粒子枪促进土壤杆菌介导的转化

Pioneer Hi-Bred的科学家D.Bidney及其同事们发现,在用根癌土壤杆菌转化植物组织之前,对该组织进行微弹轰击,可促进转化作用。Bidney的研究小组用钨粒子轰击烟草叶和向日葵顶端分生组织,然后用含GUS或卡那霉素抗性基因的根癌土壤杆菌处理。他们发现,与未经轰击的组织相比,前粒子轰击能提高转化频率。在产生卡那霉素抗性的集落中,对烟草叶进行微弹轰击和土壤杆菌的转化作用相结合至少比只用包有DNA的粒子轰击进行直接转化要有效100倍。在向日葵分生组织衍生的植株中可观察到相似的结果。     

农杆菌介导法与基因枪轰击法结合在植物遗传转化上的应用

根癌农杆菌介导法(Agrohacterium mediated transformation)和基因枪轰击法( particle bombardment transformation)是植物遗传转化的主要方法。两种方法各有优缺点．农杆菌介导法是一种天然的植物遗传转化系统,外源基因在转基因植物中的拷贝数低,遗传稳定性好;基因枪转化法不受材料基因型的限制。通过结合两种方法的优点,发展了3种农杆菌介导和基因枪轰击法相结合的遗传转化方法,分别为农杆枪法、基因枪轰击／农杆菌感染法、金粉或钨粉包裹菌体细胞作为微弹轰击法。对3种结合转化方法的技术途径、原理、转化受体及研究进展等方面进行了综述。     

植物遗传工程

923408利用体细胞和分子技术进行豆科植物的遗传改生〔英〕/Kumar,V.…了EuPhytiea一1991,55 (2)。一157~169〔译自DBA,1992,11(5),92一02702」 就饲料和谷粒豆科植物的遗传改良讨论了包括土壤杆菌介导转化,基因直接转移及原生质体融合的体细胞技术的优点和局限性。讨论主题为:用根癌土壤杆菌或发根土壤杆菌作载体将基因转移至豆科植物,基因直接转移(微注射、PEG一介导原生质体转化、电激和微弹轰击),体细胞杂交。与其它科(如茄科)比较,豆科植物方面的进展有限,”但很多豆科植物(如百脉根属和首藉属)适于组培的事实使体细胞技术以这些品…     

微弹轰击介导转化

渗透压处理促进基因枪介导转化 瑞典农业科学院D.Clapham及其同事研究发现,在微弹轰击前后用渗透处理挪威云杉胚性细胞悬浮培养物可使轰击转移及报道基因表达提高3～20倍。0.25M肌醇或蔗糖对轰击一天后表达率的促进效应比甘露醇 山梨醇约高2倍。脱落酸提高肌醇的效应。轰击10天后测定发现,细胞保存在含有肌醇的培养基上可使基因表达率提高5～12倍,且对生长及其形态学无副作用。     

1987年国外农业生物技术的研究进展

美国康乃尔大学研制了一种类似鸟枪的发射器,采用高速微弹将核酸注入植物细胞中.他们利用这种方法使烟草花叶病毒(TMV),的RNA和编码氯霉素乙酰转移酶(CAT)的DNA射入洋葱组织中,并得到了表达。这种方法能够用于多种植物细胞,也可有效地用于哺乳动物细胞,由此避免了根癌土壤杆菌的寄主范围的限制性以及从原生质体再生植株的困难。同时它一次能转化大量细胞,突破了微注射法一次仅能转化一个细胞的局限。     

花生基因工程

建立花生遗传转化和高效植株再生系统是花生基因工再生技术和基因转化体系的完善,已获得抗病、抗虫和提高品质的转基因花生植株,取得了突破性进展.农杆菌介导法和微弹介导法是花生基因工程的主要方法.     

