大蒜素抑制脑缺血再灌注诱导细胞凋亡机制的研究进展

脑缺血再灌注损伤的主要机制是多种因素诱导的神经元凋亡。近些年来,大蒜素以其脂溶性好,可通过血脑屏障,并具有多种生物功效比如被用于抗细菌、病毒和真菌的感染,尤其是其对于脑保护的作用日益受到重视。本文主要对大蒜素抑制脑缺血再灌注诱导的细胞凋亡的作用及其机制方面做一综述。     

艾拉莫德增强丝裂霉素C诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡

目的探讨艾拉莫德增强丝裂霉素C（MMC）诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡的作用及其机制。 方法将人食管癌Eca109细胞分为五组：对照组、MMC组、25,50,100 μg/ml浓度艾拉莫德+MMC组;通过CCK-8和DCFH-DA染色法分别检测25,50,100 μg/ml浓度艾拉莫德联合MMC对人食管癌Eca109细胞活力和细胞活性氧（ROS）生成的影响,流式细胞术检测艾拉莫德联合MMC对人食管癌Eca109细胞凋亡的影响,并通过Western Blot检测艾拉莫德联合MMC对TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达的影响。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。 结果CCK-8结果显示,与0 μg/ml T-614+MMC组A450值（0.85±0.03）比较,25、50、100 μg/ml T-614+MMC组A450值（0.73±0.02,0.52±0.02,0.33±0.02）均降低,差异具有统计学意义（F = 127.60, P < 0.01）;DCFH-DA染色检测结果显示,与0 μg/ml T-614+MMC组DCFH荧光值（130.00±10.00）比较,25、50、100 μg/ml T-614+MMC组DCFH值（219.67±9.50,280.33±10.50,338.33±16.07）均升高,差异具有统计学意义（F = 170.20,P < 0.01）;流式细胞术检测结果显示,与对照组的细胞凋亡率（5.33±0.35）﹪比较,T-614和MMC组的凋亡率（20.30±2.00）﹪,（25.60±3.00）﹪均升高。与MMC组细胞凋亡率（25.60±3.00）﹪比较,艾拉莫德与MMC联用组（T-614+MMC）食管癌Eca109细胞的细胞凋亡率（56.20±3.00）﹪升高,差异均具有统计学意义（F = 247.50,P < 0.01）;Western Blot结果显示,与MMC组细胞TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达（0.87±0.06,0.25±0.03）比较,艾拉莫德与MMC联用组（T-614+MMC）食管癌Eca109细胞的TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达（1.28±0.08,0.59±0.03）升高,差异均具有统计学意义（F = 96.90,P < 0.01）。 结论艾拉莫德能够增强MMC对食管癌Eca109细胞活力的抑制作用,其机制可能通过促进ROS的生成,激活线粒体凋亡通路,最终导致食管癌Eca109细胞凋亡。     

姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用

目的:应用姜黄素处理人食管癌EC9706细胞,研究姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用。方法:应用细胞计数、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst染色、H.E染色和透射电镜检测经姜黄素诱导处理后人食管癌EC9706细胞的凋亡。结果:经姜黄素诱导处理后,人食管癌EC9706细胞生长抑制率达69.9%;细胞周期检测出现亚二倍体(亚G1期)细胞峰值,细胞凋亡率达23%;琼脂糖凝胶电泳显示出细胞凋亡典型的180-200 bp及其倍体的DNA"梯状"条带;Hoechst染色显示细胞核内出现浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光;光镜和电镜下可见典型的细胞凋亡特征:细胞体积缩小,染色体凝集,可见有成群或单独存在的凋亡细胞,电镜下可见凋亡小体存在。结论:姜黄素能够有效诱导人食管癌EC9706细胞的凋亡,从而进一步为食管癌等恶性肿瘤疾病的治疗和凋亡机理的研究提供重要基础和科学依据.     

辐射诱导对犬胆管平滑肌细胞凋亡中BCL-2活性的影响

目的:探讨γ射线对BCL-2基因在犬胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡中的活性影响。方法:实验犬24只(15～18kg),随机分为普通支架组和~(125)I支架组各12只。用切断吻合法,造成胆总管损伤。术后30天胆道狭窄形成后,分组将普通支架及125I支架从胆总管末端开口处释放到胆总管内。置入支架后60d分别行病理形态学检测,用免疫组织化学方法进行凋亡细胞,BCL-2蛋白基因检测,并用计算机图像检测系统检侧两组胆管腔面积。结果:~(125)I支架组犬胆管组织中BCL-2基因表达较普通支架组减弱,且BCL-2基因低表达组犬胆管出现明显增殖平滑肌细胞凋亡,而且犬肝外胆管无明显狭窄;而普通支架BCL-2基因高表达,且犬胆管未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,而且犬肝外胆管有明显狭窄。结论:~(125)I放射性支架通过抑制BCL-2基因,促进犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡,可以抑制犬肝外胆管狭窄。     

