两种方法制备的脑组织切片激光共聚焦显微镜成像效果的比较研究

该文比较研究了振动切片法与冰冻切片法制作的脑组织切片的质量及其激光共聚焦显微镜成像的效果。振动切片法通过灌流固定、取小鼠脑、琼脂糖包埋后利用振动切片机连续冠状切片。冰冻切片法通过蔗糖脱水、OCT包埋液氮骤冷后利用冰冻切片机连续冠状切片。制备的脑组织切片进行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察成像效果。结果表明,与冰冻切片相比,振动切片法简单快速,且制片质量较高,脑组织切片无冰晶形成,抗原免遭破坏,组织结构较完整,更适用于脑组织样品的激光共聚焦显微镜的成像观察。     

微波处理修复抗原后免疫组织化学方法效果的比较研究

冰冻切片经微波处理进行抗原修复后,免疫组织化学方法的敏感性明显提高,显色效果明显增强。提出了冰冻切片在免疫组织化学显色前进行抗原修复的必要性     

胶体金免疫电子显微技术用于病毒抗原的检测

本文报道了一种改良的胶体金免疫电镜技术:以低温包埋,常规超薄切片代替超薄冰冻切片,成功地显示了细胞内的病毒抗原定位。     

冰冻切片制作体会及常见问题

目的:探讨冰冻切片制作过程中的影响因素及改进措施,提高切片质量,确保实验结果科学性、稳定性及可靠性.方法:从标本的取材、制片以及固定等多个环节阐述冰冻切片常见问题.结果:通过调整切片机的相应设置并且在冰冻切片多个环节中采取了相应措施,使切片更完整,厚薄均匀,无脱片和冰晶空洞现象产生,切片质量优良.结论:制作出高质量的冰冻切片需在取材处理、切片、固定等诸多环节上精益求精,这对冰冻切片这一专业性很强的实验技术的质控有着重大意义.     

一种新颖的抗原信号增强方法─BT法在免疫组织化学中的应用

本文报道了一种新颖的抗原信号增强方法在免疫组织化学中的应用。该方法的特点是利用生物素标记的酪氨（ＢＴ）结合到ＨＲＰ的催化位点上来达到增强信号的目的。本研究以冰冻切片及石蜡切片中ＡＢＣ法为对照,结合微波和蛋白酶消化预处理,采用ＢＴ法检测了人扁桃体石蜡切片标本中淋巴细胞ＩｇＤ的表达。结果表明该方法检测敏感性高,当一抗稀释至１：５０００时仍能测得ＩｇＤ的表达,与对照的ＡＢＣ法相比,检测敏感性成百倍地提高。该方法能将原先只能用于冰冻切片的单抗ＩｇＤ应用于石蜡切片中。本文还对该方法的可能机制进行了探讨。本研究提示ＢＴ法在病理检验和医学研究中有良好的应用前景。     

一种改良的BrdU免疫组织化学染色抗原热修复技术

目的：探索一种简单有效的行BrdU免疫组织化学染色抗原热修复的方法。方法：本实验探索了三种抗原热修复方法：1）漂片煮沸法,2）贴片煮沸法,3）贴片改良法。将贴有冰冻组织切片的玻片置于恒温封闭体系中进行热修复。之后行BrdU免疫组化染色,栗集图像对这三种热修复方法进行比较。针对贴片改良法行BrdU与NeuN、P。CERB和DCX的荧光双标,采集图像以观察该方法在免疫荧光甄标实验中应用的可行性。结果：1）漂片煮沸法脑组织切片在经过热修复处理后,切片卷起皱缩,不能进行后续实验步骤;2）贴片煮沸法可见少量BrdU阳性细胞,但背景深,且少数脑片起泡,假阳性现象严重;3）贴片改良法B-U免疫组化及与NeuN、P-CERB和DCX的免疫荧光双标染色背景浅,阳性细胞明显。结论：采用改良的热修复法能充分暴露BrdU抗原,DAB显色及免疫荧光染色结果理想。此方法为一种较好的行BrdU免疫组织化学染色抗原热修复方法。     

各种癌基因蛋白微波抗原修复免疫组织化学检测的研究

本研究对1555例各种肿瘤组织标本进行微波辐射(MWI)抗原修复免疫组织化学染色,检测了14种癌基因蛋白产物.并同时选择部分标本分别作冰冻切片,常规石蜡切片进行抗原修复与不修复的对比研究.结果,经MWI抗原修复后p53(PAb1801,PAb-240,PAb-420,DO-7),p185,Rb,C-fos,C-myc,Ki-67(R),EGF,EGFr,TGFβ和Bcl-2阳性检测率明显提高(P≤0 05),而p53(CM-1),PcNA p21和nm23/NDPK经MWI抗原修复与不修复结果一致,说明有部分抗原不用修复和其他处理.另一部分抗原仅表达在冰冻切片上,如Ki-67和Ki-1单克隆抗体,经修复也无阳性表达.本文中对消化、消化与抗原修复相结合及高压处理切片的IH染色也进行了对比研究,对他们处理切片存在的优缺点也一一作了详说.     

