紫外线诱变选育碱性蛋白酶高产菌株

本实验以枯草杆菌A4－3为出发菌株,发酵产生碱性蛋白酶,其野生型菌株产酶为2412u／ml。采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子,得到变异株As—4,产酶2732．8u／ml。对As—4菌株进行紫外线绣变处理1min,得变异菌株AX—46,产酶为3213．8u／ml,且产酶能力稳定。     

利用原生质体诱变筛选碱性蛋白酶高产菌株

本实验以枯草杆菌ＡＸ—４６为出发菌株,在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体,并对原生质体进行紫外诱变处理,对大量的再生突变株进行发酵筛选,获得高产菌株ＡＰ—１２,碱性蛋白酶产量由原来的３２００．８ｕ／ｍｌ提高到４３５３．１ｕ／ｍｌ,提高率达３６％。同时又对ＡＰ—１２菌株进行遗传稳定性考查,考查结果,ＡＰ—１２是高产稳定菌株。     

复合诱变原生质体选育耐热碱性蛋白酶高产菌

以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)53号为原始菌株,在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,对原生质体进行复合诱变,对大量再生突变株进行筛选,最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌53-G38-6,产酶活力由1104U/ml提高到22080U/ml。适宜的发酵条件:培养基(％)胰蛋白胨1,酵母膏0.5,玉米粉5,Na_2HP0_4·12H_20 0.4,KH_2P0_4 0.03,Na_2CO_3 0.1,自然pH。42℃旋转培养44～48h,得到的蛋白酶热稳定性强,60℃处理1h剩余酶活55％。酶反应最适条件:62℃,pH10.0,在pH9～10.5范围内稳定。     

紫外诱变选育米曲霉高产蛋白酶菌株

以从自然发酵黄豆酱中筛选的5株野生米曲霉为供试菌株,以这些菌株产蛋白酶(酸、中、碱)、淀粉酶(α-淀粉酶、糖化酶)活力大小为评价标准,筛选出米曲霉K61作为诱变出发菌株。采用紫外诱变对米曲霉K61菌株进行改造,最终筛选出一株蛋白酶活力高且遗传性能稳定的突变株Y29。将米曲霉Y29菌株应用于黄豆酱的生产中,并与目前工业生产中广泛应用的米曲霉沪酿3.042菌株进行比较。性能实验结果表明米曲霉Y29菌株的蛋白酶(酸、中、碱)活力明显高于米曲霉沪酿3.042菌株,但α-淀粉酶、糖化酶、生长速度和孢子数这4个指标两者的差异并不显著;制酱品质试验结果表明,米曲霉Y29菌株的酱香更浓郁一些,氨基酸态氮含量达到0.77g/100mL,高于米曲霉沪酿3.042菌株,其它指标均符合国家标准GB2718-1996。     

嗜碱性芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究II.诱变株选育及产酶条件

嗜碱性的短小芽孢杆菌R115(Alkaliphilic Bacillus pumilus)经0．4mg／ml亚硝基胍和0.4μg／ml利福平处理,获得一株具有高产稳产碱性蛋白酶的变异株(B45),产酶活力由2803μ／ml提高到6000u／ml(28℃测定),该诱变株的最适产酶条件为起始pH10．5-11．0,温度30—35℃,培养时间52—54b。0．4-0．6％K2HPO4．可增加酶的产量。     

N+离子注入诱变选育中性蛋白酶高产菌株及发酵条件的研究

对产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.398进行离子注入诱变,从正突变率较高的注入剂量30～50 × 1014 ions/cm2范围内,筛选出一株高产菌株ZC-7.该菌株在优化了的摇瓶培养基中,培养42h,产酶可达16900U/mL.在7L发酵罐上控制pH6.0～7.0,溶氧10%～20%.以32℃3～40℃～30℃变温发酵42h,酶活力最高可迭19680U/mL,为初始菌株的2.1倍.     