天然提取物诱导人HepG2 细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是机体维持内环境稳定,更好的适应生存环境采取的一种死亡过程。细胞凋亡异常与肿瘤的发生、发展存在密切的关系。细胞凋亡的信号途径主要有死亡受体介导的外源性通路、线粒体介导内源性通路、内质网信号通路及MAPK信号通路。通过作用于凋亡信号通路上一些关键基因,诱导肿瘤细胞凋亡被认为是临床抗肿瘤治疗最有成效的治疗方法之一。研究已证实多种天然提取物作用于凋亡信号途径中一些重要因子可诱导细胞凋亡,并取得较好的抑制肿瘤增殖的效果。本文是关于细胞凋亡机制及各种天然提取物作用于凋亡通路上主要基因进行抗肿瘤治疗研究进展的综述。     

大蒜素对全脑缺血侑灌注诱导的海马神经元凋亡的影响

的：观察大蒜素对全脑缺血／再灌注诱导的海马神经元凋亡的影响：方法：采用大鼠全脑缺血／再灌注模型;应用DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜和流式细胞仪检测海马神经元凋亡情况结果：缺血／再灌注大鼠海马DNA电泳呈现细胞凋亡特有的“梯状条带”,大蒜素预处理组未出现“梯状条带”;透射电镜观察到缺血／再灌注海马部分神经元超微结构呈现明显的凋亡特征,大蒜素预处理可改善神经元超微结构;缺血／再灌注海马神经元凋亡率较假手术组明显增加,大蒜素预处理可明显降低缺血／再灌注大鼠海马神经元凋亡率,结论：大蒜素可抑制全脑缺血／再灌注诱导的海马神经元凋亡、     

甲壳胺诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:通过体外实验探讨甲壳胺是否对人肝癌细胞HepG2具有生长抑制及诱导凋亡作用.方法:在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的甲壳胺,培养48 h,于倒置相差显微镜下观察甲壳胺处理组及对照组细胞形态学变化;用流武细胞术(FCM)检测HepG2细胞的凋亡率,Western印迹检测甲壳胺处理组及对照组Bcl-2和p53蛋白...     

bc-2核酶与Bax在诱导食管癌细胞凋亡中的协同作用

为了同时调节二种凋亡相关蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡,探索肿瘤基因治疗的可能性,同时转入可诱导表达的特异性切割bcl-2的核酶基因及bax基因,间接免疫荧光标记法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达量,用TUNEL、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.共转染后Bcl-2蛋白表达下降,同时Bax蛋白表达升高,导致30%左右细胞凋亡,并可使细胞对紫杉醇的敏感度增加近4倍,使紫杉醇有效作用时间缩短近一倍.同时调节二个凋亡相关基因可导致细胞凋亡,并能有效促进化疗药物诱导的凋亡.同时校正多个基因的异常表达,比仅仅改变单个基因可更有效地达到治疗肿瘤的目的.     

维甲酸诱导的人大肠癌细胞凋亡

本研究应用光镜、电镜技术、DNA凝胶电泳、流式细胞术及末端脱氧核苷酰转移酶原位标记(TUNEL法),观察全反式维甲酸ATRA诱导的人大肠癌CCL229细胞凋亡特征。RA诱导CCL229细胞凋亡,光、电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现特征性的DNA ladder,DNA直方图上显示亚二倍体峰。10-8mol/L-105mol/L范围内,RA诱导CCL229细胞凋亡表现出时间和剂量依赖性。     

bcl-2核酶与Bax在诱导食管癌细胞凋亡中的协同作用

为了同时调节二种凋亡相关蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡 ,探索肿瘤基因治疗的可能性 ,同时转入可诱导表达的特异性切割 bcl- 2的核酶基因及 bax基因 ,间接免疫荧光标记法检测 Bcl- 2及Bax蛋白的表达量 ,用 TUNEL、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 .共转染后 Bcl- 2蛋白表达下降 ,同时 Bax蛋白表达升高 ,导致 30 %左右细胞凋亡 ,并可使细胞对紫杉醇的敏感度增加近4倍 ,使紫杉醇有效作用时间缩短近一倍 .同时调节二个凋亡相关基因可导致细胞凋亡 ,并能有效促进化疗药物诱导的凋亡 .同时校正多个基因的异常表达 ,比仅仅改变单个基因可更有效地达到治疗肿瘤的目的 .     