向日葵遗传转化研究进展

综述了PEG、基因枪和农杆菌介导的转化方法应用于向日葵遗传转化研究所取得的进展,并对影响向日葵遗传转化效率的因素和研究前景进行了探讨。     

将抗真菌病基因导入马铃薯的研究

实验采用微束激光穿刺技术和农杆菌介导方法,将携带有Ⅰ型烟草β－１,３－葡聚糖酶基因和Ⅰ型菜豆几丁质酶基因的ｐＢＬＧＣ质粒导入马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ Ｌ．）品种“津引８号”。微束激光穿刺技术转化中,获得了７株卡那霉素抗性再生苗,分子检测证明,其中有１株为菜豆几丁质酶基因单基因转化植株。在农杆菌介导方法中得到了１３株卡那霉素抗性再生苗,其中有３株为烟草β－１,３－葡聚糖酶基因单基因     

根癌农杆菌介导转化番茄的影响因素

综述影响根癌农杆菌介导番茄转化效率的因素,包括根癌农杆菌菌株类型、Vir基因的活化、选择标记基因、植物基因型、外植体类型、培养基中是否附加植物激素和抑菌抗生素、菌液浓度、侵染时间长短,是否预培养和共培养天数等;同时不同的培养方式也是影响番茄转化效率的主要因素,包括液体培养法、农杆菌介导的floral-dip转化法、超声波辅助农杆菌介导法、农杆菌介导与基因枪轰击结合法等.     

植物遗传工程

923780经微弹介导的转化获得转基因拟南芥〔英〕/Seki,M.了Appl.Mierobiol。Biotechnol一1991,36(2)。一225~230〔译自DBA,1992,11(7),92一03859〕 描述了用气动微弹枪获得拟南芥(A,。沉d。夕-。￡5 thal艺ana)基因型C24稳定转化体的方法。在金粒上包被嵌合质粒pCaMVEO(含nPt一n基因),在下述条件下用微弹轰击根切段:加速压力Zookg/em“,样品一终止器距离ioem;4产9 DNA/mg金粒(1~3声m);减压为60mm Hg。经轰击的根段在含20mg/1 Kn的培养基上培养31天后形成绿色卡那霉素(Kn)抗性愈伤。每4~7天将此愈伤转至含lomg/1 Gn(genetiein)的。…     

基因枪的使用方法介绍

基因枪法是一种新型的遗传转化手段[1-3]。所谓遗传转化是指通过某种途径或技术将外源基因导入受体细胞的基因组中,并使之在受体细胞中表达。人们可利用一个特定的目的基因,如抗虫、抗病基因等进行转化,使转基因植物在保持原有的各种优良农艺性状的同时,又能增加新的目的基因所控制的性状。一般遗传转化主要有两类：一类是农杆菌介导法,一类是DNA直接转化法。DNA直接转化技术包括化学方法和物理方法,如电击、微注射、超声波和基因枪法。基因枪法,又称生物弹法或微粒枪法、微粒轰击法,是依赖高速度的金属微粒将外源基因引入活细胞…     

用微弹轰击法将GUS基因导入小麦的完整细胞

微弹轰击法将外源DNA导入小麦(Triticum,aestivum)未成熟胚和悬浮细胞系的完整细胞。用pCI GUS作报告基因,质粒DNA涂于钨粉微弹表层,用基因枪轰击使微弹穿透细胞壁进入小麦细胞。处理2天后,用x—glucuronide染色,对GUS基因产物的活性进行鉴定,GUS基因表达的细胞呈深蓝色的小点。小麦幼胚表面的蓝点最多可达40～50个,悬浮细胞系中GUS基因表达的细胞较少。试验表明微弹轰击法是小麦组织水平上进行外源基因导入的一个有效途径。试验对微弹轰击的有关参数及条件进行了讨论。     

文摘

02 0 0 0 1根癌农杆菌介导的甘蓝高效稳定的遗传转化系统的建立及对ＣｐＴＩ基因转化的研究 [中 ]/张七仙… / /农业生物技术学报 .- 2 0 0 1,9(1) .- 72～ 76通过对影响根癌农杆菌转化的多种因素的比较和探索后 ,建立了一种以农杆菌介导的高效和稳定的甘蓝遗传转化系统。选择目前在生产上大量推广应用的 6个优良甘蓝品种 ,用其无菌苗的下胚轴作为外植体 ,经农杆菌ＬＢＡ44 0 4(含质粒 ｐＢｉｎ -ＴＩ - 19- 2 )感染 ,在含卡那霉素 5 0ｍｇ/Ｌ的抗性培养基上筛选 ,80 %的外植体表现出抗性 ,形成愈伤组织并进一步分化成苗。每块愈伤组织最低…     

