楤木根皮多糖硫酸酯的制备、结构表征及抗氧化活性的研究

该研究以产自甘肃徽县太白乡的楤木根皮多糖(ACP)为材料,通过氯磺酸-吡啶法(CSA-Py)合成了楤木根皮多糖硫酸酯(SACP)。通过响应面(RSM)实验确定的最佳反应条件:CSA/Py为2.53,反应时间为5.23 h,反应温度为61.25℃,DS理论最大值为0.57。通过红外光谱分析(FT-IR)、X射线光电子能谱(XPS)对产物进行表征,SACP结构中已引入硫酸基团,S以S~(6+)形式存在。气相色谱-质谱联用法(GC-MS)检测显示,SACP由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成。采用体积排阻色谱-激光光散射联用法(SECLLS)测得的平均分子量(Mw)显示,酸性反应导致Mw降低。体外抗氧化活性发现,SACP有极好的清除O_2~-·的能力,有较好的清除DPPH自由基、·OH自由基的能力,还原力很强,对Fe~(2+)有较好的螯合能力,具有浓度依赖性。从构效关系来看,清除DPPH自由基、·OH自由基、O_2~-·自由基以及还原力的能力均与DS呈正相关。上述研究表明了ACP及SACP的化学结构以及化学修饰对ACP抗氧化活性的影响。     

Catalytic synthesis and antioxidant activity of sulfated polysaccharide from Momordica charantia L.

Sulfated derivatives of polysaccharide from Momordica charantia L. (MCPS) with different degree of sulfation (DS) were synthesized by chlorosulfonic acid method with ionic liquids as solvent. Fourier transform infrared spectra and ¹³C nuclear magnetic resonance spectra indicated that C‐6 substitution was predominant in MCPS compared with the C‐2 position. Compared with the native polysaccharide from Momordica charantia L. (MCP), MCPS exhibited more excellent antioxidant activities in vitro, which indicated that sulfated modification could enhance antioxidant activities of MCP. Furthermore, high DS and moderate molecular weight could improve the antioxidant activities of polysaccharide. © 2013 Wiley Periodicals, Inc. Biopolymers 101: 210–215, 2014.     

Focus on antivirally active sulfated polysaccharides: from structure-activity analysis to clinical evaluation

In recent years, many compounds having potent antiviral activityin cell culture have been detected and some of these compoundsare currently undergoing either preclinical or clinical evaluation.Among these antiviral substances, naturally occurring sulfatedpolysaccharides and those from synthetic origin are noteworthy.Recently, several controversies over the molecular structuresof sulfated polysaccharides, viral glycoproteins, and cell-surfacereceptors have been resolved, and many aspects of their antiviralactivity have been elucidated. It has become clear that theantiviral properties of sulfated polysaccharides are not onlya simple function of their charge density and chain length butalso their detailed structural features. The in vivo efficacyof these compounds mostly corresponds to their ability to inhibitthe attachment of the virion to the host cell surface althoughin some cases virucidal activity plays an additional role. Thisreview summarizes experimental evidence indicating that sulfatedpolysaccharides might become increasingly important in drugdevelopment for the prevention of sexually transmitted diseasesin the near future.     

奶油绚孔菌菌丝多糖的提取及其抗氧化活性

为了获得奶油绚孔菌菌丝多糖的最佳制备工艺并进一步评估其体外抗氧化的作用,本研究以奶油绚孔菌菌丝作为原料,采用中心组合试验法结合响应面分析法对奶油绚孔菌菌丝多糖的提取条件进行优化。结果表明,最佳的提取工艺为：料液比1:32、提取时间1.85 h和提取温度85 ℃,奶油绚孔菌菌丝多糖在此提取工艺条件下的得率为5.68%。奶油绚孔菌菌丝多糖对DPPH、ABTS和羟基自由基有清除能力,其EC₅₀分别为3.74、3.80和15.10 mg/mL。奶油绚孔菌菌丝多糖呈现出一定的还原能力。由此可知,奶油绚孔菌菌丝多糖具有一定的体外抗氧化作用,该研究能够为奶油绚孔菌菌丝多糖的进一步综合开发提供理论支持。     

Effect of (1-->3)- and (1-->4)-linkages of fully sulfated polysaccharides on their anticoagulant activity

