探讨.