根癌土壤杆菌转化水稻研究进展

就根癌土壤杆菌介导的水稻基因转化的研究现状,影响转化的一些因素和利用根癌土壤杆菌转化水稻的一些应用作一综述,并对目前根癌土壤杆菌介导水稻基因转化中存在的问题及解决办法作出评价。     

农杆菌属介导的植物细胞遗传转化研究现状

自20实际70年代末提出农杆菌属介导产生转基因植物以来,已相继有很多农作物和园艺植物被农杆菌成功转化。在一些发达国家已有大量种植的转基因经济作物如玉米、大豆、棉花、马铃薯、番茄等。但越来越多的经济作物以及园林树木和园艺植物对粒子轰击等转化方法无效或效果不佳,因而农杆菌因其介导的遗传转化率较高就越来越受到重视。但是,农杆菌介导的转基因在表达稳定性和可预见性方面仍然存在诸多问题。本文介绍了有关农杆菌分子生物学的基础研究及提高农杆菌介导的遗传转化效率的研究进展。     

抗菌肽基因转化樱桃矮化砧木获得抗根瘤病的转基因植株

建立了樱桃（PrunuspseudocerasusLindl．）矮化砧木茎尖高频再生系统,并利用根癌土壤杆菌（Agrobacteriumtumefaciens（SmithetTownsend）Conn）介导将gus及抗菌肽基因导入樱桃矮化砧木,获得19个转化株系。经Southernblot检测证明,抗菌肽基因已整合到樱桃的基因组。转基因植株接瘤实验、gus基因表达产物的颜色反应及叶片提取液对根癌土壤杆菌C58的抑菌实验表明,抗菌肽基因在转化植株中可能已得到有效表达,试管苗具有明显的抗根瘤病特性。还研究了茎尖分生组织的种质转化特点,结果表明它是一个较好的转化系统,可获得较高的转化频率。     

通过基因枪提高根癌土壤杆菌转化水稻的效率

携带普通双元载体的根癌土壤杆菌（Ａgrobacterium tumefaciens (Smith et Townnsend)Conn)EHA105菌株对粳稻（Oryza sativa L.ssp.japonica)中花８号不敏感,转化效率较.在因枪将根癌土壤菌细胞直接轰击到水稻愈伤组织中可以显提高其转化效率。Ｓouthern检测证明转基因植物含有单拷贝的外源基因插入片段,转基因植物后代的ＧＵＳ基因表达呈３：１分离。     

向日葵籽粉在食品工业中的开发利用

美国北达科他州立大学谷物科学和食品工艺系科学家Hettiarachchy最近说,她利用向日葵籽粉制造了一种类似于豆腐原料——豆浆的乳状浆液。她还从向日葵籽粉中分离出一种蛋白,这种蛋白的乳化性能和形状稳定性能都很好。此外,她还将向日葵籽粉和向日葵籽蛋     

植物遗传转化的替代方法及研究进展

农杆菌介导法和基因枪法是两种目前应用最广泛和最可靠的植物遗传转化方法.由于其存在一些不足,因此,需要探索可替代它们的其他植物遗传转化方法以弥补农杆菌介导法和基因枪法的缺点,使其更加适用于特定目标植物的转化事件中,转化效率也随之提高.对这些可替代的遗传转化方法进行概述,并简要介绍各种方法的优缺点及其在农作物转化中的应用情况.     

根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究进展

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化是近年来发展的一种新方法 ,与其它方法相比 ,该方法具有操作简便、转化效率高和易得到稳定转化子等特点。目前 ,在根癌农杆菌介导下已实现了多个属种真菌的遗传转化 ,显示出良好的应用前景。综述了根癌农杆菌介导真菌遗传转化的转化机理和T DNA在真菌细胞中的存在方式等方面的研究结果 ,并展望这一方法的应用前景。