Chemically fully sulfated polysaccharides including xylan (-->4Xylbeta-(1-->4)Xylbeta1-->), amylose (-->4Glcalpha-(1-->4)Glcalpha1-->), cellulose (-->4Glcbeta-(1-->4)Glcbeta1-->), curdlan (-->3Glcbeta-(1-->3)Glcbeta1-->) and galactan (-->3Galbeta-(1-->3)Galbeta1-->), which have been isolated from Korean clam, were prepared, and their anticoagulant activity was investigated. The results strongly suggest that the activity might not be depending on anomeric configuration (alpha or beta) or monosaccharide species but on the glycosidic linkage, either (1-->3) or (1-->4). 1H NMR studies of these modified polysaccharides show that the neighboring sulfate groups at the C-2 and C-3 positions might have caused the conformational changes of each monosaccharide from 4C(1) to 1C(4). Furthermore, the effect of 6-sulfate residues on the anticoagulant activity was investigated using a specific desulfated reaction for the chemically fully sulfated polysaccharides. The 6-sulfate group is very important in determining anticoagulant activity of (1-->3)-linked polysaccharides, whereas the activity is not affected by presence or absence of the 6-sulfate group in (1-->4)-linked polysaccharides.     

奶油栓孔菌菌丝体多糖的提取工艺优化、结构表征及抗氧化活性

奶油栓孔菌Trametes lactinea是一种生物活性丰富的大型真菌。本研究在单因素试验的基础上,通过响应面法优化其菌丝体多糖的提取工艺,利用DEAE-Cellulose-52阴离子交换柱和Sephadex G-200层析柱对粗多糖进行分离纯化,获得TLMPS-0、TLMPS-1和TLMPS-3均一多糖组分。采用化学组成分析、UV-vis、FTIR、刚果红实验对3种多糖组分进行结构分析,并检测了多糖清除自由基的能力和还原力。结果表明,奶油栓孔菌菌丝体多糖最优提取工艺为：提取温度99℃、料液比1:30 (g/mL)、提取时间5h,提取次数2次。在此工艺条件下,多糖提取率为4.01%。TLMPS-0、TLMPS-1和TLMPS-3的糖醛酸含量分别为12.91%±0.44%、8.24%±0.22%、7.50%±0.66%,硫酸基含量分别为22.24%±1.88%、14.55%±0.56%、18.68%±0.69%,并且证明TLMPS-0是一种α-吡喃型多糖或β-吡喃型多糖,而TLMPS-1是一种β-吡喃型多糖,均不具备三螺旋空间构象,此外,3种多糖组分均具有一定的清除DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的能力和铁离子还原能力,其中TLMPS-0抗氧化活性最强。研究结果为奶油栓孔菌多糖的功能研究与挖掘提供了研究基础与理论依据。     

狭果茶藨子果实多糖提取及其抗氧化和流变特性

以狭果茶藨子果实为原料,多糖提取量为考察指标,通过单因素试验及响应面试验对多糖提取工艺进行优化,结果表明最佳多糖制备工艺条件为:提取温度40℃,时间30 min,料液比1∶30 g/mL,此时狭果茶藨子中多糖提取量达115.32 mg/g;流变学特性研究表明狭果茶藨子果实多糖溶液属于非牛顿流体,多糖溶液表现出剪切稀化的现象,当多糖质量浓度为1.0%时,其流变学特性与0.1%的羧甲基纤维素钠溶液相似,且过酸、过碱的环境均不会改变狭果茶藨子果实多糖溶液的流变学特性;抗氧化试验结果表明狭果茶藨子果实多糖具有潜在的抗氧化能力,对DPPH自由基的清除能力低于抗坏血酸,而对羟自由基的清除能力显著高于抗坏血酸。本研究结果可为狭果茶藨子果实多糖在食品领域的开发利用提供理论依据。     

绣球菌多糖表征及其抗氧化和免疫活性

提取纯化绣球菌多糖(Sparassis latifolia polysaccharides,SCPs),研究其表征和功能活性,探索绣球菌多糖表征与其抗氧化及免疫活性之间的关系。以绣球菌子实体为原料,采用聚能超声波辅助水提醇沉法提取绣球菌多糖,经DEAE-52、SephadexG-100纯化,用高效凝胶渗透色谱法、离子色谱法、傅里叶红外色谱法、扫描电镜、原子力显微镜对绣球菌多糖进行初步表征,检测绣球菌多糖清除DPPH、·OH、O2^-·自由基能力以及总还原力,用MTT法检测绣球菌多糖对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响。结果表明,SCPs分子量范围为215Da–393kDa,由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、果糖构成,摩尔比13:4:1:2:3,其表观形貌为簇状堆积,交织,结构规律性不强,表面光滑,呈一定的网络状结构,分子呈现链状构象,具有高度的分支结构,链间形成小环且伴随一定的球形颗粒。SCPs具有一定的还原能力和清除DPPH、·OH、O2^-·自由基的能力,且能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖。绣球菌多糖的抗氧化及免疫活性可能与其分子量、单糖组成、糖链分支及分子构象有关。     