产碱性蛋白酶嗜碱芽孢杆菌的筛选及其研究

利用造纸黑液对土样进行富集,筛选出3株碱性蛋白酶酶活力较高的嗜碱芽孢杆菌X1、X2、X3。对它们的生长曲线,产酶曲线,在不同C、N源、pH值、盐浓度下的产酶活力进行的研究表明:3株嗜碱芽孢杆菌(Bacillussp.JBX1、X2、X5)酶活力较高(达到100U/mL),X2最高酶活可达140U/mL。最适pH值为9.5,碳源中的蔗糖,氮源中的酵母浸提物和硝酸钠均利于产酶。X1、X5两株嗜碱芽孢杆菌均表现出较强的耐盐耐高渗透压的能力。X1在11%的NaCl浓度下生长良好,酶活仍然达到80U/mL以上。而X2和X5对温度的耐受性比较强,在经70℃处理15min后依然保持了80%以上的酶活力,所产蛋白酶为高温碱性蛋白酶,从而为进一步的应用和研究奠定了基础。     

强化底物利用酶系表达,提升地衣芽孢杆菌生产碱性蛋白酶性能

地衣芽孢杆菌2709由于易于培养、GRAS状态和完善的蛋白质分泌能力,是已经投入工业生产碱性蛋白酶的菌株.为改善该菌株的发酵生产性能,提高菌体对培养基成分的利用和碱性蛋白酶产量,对菌株的胞外分泌酶系进行完善.利用同源重组机制,在基因组复制起始位点附近引入了来源于短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因xynA和在复制起始位点中心对称...     

一株产碱性蛋白酶芽孢杆菌的筛选、鉴定及应用初探

为了筛选碱性蛋白酶产生菌并探讨其对蛋白质饲料的发酵效果,以肉粉厂表层土壤为菌株分离源,利用脱脂牛奶培养基分离和纯化蛋白酶产生菌,通过形态特征、生理生化和16S rRNA基因序列分析确定菌株的分类地位,并采用L9(33)正交设计研究筛选出的优势菌种的接种量(3％、6％和12％)、种子液培养时间(12 h、24h和48 h...     

碱性蛋白酶

碱性蛋白酶在洗涤剂、制革、丝绸、饲料、医药、食品、环保等领域被广泛应用,具有重要的工业和经济价值。在筛选新型蛋白酶产酶菌株方面,近年来已报道了具有较高pH适应性的碱性蛋白酶,碱性弹性蛋白酶,水解多种底物的碱性蛋白酶,具有耐热、耐表面活性剂、耐氧化剂等特     

用管碟法测定碱性蛋白酶活力

参照抗生素效价生物测定法,用管碟法测定碱性蛋白酶活力,可大大提高菌种筛选的工作效率。待测样品在２％酪蛋白平板上的水解圈直径被效正后,从标准曲线上可查得相应的酶活。管碟法测得的酶活与Ｆｏｌｉｎ法测得的酶活相差一般小于２０００ｕ／ｍｌ。管碟法测定酶活时,操作要求认真仔细,操作误差可使一样品的水解圈直径相差２．９ｍｍ,但一般误差在０．２～０．３ｍｍ,相应酶活误差小于１０００ｕ／ｍｌ。     

枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的克隆和表达

目的:获得碱性蛋白酶基因。方法:用PCR的方法从枯草芽孢杆菌A-109中扩增碱性蛋白酶基因(apr),并进行测序分析,构建表达载体,最后转化大肠杆菌BL21,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测该基因的表达情况。结果:apr基因片段含1092个碱基对。该基因片段核苷酸序列与Bacillus amyloliquefaciens subtilisin DFE precursor有99%的同源性,对应的氨基酸序列与Bacillussp.DJ-4有99%的同源性。apr基因在大肠杆菌BL21中获得表达,并表现出蛋白酶活性。结论:获得了具有活性的新的碱性蛋白酶基因。     