冰冻切片中用糊精对小昆虫上样

冰冻切片中用糊精对小昆虫上样冰冻切片法独特而简便。有节省时间,不改变组织和细胞形态,能保存脂肪、类脂等许多方面的优点,所以冰冻切片法常常被用于组织化学、组织学（尤其是神经组织学）、临床病理等多方面的研究。在操作过程中,对大的样品可以直接冻到样品台上,...     

应用真空负压LSAB法快速显示各种组织相关抗原的研究

应用真空负压ＬＳＡＢ法快速显示各种组织中的相关抗原,无论从时间上,还是从二抗三抗的稀释度,阳性物的显示强度和效果等,都比免疫组化中的其它方法好。冰冻切片和培养细胞片,整个过程需时５０ｍｉｎ左右,石蜡切片全过程需时６０ｍｉｎ左右,如果从抗体的孵育时间讲,则孵育时间仅为产品说明书注明的时间的１／５。稀释度产品说明书注明二抗三抗为１：４００,该法二抗三抗的稀释度为１：８００,如此可增加标记切片的张数,降低成本。根据实验对比,在组织切片含有大量的抗原或抗体时,它与真空负压ＡＢＣ法没有明显差别,在抗原抗体含量少的情况下,真空负压ＬＳＡＢ法就显示出优势,阳性反应物明显比其它方法都强。真空负压ＬＳＡＢ法之所以具有上述的优点,这主要是它不需要提前形成复合物,因此,它的分子量小行动敏捷灵活,对组织的渗透性强。它与生物素的结合点多,加上真空负压的特殊条件,这就使真空负压ＬＳＡＢ法成为需时少,效果好,敏感性高的一种新方法。     

高度木质化材料的冰冻切片技术

高度木质化植物材料的切片难度很大,应用常规切片方法不容易取得高质量的图版。本文介绍的冰冻切片方法,不需要进行长时间的软化处理、以及繁琐的脱水、包埋等过程,切片还进行不同的染色或组织化学测定,是一种快速、简捷和有效的制片方法。 其关键步骤是选好甘油浓度, 冰冻温度和展片步骤。     

杂草果实的冰冻切片技术

介绍一种快速、简便的杂草果实解剖技术。以4种木质化程度高且能够漂浮的杂草果实为材料进行冰冻切片,经过材料固定、前处理、样品冷台固定、冷冻切片、展片、染色和观察并拍照等操作步骤,可以获得清晰的果实解剖照片,直观地揭示杂草果实适应漂浮的显微结构。杂草果实冰冻切片方法的优点是不需要对材料进行长时间的软化处理以及繁琐的脱水和包埋等过程。其关键环节是适宜的甘油浓度、冰冻温度和展片步骤。其中,15%的甘油浓度进行前处理最合适。     

杂草果实的冰冻切片技术

介绍一种快速、简便的杂草果实解剖技术。以4种木质化程度高且能够漂浮的杂草果实为材料进行冰冻切片, 经过材料固定、前处理、样品冷台固定、冷冻切片、展片、染色和观察并拍照等操作步骤, 可以获得清晰的果实解剖照片, 直观地揭示杂草果实适应漂浮的显微结构。杂草果实冰冻切片方法的优点是不需要对材料进行长时间的软化处理以及繁琐的脱水和包埋等过程。其关键环节是适宜的甘油浓度、冰冻温度和展片步骤。其中, 15%的甘油浓度进行前处理最合适。     

适合于植物花器官的冰冻切片技术

通过对4种植物主要花器官冰冻切片技术的各个环节及参数的研究,建立了一种适合于植物花器官的冰冻切片技术,即蔗糖保护-液氮速冻-冰冻切片法。其具体程序是：材料经固定和冷冻保护(蔗糖为冷冻保护剂)后进行速冻包埋(液氮为包埋剂);尔后进行冰冻切片;切片经干燥和染色(或者不染色)后,在显微镜下观察并摄影。此法为植物花器官的细胞生物学和分子生物学研究提供了简便、快速和高效的切片技术。     

一种简单快速植物组织冰冻切片方法

比较不同冷冻方法对植物细胞超微结构的影响,结果表明:直接包埋法处理的植物细胞超微结构保存较好,而液氮冷冻处理的植物细胞内膜系统损伤严重.建立了一种直接包埋冷冻和适当回温相结合的方法,不仅可以制作出植物细胞基本结构保存完整的组织切片,而且避免了使用冰冻保护剂的弊端.其操作程序是:样品固定→冰冻与包埋→适当回温→快速切片→展片→染色.此法制作的切片可进行不同的染色和组织细胞化学测定,具有操作简便,易于推广的特点.     

