蕨精子单克隆抗体制备Ⅰ：确定精子抗原性

蕨精子单克隆抗体制备Ⅰ：确定精子抗原性方瑾,刘宁,周云龙,钱晓菁,陈令静（北京师范大学生物系,北京１０００８７５）梁华,鞠振林,潘香刚（中国农业科学院生物技术中心工试基地,北京１００８１）寻找和研究配子的特异性蛋白对于研究配子识别,深刻认识高等植物受...     

与顶体反应相关的抗人精子单克隆抗体及其抗原的特性 Ⅰ顶体反应的诱导及抗顶体反应精子的单克隆抗体的制备

精子必须经过获能和顶体反应(AR)才具受精能力。利用获能和AR 前后精子细胞内和精子表面大分子的变化,可探索新的避孕办法和男性不育诊断及治疗的新途径。本文将正常人精子于体外在BWW-BSA 培养基中获能,用钙离子载体A 23187诱导人精子进行AR(以三重染色和金霉素荧光染色两种方法检测这些精子的AR 率为50%左右),然后用这些新鲜的人精子作为免疫原,制备了23个抗人精子单克隆抗体,其中21个为IgM,2个分别为IgG_1和IgG_2。根据23个单克隆抗体与经获能和AR 处理的精子以及未处理精子的不同免疫反应,将它们分为A(AR 精子反应组)、B(未处理精子反应组)和C(双重精子反应组)三组,并测定了这些单克隆抗体与人的某些白血病细胞系的交叉反应。     

与顶体反应相关的抗人精子单克隆抗体及其抗原的特性 Ⅱ单克隆抗体对精子功能的影响以及抗原定位与免疫印迹

精子只有经过获能和顶体反应,才能与卵融合。本文对以体外诱导的顶体反应人精子作为免疫原制备的23个单克隆抗体进行了一系列鉴定,结果表明:所得单克隆抗体的间接免疫荧光染色,主要定位在人精子的赤道板和中段,没有发现定位于顶体及顶体后的单克隆抗体。某些单克隆抗体的间接免疫荧光染色部位在顶体反应后发生了改变。有18个单克隆抗体显示程度不同的精子凝集作用,未发现有精子制动作用的单克隆抗体。免疫印迹证实,有9个单克隆抗体的靶抗原是蛋白质类物质。     

抗精子单克隆抗体6B10的免疫定位及其相应抗原分析

利用杂交瘤技术制备小鼠抗精子单克隆抗体 6B1 0 ,为IgG型免疫球蛋白 .通过 (NH4) 2 SO4盐析并结合蛋白A SepharoseCL 4B亲和层析法纯化单克隆抗体6B1 0 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析抗体纯度 .采用金霉素荧光染色法 (CTC)检测精子顶体反应 ,发现单克隆抗体 6B1 0可以显著地抑制孕酮诱导的精子顶体反应 .采用间接免疫荧光法和胶体金免疫电镜观察发现单克隆抗体 6B1 0的相应抗原定位于精子顶体质膜上 .用 1 %TritonX -1 0 0抽提精子全蛋白 ,采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳结合免疫印迹实验 (Westernblot)发现单克隆抗体 6B1 0所识别的抗原为 5 0ku的蛋白 ,此蛋白为精子顶体反应发生过程中的关键蛋白之一 ,可能成为免疫灭鼠与免疫避孕的候选疫苗     

小鼠精子睾丸后成熟过程中单克隆抗体MSH27抗原表位的显露

MSH2 7是一株抗小鼠精子的单克隆抗体 ,此抗体及其纯化的抗原分子在体外受精实验中均可以阻止精卵膜融合 ,因而推测其抗原在精卵膜融合过程中具有重要的作用 .这里探讨了抗原分子在精子睾丸后成熟过程中MSH2 7识别表位的显露条件 .MSH2 7抗原分子在睾丸中产生 ,定位于精子顶体后区的质膜上 ;但MSH2 7所识别的抗原表位只在顶体反应后的精子上表露 .在受精过程中 ,精子必须完成顶体反应并穿过卵子的透明带才能接近卵子质膜并与之融合 .同时还研究了顶体反应和穿透明带作用对MSH2 7表位显露的影响 .在附睾成熟过程中 ,随着精子在附睾中的转运 ,它们发生顶体反应的能力不断增加 ;精子抗原表位的显露呈现顶体反应依赖性 ,且两者呈现线性回归关系 .钙离子载体A2 3 187诱发顶体反应后 ,MSH2 7染色阳性的精子远远少于顶体反应的精子 ;但穿过透明带后绝大多数精子 ( 98% )呈现MSH2 7染色阳性 .总之 ,在睾丸后成熟 (附睾成熟、获能、顶体反应 )和精子穿透明带的过程中 ,对整个精子群体来讲 ,单抗MSH2 7所识别的抗原表位的显露和精子最终获得穿入卵子质膜的能力是同步发生的 .