平菇菌粗多糖的抗氧化活性研究

采用深层发酵技术生产平菇粗多糖,时其清除DPPH自由基、羟自由基的能力、铁离子螯合能力以及还原力进行了比较分析。结果表明：菌丝体粗多糖和发酵液粗多糖均具有较强的抗氧化能力,但2种多糖的抗氧化能力存在差异;茵丝体粗多糖清除DPPH自由基的能力较强,其EC。。值为2．20mg／mL;发酵液粗多糖清除羟自由基的能力、铁离子螯合能力以及还原力较强,其EC50值分别为0．72mg／mL、3．32mg／mL和7．91mg／mL。在一定的浓度范围内,多糖的浓度增加,其抗氧化能力也随之增强,呈量效依赖关系。     

南瓜多糖衍生物的制备及其抗氧化研究

对超声辅助法提取的南瓜粗多糖,进行化学改性得到了硫酸化南瓜多糖和羧甲基南瓜多糖。用邻苯三酚自氧化法检测对超氧阴离子自由基的清除作用,用邻二氮菲-金属铁离子-H2O2体系检测对羟自由基的清除作用。结果表明,南瓜多糖对超氧阴离子自由基无抑制作用,经化学改性后的羧甲基南瓜多糖和硫酸化南瓜多糖对超氧阴离子自由基有明显抑制作用,最大清除率达44％和41．67％。以上3种多糖均能有效清除·OH,随着浓度的增加清除作用加强,最大清除率可达46．49％,22．61％和42．35％0。结果显示,经化学改性后的南瓜多糖有较强的抗氧化作用。     

龙须菜中溴过氧化物酶的分离纯化及酶学性质分析

对中国北方海域江蓠属养殖龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)进行了溴过氧化物酶分离纯化及性质的研究。粗提液中酶催化检测反应不稳定, 活力单位较低或无; 经DEAE cellulose 52离子交换层析, 去除了结构多糖及藻胆蛋白, 酶催化反应稳定, 得到比活力为2.8的电泳纯溴过氧化物酶。对纯化溴过氧化物酶性质研究表明: 该溴过氧化物酶为单体酶, 分子量约66 kD, 溴化单氯双甲酮时的最适pH值为6.0, 在40°C以下和pH 3.0~9.0之间有很好的稳定性。钒酸盐可提高该溴过氧化物酶的催化活性, 而Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+和EDTA等化合物对其有较显著的抑制作用。反应动力学实验表明, 该酶对Br-、H2O2的Km分别为53.5 mmol/L和38 mmol/L。     

龙须菜中溴过氧化物酶的分离纯化及酶学性质分析

对中国北方海域江蓠属养殖龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)进行了溴过氧化物酶分离纯化及性质的研究。粗提液中酶催化检测反应不稳定, 活力单位较低或无; 经DEAE cellulose 52离子交换层析, 去除了结构多糖及藻胆蛋白, 酶催化反应稳定, 得到比活力为2.8的电泳纯溴过氧化物酶。对纯化溴过氧化物酶性质研究表明: 该溴过氧化物酶为单体酶, 分子量约66 kD, 溴化单氯双甲酮时的最适pH值为6.0, 在40°C以下和pH 3.0~9.0之间有很好的稳定性。钒酸盐可提高该溴过氧化物酶的催化活性, 而Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+和EDTA等化合物对其有较显著的抑制作用。反应动力学实验表明, 该酶对Br-、H2O2的Km分别为53.5 mmol/L和38 mmol/L。     

蔓三七茎多糖理化性质及抗氧化和免疫调节研究

为提取蔓三七茎中的多糖及研究它的理化性质并评价其抗氧化、免疫调节活性,以蔓三七茎为原料,采用水提醇沉法获得蔓三七茎粗多糖(GPSCP),先测定了粗多糖的含量、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白质含量。再采用Sevage试剂和透析法对蔓三七茎粗多糖进行纯化,得到蔓三七茎多糖(GPSP)。采用气相色谱法测定GPSP中单糖组分和红外光谱测定多糖的结构,通过总抗氧化能力、DPPH自由基、OH自由基的清除能力评价GPSP的体外抗氧化能力;通过体外实验评估GPSP对RAW264.7巨噬细胞免疫调节活性。结果表明,所得GPSCP的得率为15.56%,总糖含量为52.32%;GPSP的得率为8.67%,含量为78.54±2.13%;GPSP中单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为1.69∶4.64∶9.17∶1.00∶1.92∶4.85。体外抗氧化实验结果表明,GPSP具有良好的抗氧化能力,对总抗氧化能力、DPPH和OH自由基清除效果明显。GPSP可显著提高RAW264.7细胞内一氧化氮(NO)的浓度,在给药浓度为50.0μg/mL时,NO的分泌量达到最大,为39.28±3.25μmol/L,GPSP可以提高免疫力,在功能食品的开发中,可以作为一个潜在的免疫调节剂。     