两个不同启动子及其组合对碱性蛋白酶AprE异源表达的影响

背景:碱性蛋白酶(alkaline protease)是一种具有广泛用途的工业酶制剂,其发酵活力目前仍不能满足工业生产需要。目的:旨在通过优化启动子及其组合来提高Bacillus subtilis WB600中碱性蛋白酶AprE的产量。方法:以Bacillus subtilis WB600为出发菌株,成功构建了含有4种不同类型启动子(P1、P2、P-1-2、P-2-1)的碱性蛋白酶AprE表达菌株。结果:含不同启动子的4株重组菌均可成功表达碱性蛋白酶,发酵48h,含单一启动子P2的重组菌株表达碱性蛋白酶的活力为4 041U/ml,是P1的1. 23倍。双启动子重组菌B. subtilis WB600/P-2-1-aprE表达的酶活性最高,是双启动子P-1-2的1. 35倍,达到了6 125U/ml。结论:为工业化高产碱性蛋白酶提供了一种有效策略。     

Thermostable Alkaline Protease from a Novel Marine Haloalkalophilic Bacillus Clausii Isolate

An oxidative and SDS-stable alkaline protease secreted by a marine haloalkalophilic Bacillus clausii isolated from the tidal mud flats of the Korean Yellow Sea near Inchon City was investigated in batch fermentation in shake flasks and in a bioreactor under a range of conditions. The isolate produced maximum protease yields (15,000 U ml⁻¹) under submerged fermentation conditions at 42 °C for 40 h with an aeration of 1.5 v/v/min and agitation of 400 rev/min in a formulated soybean—casein medium (pH 9.6) containing (w/v): soybean meal (2%), casein (1%), corn starch (0.5%), NH₄Cl (0.05%), NaCl (0.05%), KH₂PO₄(0.04%), K₂HPO₄(0.03%), MgSO₄(0.02%), yeast extract (0.01%) and Na₂CO₃(0.6%). The optimal pH and temperature of activity of the partially purified enzyme were 11.5 and 80 °C, respectively. The alkaline protease showed extreme stability towards SDS and oxidizing agents, retaining its activity above 96 and 75% on treatment for 72 h with 5% SDS and 5% H₂O₂, respectively. The inhibition profile exhibited by phenylmethanesulphonyl fluoride suggested that the protease from B. clausii belongs to the family of serine proteases.     

重离子诱变枯草芽孢杆菌高产复合酶菌种的筛选

重离子诱变作为一种新型高效的辐照诱变方式,具有突变率高、突变谱广、突变体稳定等特点。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)因具有多种水解酶活力而广泛应用于工业生产,虽然经过多次诱变和改造,其酶活力不断提高,但其复合酶活力仍有提升空间。同时,多次同种诱变剂的使用容易导致菌种产生"抗性",酶活力提高不大。为此,本研究首次利用不同剂量¹²C⁶⁺重离子束对枯草芽孢杆菌20076进行辐照诱变。诱变后通过透明圈初筛和酶活力验证复筛方式选育出一株复合酶活力较高的菌株B. subtilis KC-1。与原始菌株相比,其发酵液滤纸酶活力、内切葡聚糖酶活力、β-葡萄糖苷酶活力、外切葡聚糖酶活力、蛋白酶活力和α-淀粉酶活力分别提高了20. 2%、79. 6%、98. 2%、7. 4%、10. 4%和27. 4%。11代遗传稳定性实验结果表明该突变株具有良好的稳定性。     

地衣芽孢杆菌D-1产碱性蛋白酶培养条件的优化

为了对产碱性蛋白酶的地衣芽孢杆菌D-1的培养条件进行优化,利用10 L发酵罐,采用正交设计19(34)试验,对培养温度、pH值、搅拌转速、通气量4条件进行优化,得到地衣芽孢杆菌D-1发酵产碱性蛋白酶的最优培养条件为:培养温度37.0℃,pH值7.5,通气量4L/min,搅拌转速300r/min.利用最优条件组合进行验证...