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免疫-PCR结合了抗原抗体反应的特异性和PCR的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。免疫-PCR的关键在于形成抗体-标记DNA偶联物,作为桥梁连接免疫反应的特异和PCR的高扩增能力。本文简述了-PCR的基流程以及与标DNA相偶联,PCR产物检测方法的进展。 相似文献
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从刚刚建立的一种新的检测方法出发,对免疫-PCR的原理及其应用前景作了一番探讨,并与其它类似的检测方法进行了比较,指出了它的特点、优越性和不足之处。针对免疫-PCR的缺点提出了一些改进的方案,以使其朝着实际应用方面迈进一步。 相似文献
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翟俊辉 《国外医学:分子生物学分册》1994,16(5):223-231
免疫-PCR是1992年建立的抗原检测系统,其基本过程和ELISA相似,免疫-PCR用一段可扩增的DNA分子代替ELISA中的酶来放大检出信号,因而大大提高了灵敏度,尽管此法尚处于探索阶段,但应用前景是诱人的。 相似文献
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本文讨论了检测丙型肝炎病毒核糖核酸(HCVRNA)的样本来源和处理,引物的设计,合成和选择等问题;重点介绍了蛋白酶K消化法,聚乙二醇沉淀法,异硫氰酸胍一步法,硅凝胶提取法和直接捕获法提取HCV RNA的5种方法,以及一步PCR法,常规RT-巢式PCR,直接RT-巢式PCR,化学修饰的RT-巢式PCR,联合PCR,双温PCR和定量竞争性PCR等7种PCR方法检测HCV RNA,用PCR检测HCV RNA方法的标准化以及检测HCVRNA具有非常重要的意义。本文还介绍了一种新型的定量方法-bDNA信号放大技术检测HcVRNA。 相似文献
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一种新的免疫—PCR系统的建立和应用研究 总被引:3,自引:1,他引:2
把PCR技术作为指示系统引入免疫检测中,建立了免疫-PCR技术。在本研究中,以PEI作交联剂,首次成功地将特异性抗体直接与DNA交联,构建了三种Ab-DNA基因探针,组成新的免疫-PCR检测系统。此三种特异性Ab-NDA探针可用于检测三种相应抗原。检测HSA抗原的最低含量可达10^-18mg/ml,灵敏度比ELISA高10^6倍。 相似文献
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糖单孢菌16S rDNA的PCR-RFLP分析 总被引:5,自引:0,他引:5
PCR-RFLP分析适用于种和种间水平的多相分类研究。文章对PCR-RFLP方法应用于糖单孢菌属分类有具体方法进行了探讨;报道了一组适于糖单孢菌属PCR-PFLP分析的限制性内切酶,并用这组酶对6株糖单孢菌属分离株进行了研究,进一步探讨了实验菌株在该属的分类地位。同时指出了PCR-RFLP方法应用中应注意的问题。 相似文献
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免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
免疫PCR是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ELISA法,若与抗体连接的酶用DNA片段代替,则该DNA片段可用于PCR扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与DNA相连建立了免疫PCR技术,并将其用于检测甲胎蛋白(AFP),其敏感性比ELISA法高104。因此,免疫PCR有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断 相似文献
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LSSP-PCR—筛选基因突变的简易方法张军,宋亮年(第二军医大学基础医学部病理生理学教研室,上海200433)关键词LSSP-PCR,基因突变最近,Pena等报告了一种简便易行、检出率又很高的新型基因突变检测技术,称为低严格特异性单链引物PCR(l... 相似文献
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PCR和Southern Blot检测土拉弗氏菌气溶胶 总被引:2,自引:0,他引:2
为提高检测土拉弗氏菌的特异性和敏感性,建立了土拉菌PCR及核酸杂交检测方法。运用平板计数、多聚酶链反应对土拉菌气溶胶稳定性进行了比较,结果表明PCR具有较高灵敏度,并且在采样后3小时PCR就可以得出定性结果,而平板计数则需要3~7天。采用PCR法合成了土拉菌376-bp探针,分别对细菌菌液、568-bpPCR产物和气溶胶样品进行杂交,结果表明菌悬液直接杂交可检出105CFU左右的细菌,检测PCR产物可达40pg。PCR和Southern印迹相结合有利于细菌的分离鉴定 相似文献
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免疫PCR是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ELISA法,若与抗体连接的酶用DNA片段代替,则该DNA片段可用于PCR扩增。因此,免疫PCR有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断。 相似文献