用亲和素-生物素复合物法研究流行性乙型脑炎病毒感染小鼠中枢神经系统后的抗原定位

利用亲和素-生物素免疫组织化学技术,研究了流行性乙型脑炎(简称乙脑)病毒抗原(P3,A2株)感染小鼠中枢神经系统后的定位。观察到乙脑病毒抗原分布具有一定选择性,主要集中在脑干、小脑、间脑和大脑皮质。病变分布与H-E常规病理染色一致。该方法敏感、特异。同时比较了兔免疫血清与乙脑单克隆抗体的应用效果。对组织化学冰冻切片漂浮法诊断病毒抗原进行了探讨。     

成熟玉米秆组织结构切片方法的比较研究

于玉米成熟期选择健壮茎秆的基部第三节间为材料,采用徒手切片法、冰冻切片法、石蜡切片法、薄切片法等4种方法,比较不同方法的玉米茎秆组织结构切片质量,为研究玉米茎秆结构与其倒伏的关系奠定技术基础。结果表明:徒手切片法是获得成熟玉米秆组织结构切片较为方便、快速的方法,切片面积较大,适合大范围观察统计;冰冻切片法是获得成熟玉米秆组织结构较快的方法,切片面积较小,适合小范围观察;薄切片是获得高质量成熟玉米秆组织结构切片的最好方法,但切片面积太小,适合高倍数显微观察和小范围电镜扫描观察组织结构;石蜡切片不适合作为成熟玉米秆的组织切片方法。研究认为,徒手切片法是最适合成熟玉米秆组织结构观察研究的制片方法。     

EHFV感染家兔后组织脏器的病毒抗原定位及其病理变化

采用流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）１１４株实验感染家兔,用免疫荧光法（ＩＦＡ）及ＰＡＰ双桥法对家兔各脏器组织进行病毒抗原定位,同时将各脏器石蜡切片作常规Ｈ－Ｅ染色,观察受检组织的病理变化。结果表明：家兔在感染后７－１５天中,用ＩＦＡ法在胸腺、心、肺、肝、脾、胰腺、淋巴结、脑、睾丸、卵巢、肾、大肠及小肠中均检出ＥＨＦＶ抗原。用ＰＡＰ双桥法在细胞水平进行病毒抗原定位,发现所有受检组织小血管及毛细血管内皮细胞均为ＥＨＦＶ的原始靶细胞。生殖腺实质细胞病毒抗原阳性,为ＥＨＦＶ的垂直传播提供了实验依据。从肺支气管粘膜内皮细胞、尤其是腔面的纤毛柱状上皮内检出病毒抗原。推测ＥＨＦＶ通过气溶胶造成传播可能是水平传搐的方式之一。病理学初步观察,各脏器组织细胞未发现不可逆的病理损害。     

冰冻切片法在植物微管骨架研究中的应用

介绍了冰冻切片法研究植物微管骨架的一般程序和技术上的一些改进,结果证明,改进的冰冻切片技术,可以对植物不同类型的细胞进行很好的标记。实验结果表明,甘蔗正在迅速伸长的幼叶分布的微管类型主要是与细胞伸长轴方向垂直的周质微管,幼叶基部尤其是第三幼叶基部分布的主要是与细胞伸长轴方向平行的周质微管。表明冰冻切片法在植物微管骨架的研究中具有广阔的应用前景。     

冰冻切片技术在植物显微结构和组织化学中的应用

介绍了冰冻切片法研究植物显微结构和组织化学的一般程序。结果表明,冰冻切片过程简单有效且图版清晰,在1d内可获得高质量图片,解决了利用普通石蜡切片观察植物样品需要进行脱水、浸透、包埋操作且耗时长的问题,在植物显微结构和组织化学研究中具有广阔的应用前景。     

56 例卵巢上皮性交界性肿瘤的临床和病理分析

目的:探讨卵巢交界性上皮肿瘤(OBT)的临床及病理特征,以供临床和病理借鉴。方法:收集病理快速冰冻切片和石蜡切片确诊的交界性上皮性卵巢肿瘤患者56例,术前均行超声检查及CA125测定。结果:56例OBT中以粘液性肿瘤最多,为33例,占58.9%,浆液性肿瘤23例占41.1%。其中以Ⅰ期多见,手术包括保守性手术治疗交界性肿瘤,预后良好。冰冻切片诊断卵巢交界性上皮肿瘤的总体准确率为64.2%。结论:诊断OBT需根据临床症状、肿瘤标记物及影像学综合判断,术中冰冻切片检查有一定帮助,但最后诊断还是应主要依据病理切片。为提高快速冰冻切片诊断的准确率,应做连续切片。