高浓度葡萄糖对体外培养大鼠胰岛细胞凋亡的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖对体外培养大鼠胰岛细胞凋亡的影响及作用机制。方法:SD大鼠胰岛细胞原代培养,不同浓度的葡萄糖处理后,采用MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst-PI染色观察细胞凋亡,电镜观察细胞超微结构改变,RT-PCR方法检测Bax及Bcl-2相关基因mRNA表达水平。结果:5.5 mmol·L~(-1),11.1 mmol·L~(-1)和22.2 mmol·L~(-1)葡萄糖处理后,胰岛细胞活性分别下降到78.08%±2.29%、58.39%±3.13%和36.05%±2.63%,与阴性对照组比较差异具有统计学意义(P0.05);Hoechst-PI染色结果显示随着葡萄糖作用浓度的增加,凋亡细胞数量也增加;RT-PCR显示胰岛细胞经不同浓度葡萄糖处理后,Bax mRNA的表达明显上调,Bcl-2 mRNA表达下调(P0.05);电镜观察结果显示随着葡萄糖作用浓度的增加,胰岛细胞超微结构损害程度依次加重。结论:高浓度葡萄糖能明显引起胰岛细胞活性的下降,诱导凋亡反应的发生,凋亡机制与Bcl-2家族蛋白相关。     

Significance of Increased Apoptosis and Bax Expression in Human Small Intestinal Adenocarcinoma

Human small intestine accounts for 75% of the gastrointestinal (GI) length but for only 1–5% of GI tumors. The reason remains as yet unclearly understood. Our study was designed to examine whether increased apoptosis and expression of related genes/proteins, especially those of the Bcl-2 family, contribute to this difference. For this purpose, 77 samples from patients were examined by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling and immunohistochemistry, including 40 cases from normal small intestine (jejunum), 7 cases from jejunum and ileum adenocarcinomas, and 30 cases from normal colon. The results showed that a significantly higher level of enterocyte apoptosis was observed in normal small intestine compared with small intestinal adenocarcinomas and normal colon (median of apoptotic index, 15.2% vs 0.1% and 1.6%, p<0.01). A similar pattern was observed for Bax (expression-positive, 77.5% vs 28.6% and 53.3%, p<0.05) but not for Bcl-2 (42.5% vs 42.9% and 46.7%, p>0.05) or Bax/Bcl-2 ratio (percent of samples having a ratio ≥1, 45.0% vs 14.3% and 36.7%, p>0.05). In conclusion, increased apoptosis and expression of Bax, not Bcl-2 or the Bax/Bcl-2 ratio, may play some role in the relatively lower incidence of human small intestinal carcinomas. However, more studies are required for a better understanding of these changes. (J Histochem Cytochem 57:1139–1148, 2009)     

不同浓度胆汁酸盐对人肝胆管癌细胞凋亡的影响

目的:探讨不同浓度胆汁酸盐对人肝胆管癌细胞RBE凋亡的影响。方法:采用0、100μM、500μM、1 m M胆汁酸盐作用于人肝胆管癌细胞后,采用流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western-blot法检测细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:胆汁酸盐浓度为0、100μM、500μM、1 m M时,人胆管癌细胞的凋亡率分别为(0.7±0.12)%、(0.9±0.15)%、(1.4±0.17)%、(4.8±0.14)%,以1 m M胆汁酸盐所致人胆管癌细胞的凋亡最明显,Bcl-2蛋白表达量逐渐减少,Bax表达量逐渐增多,以1 m M胆汁酸盐时作用最明显,差异具有统计学意义(P0.05)。1 m M胆汁酸盐处理的人肝胆管癌细胞的形态由原来的梭形变成圆形,细胞核固缩、碎裂。结论:胆汁酸盐可以以浓度依赖性的方式导致人胆管癌细胞凋亡,以1 m M胆汁酸盐的作用最明显。     

雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡

目的：观察雷公藤甲素对胰腺癌细胞BxPC-3和PANC-1生长抑制及诱导细胞凋亡作用,探讨雷公藤甲素抗胰腺癌的机制。方法：雷公藤甲素处理BxPC-3和PANC—1细胞后,用M1rr法检测细胞的生长抑制,用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用罗丹明123和DCFH—DA染色方法测定细胞线粒体膜跨膜电位变化和活性氧（ROS）的产生,用Western印迹检测Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果：雷公藤甲素对胰腺癌细胞BxPC-3和PANC—1具有生长抑制和诱导细胞凋亡的作用,且呈时间和剂量依赖关系;处理72h后,胰腺癌细胞线粒体跨膜电位明显下降,Bax表达上调,Bcl-2表达下降。结论：雷公藤甲素能有效抑制胰腺癌细胞增殖,通过增强线粒体通透性诱导细胞凋亡。     

Molecular Mechanisms of Apoptosis in HL-60 Cells Induced by a Nitric Oxide-Releasing Compound

