16份石榴RAPD扩增产物的两种电泳方法检测及其序列特征

本实验以16个石榴品种为实验材料,筛选出10个重复性及多态性均较好的引物进行RAPD分析。分别采用琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测方法对PCR扩增结果进行检测并对其结果进行比较,结果显示,两种电泳方式均能得到较为清晰的扩增条带,且两种电泳方式获得的条带总数及多态性条带数均有所不同,琼脂糖凝胶电泳方法共检测出76条带,其中有43条为多态性谱带,多态性比率为56.4%;而在PAGE电泳方法共检测出123条谱带,多态性谱带数为87条,多态性比率为70.95%。PAGE电泳方法检测出的条带数约为琼脂糖凝胶电泳方法检测出条带数的1.5倍。基于两种电泳方法所得RAPD标记的多态性位点,利用NYSYS软件计算遗传相似系数,并构建遗传关系聚类图,分析结果显示,石榴遗传多样性丰富,两种电泳方法所得聚类结果大致相同,可以利用RAPD分子标记及两种电泳检测方法对不同数量的石榴进行分子水平的品种鉴定和遗传多样性的分析。同时通过对来自几个引物随机挑选的17个片段进行克隆,测序结果显示17个片段都是对应引物的RAPD扩增产物,其中有3条是编码蛋白的基因片段,表明了RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,同时也可以扩增编码蛋白的基因片段,这为更好地认识RAPD技术的实质以及促进石榴产业的发展提供了理论依据。     

猪生长激素的提纯及其生物学活性和某些理化性质的研究

通过调pH抽提、硫酸铵分级分离和DEAE-纤维素柱层析等方法从猪垂体中提取了生长激素。平均产率约为0.5g生长激素/1000g鲜垂体。用去垂体大白鼠胫骨测定法测得共促生长效应为1.84。提取的生长激素在高pH不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳时呈现两条带;Sephadex G75柱层析得到一个峰;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现一条带,其分子量约为21,900道尔顿;聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳呈现五条带,主带在pH7.8处;DNS法测定其N-末端氨基酸为苯丙氨酸一种。此外,还测定了它的氨基酸组成。     

牦牛血超氧化物歧化酶电泳多谱带现象研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳、线性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳、制备电泳、等电聚焦电泳以及不同试剂处理等多种方法对牦牛血铜锌超氧化物歧化酶电泳多谱带现象进行了研究。结果表明在不同的实验条件下,各带会发生相互转化。该多谱带现象是由聚合和构象异构体两种原因造成。     

意蜂与中蜂血淋巴蛋白质成份的研究

本实验用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了两个蜂种的血淋巴蛋白质成分。意蜂和中蜂都是Apis属,血淋巴蛋白质电泳谱相似。但是,两蜂种以及同一蜂种不同级别、不同发育阶段的电泳谱又各有特点。根据实验,我们把成年蜂血淋巴电泳谱分为11条带,雌蜂电泳谱上的带5是卵黄原蛋白;雄蜂卵黄原蛋白含量很少或测不出。 用Thorun方法,在聚丙烯酰胺凝胶平板电泳上测得意蜂卵黄原蛋白的分子量为185,000。     

交变脉冲电场凝胶电泳分离染色体DNA分子

交变脉冲电场凝胶电泳是一种可用来分离染色体大分子DNA的新的凝胶电泳方法。通过交替采用两个不同方向的不均匀电场,使DNA分子在挤过凝胶筛孔时不断改变方向,从而获得大分子DNA的高分辨率电泳。本文报道用自行设计的交变电场电泳仪进行脉冲电场凝胶电泳分离酵母染色体DNA,可分成11个条带。用自身连接的lDNA作为分子量标准物,可分出14个条带。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应和面包酵母转移核糖核酸的分离

对聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应作了研究。建立了电流密度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(CDGGE)。CDGGE不仅在电泳开始时,而且在电泳过程中对被分离的样品有压缩作用,从而提高了分辨率。作者用CDGGE法将面包酵母混合转移核糖核酸分成20条带,并对其中的一些带作了鉴定。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应和面包酵母转移核糖核酸的分离

对聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应作了研究。建立了电流密度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(CDGGE)。CDGGE 不仅在电泳开始时,而且在电泳过程中对被分离的样品有压缩作用,从而提高了分辨率。作者用CDGGE 法将面包酵母混合转移核糖核酸分成20条带,并对其中的一些带作了鉴定。     

大菱鲆肌肉组织中的基因差异表达与体长性状的相关性研究

为了揭示出一些影响鱼类生长发育速度方面的遗传信息,本文应用mRNA差异显示技术,以同一批受精卵孵化的同池养殖的两组大菱鲆鱼为试验材料,检测了在相同生长发育条件下两组体长相差悬殊的3月龄大菱鲆肌肉组织的基因差异表达。结果：18对引物组合共显示出723条带,其中有527条带能够重现,差异显示条带的重现率为72.89%;在527条稳定的条带中有21条为差异带,其余506条为共有带（96.02%）。21条差异表达条带中有16条（3.04%）为阳性差异表达cDNA片段。这些差异表达cDNA片段的存在,说明体长差异悬殊的两组大菱鲆之间存在基因表达上的差异。试验结果对于进一步分析各种差异表达基因与大菱鲆的生长性状之间的相关关系奠定了基础;为深入研究大菱鲆的生长发育性状的分子遗传机制奠定了基础。     

运用多种策略改良差异显示PCR

目的：改进差异显示PCR技术,提高其在筛选差异表达基因方面的效率。方法：①采用单碱基金铆钉引物;②增加引物长度;③提高PCR反应的严谨性;④应用同步重复测序电泳。结果：减少经典方法的工作量,降低了非特异性和假阳性率。用改良技术研究热适应大鼠下丘脑基因的差异表达,发现了一个差异表达基因片段,斑点杂交证实为阳性片段。结论：改进后的差异显示PCR技术是一种研究基因差异表达从而发现新基因或基因新功能的有效方法。     

华中五味子AFLP反应体系的建立

目的：建立一个适于华中五味子研究用的AFLP反应体系。方法：以华中五味子硅胶干燥嫩叶为试材,采用改良CTAB法提取到高质量DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对MseⅠ/EcoRⅠ双酶切、连接、预扩增和选择性扩增过程中的关键因素进行分析。结果：双酶切6h,片段主要集中在250～2000bp;连接产物和预扩增产物最适稀释倍数均为10倍;预扩增产物经选择性引物E-ACT/M-CAT和E-ACA/M-CAG扩增,琼脂糖电泳检测其主带分别集中在250～375bp和500～750bp,6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测及银染,条带清晰可辨。结论：该体系具有稳定性高、重复性好等优点,可用于华中五味子AFLP分析。