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HLA—DRB1基因位点多态性的PCR—RFLP分析 总被引:8,自引:0,他引:8
设计并建立了一套适合国内应用的改良PCR-RFLR方法,分5组特异性扩增DNA样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码DR抗原特异性HLA-DRB1基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它DRB位点等位基因的交叉扩增,不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品。 相似文献
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将间接ELISA、非放射性分子杂交和RT-PCR三种方法应用于水稻草矮病毒(RGSV)的检测。结果表明,利用自制的融合蛋白GST-NC的抗血清检测RGSV的灵敏度为1mg鲜重的病株叶片或84ng提纯病毒,利用地高辛(DIG)标记的DNA探针NC的点杂交方法检测RGSV的灵敏度为50μg病叶或6ng病毒,而RT-PCR的检测灵敏度则为10μg病叶或2ng的病毒,对上述三种方法的灵敏度和可操作性也进行 相似文献
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应用PCR-SSCP快速鉴定结核分枝杆菌复合群 总被引:4,自引:0,他引:4
通过聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)技术分析结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床株的16SrDNA基因。60例临床标本中,20例为阳性,与传统方法比较无差异。其中分型:18例为结核分枝杆菌,2例为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌双重感染。20例阴性标本中,PCR-SSCP又检查出5例阳性。20例对照标本中,3种传统方法与PCR-SSCP法均检测为阴性。全部试验3d报告结果。结核分枝杆菌复合群和卡介苗的图形相同以外,其它分枝杆菌的PCR-SSCP电泳图谱均有差异。所以,应用PCR-SSCP技术快速 相似文献
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近几年,有关幽门螺杆菌(HP)基因分型方法及其应用的研究取得了很大进展。基因分型方法包括:质粒分型、限制性内切酶分型(REA)、核糖分型、染色体DNA脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型、多聚酶链反应限制性内切酶消化(PCR-RFLP)分型、任意引物PCR(AP-PCR)分型、PCR单链构型多态性(PCR-SSCP)分型和核苷酸序列分析等。基因分型方法广泛用于HP的研究,如基因图的构建、感染复发、耐药机 相似文献
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PCR法检测外环境水中脊髓灰质炎病毒I型基因的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用聚合酶链反应(PCR)技术检测外环境水中分离的脊髓灰质炎病毒I型(PVI)毒株基因型,发现所分离的22株病毒,均为疫苗SabinI相关株,脊髓灰质炎病毒的温度敏感(T特征)试验亦提示为弱毒标,与PCR试验相吻合,表明实施强化免疫和常规免疫后,外环境中的脊髓灰质炎病毒已被疫苗相关株循环所取代,同时证实用了PCR作为相环境中PVI病毒株的基因型分析的检测方法是特异和敏感的。 相似文献
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本文综述了梅毒的实验室诊断的分子生物学方法,特别是多聚酶链反应(PCR)和Western免疫印迹等新的分子生物学检测技术在诊断早期梅毒、先天性梅毒和神经性毒素等方面的研究进展,着重讨论了PCR诊断梅毒的多方面情况,并对PCR、Western免疫印迹技术与经典兔感染试验进行了评价。 相似文献
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RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸 总被引:3,自引:0,他引:3
采用异硫氰酸胍-酚-氯仿(AGPC)一步法提取病毒RNA,并依据肾综合征出血热病毒(HFRSV)核蛋白(NP)编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nestedPCR)检测HFRSVRNA方法,应用此法对HFRSV感染的VeroE6细胞培养液及HFRS患者血清中的病毒RNA进行检测。结果显示,感染细胞培养液及35例HFRS患者血清均为阳性,正常的VeroE6 相似文献
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本文应用LSAB免疫组织化学方法及AgNOR技术对73例甲状腺良、恶性病变PC-NA、P53蛋白及AgNOR进行了检测并对其相关性进行了研究。结果显示①PCNA表达在良、恶性病变中有显著差异(P<0.01);②AgNOR颗粒均数及其形态在良、恶性病变中有较显著差异;③PCNA表达与AgNOR计数呈显著正相关性(P<0.01);④P53蛋白在良、恶性病变中的表达均呈阴性,只是在淋巴结转移灶内呈阳性表达。根据研究我们认为检测甲状腺良、恶性病变中PCNA及AgNOR颗粒对甲状腺良、恶性病变的鉴别、预后及对临床治疗均有意义 相似文献