Nitric oxide (NO) generated from 1-hydroxy-2-0×0-3, 3-bis(2-aminoethyl)-l-triazene (NOC 18), an NO-releasing compound, induced monocytic differentiation of human promyelocytic leukemia HL-60 cells as assessed by expression of nonspecific esterases and morphologic maturation. Simultaneously, DNA fragmentation and morphological alterations typical of apoptosis were also induced. To investigate the mechanisms of apoptosis during differentiation of HL-60 cells induced by NO, the endogenous levels of Bcl-2 and Bax were assessed by immunoblotting. Treatment of cells with NOC 18 slightly reduced the level of Bcl-2 followed by Bax. These changes might be involved in the induction of apoptosis. The involvement of the activation of the interleukin-lβ converting enzyme (ICE) family of proteases (caspases), such as ICE and CPP32, in the pathways was also investigated. CPP32, but not ICE, was strongly activated in response to NOC 18 stimulation, thereby implicating CPP32-like activity in the induction of apoptosis. Moreover, the possible involvement of tyrosine phosphorylation in apoptosis was investigated. Pretreatment of cells with herbimycin A, an inhibitor of tyrosine kinases, suppressed DNA fragmentation and CPP32-like activity, whereas pretreatment with vanadate, an inhibitor of tyrosine phosphatases, enhanced both parameters, suggesting that tyrosine phosphorylation might be involved in the pathways of apoptosis in HL-60 cells induced by NO.     

缺氧对食管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨缺氧对人食管癌细胞Eca109增殖及凋亡的影响及其作用机制,为食管癌的诊断和治疗提供新的思路和路径。方法:以终浓度为250μmol/L氯化钴模拟缺氧环境,将人食管癌细胞Eca109于常氧及缺氧条件下分别培养12 h、24 h、36 h、48 h,采用倒置相差显微镜观察细胞生长情况,MTT法检测细胞增殖情况,利用细胞活力分析仪NC-3000检测各组细胞凋亡情况。结果:相对于常氧对照组而言,缺氧后各组Eca109细胞增殖减弱,凋亡细胞比率明显升高,其中以缺氧24 h的凋亡细胞比率最高,缺氧36 h的凋亡细胞比率较缺氧24 h时有所回落。结论:缺氧可以抑制人食管癌细胞Eca109的增殖并诱导其凋亡。     

凋亡素2配体对放射线诱导95-D细胞凋亡的影响的研究

目的:探讨凋亡素2配体(Apo-2L)对放射线诱导肺癌95-D细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测不同浓度凋亡素2配体在体外对肺癌95-D细胞的抑制率,将细胞分为4组,对照组、凋亡素2配体组、单纯照射组、凋亡素2配体+放射照射组,流式细胞仪检测各组凋亡率及细胞周期。结果:凋亡素2配体对95-D细胞的体外抑制作用明显,随着药物浓度的增大及时间的延长,抑制率明显增高(P0.05)。流式细胞术显示凋亡素2配体与放射线联用能够使95-D细胞的凋亡率提高,与单用凋亡素2配体组及单纯放疗组相比,凋亡率差异显著(P0.05)。结论:凋亡素2配体在体外具有抑制95-D细胞增殖的作用并能够促进细胞的凋亡,同时凋亡素2配体联合放射线可以明显提高肺癌95-D细胞的凋亡率。     

beta榄香烯对人脑胶质瘤SHG44 细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨中药提取物beta- 榄香烯对胶质瘤SHG44 细胞增殖抑制作用及对Bax 和Bcl-2 蛋白表达的影响,并进一步探讨发 生的机制。方法：用不同浓度的beta-榄香烯对体外培养的SHG44 细胞进行干预,分别采用MTT、流式细胞仪检测法,观察beta-榄香 烯对SHG44细胞增殖的抑制和凋亡诱导作用,并通过Western blot检测凋亡相关蛋白Bax 与Bcl-2 蛋白表达情况。结果：经beta- 榄香烯处理SHG44细胞后,MTT 结果其发现SHG44细胞生长受药物浓度和时间的影响,细胞生长明显被抑制,且（P<0.05）,流 式细胞术显示,茁- 榄香烯诱导SHG44细胞后,细胞凋亡指数伴随药物作用时间的延长凋亡显著增加;Western blot 结果发现,beta- 榄香烯对SHG44 细胞的诱导后,使促凋亡蛋白Bax 和抑凋亡蛋白Bcl-2 与对照组相比发生了显著改变,且实验组Bax 蛋白表达 明显高于对照组,而抑凋亡蛋白Bcl-2 的表达伴随beta- 榄香烯的作用时间的增加,表达也逐渐减少。结论：beta- 榄香烯能显著抑制胶 质瘤SHG44 细胞的增殖,促进其凋亡;其机制可能与调控Bcl-2 和Bax表达有关。