奶油栓孔菌子实体多糖的理化性质、抗氧化活性与保肝作用

本研究旨在探讨奶油栓孔菌子实体多糖（TLFPS）的化学性质和酒精性肝损伤的保护作用。首先用水提醇沉法提取得到多糖,通过化学组成分析、紫外吸收光谱法、傅里叶红外光谱法和刚果红染色法对多糖结构进行初步表征,以DPPH、ABTS、超氧阴离子自由基的清除能力和铁离子还原能力为指标评价了多糖体外抗氧化能力,在小鼠急性肝损伤之前连续灌喂多糖8d,比较各组小鼠血清和肝的相关生化指标以及组织病理切片来确定多糖对酒精性肝损伤小鼠的保护作用。结果显示：多糖具有β-吡喃糖环结构,含有较高含量的糖醛酸和硫酸根基团,空间构型不具备三股螺旋结构。在体外抗氧化活性方面,多糖对DPPH、ABTS和超氧阴离子自由基均有良好的清除活性,铁离子还原能力也呈良好的剂量依赖性。在小鼠保肝实验中,与模型组相比,多糖能够显著延长小鼠的醉酒时间和缩短醒酒时间,降低了酒精性肝损伤小鼠的肝指数,并且显著降低血清中谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）和肝脏中丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量,同时明显提高了肝脏中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）的活性。结果证实奶油栓孔菌子实体多糖具有良好的抗氧化能力,可以减轻由酒精引起的急性肝细胞损伤,而且对机体的毒害作用很小。肝组织病理切片也进一步证实了奶油栓孔菌多糖的保肝活性。研究结果不仅丰富了奶油栓孔菌的药用价值,而且对多糖在功能食品领域的应用提供了药效基础。     

皱皮木瓜多糖的分离、纯化及抗氧化活性研究

为了研究木瓜多糖的提取、分离、纯化与抗氧化活性,采用水提醇沉法提取皱皮木瓜中的多糖,得多糖Ⅰ;利用Sevag法除去多糖中的蛋白质后得多糖Ⅱ;以30%H_2O_2脱除色素后再次醇沉得到精制多糖Ⅲ;透析除去小分子后利用AB-8大孔树脂进行分离以水、30%、50%、70%和95%乙醇洗脱,其中水洗脱部分多糖为Ⅳ。用苯酚-硫酸法测定多糖含量。多糖Ⅰ得率为9.83%,多糖含量(纯度,下同)为64.45%;脱蛋白后多糖Ⅱ中多糖含量为78.23%;经脱色后多糖Ⅲ含量达88.39%;大孔树脂水洗脱部分多糖Ⅳ含量为89.74%。以DPPH(2,2-二苯基-1-苦肼基)清除率和Fe~(3+)还原力方法测定木瓜多糖的抗氧化活性,木瓜多糖均体现出一定的抗氧化作用,呈浓度依赖性增强,其中多糖Ⅰ、Ⅱ表现出更好的作用。     

季也蒙假丝酵母胞外多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

对一株源于海参肠道的季也蒙假丝酵母产胞外多糖进行分离纯化并对其抗氧化活性进行研究.采用乙醇沉淀、Sevag除蛋白等方法得到胞外粗多糖EPS.EPS经Sepharose强阴离子交换层析分离后,分别得到3个组分EPS1、EPS2和EPS3,对抗氧化活性较高的EPS2采用Sephacryal凝胶过滤层析进行纯化,得到1个单一组分EPS2-1,采用气相色谱法分析其单糖组成,并验证其抗氧化活性.结果表明:EPS2-1是由木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的;它具有较强的抗氧化活性,当其浓度为0.36 mg/mL时,对羟基自由基的清除率可达100％,明显高于同浓度下Vc对羟基自由基的清除率14.42％;当EPS2-1浓度为0.60 mg/mL时,对超氧阴离子自由基的清除率可达53.22％;同时EPS2-1表现出一定的还原力.研究证明该活性多糖具有很好的应用潜力,值得进一步研究开发.     

Inhibition of autonomous human keratinocyte proliferation and amphiregulin mitogenic activity by sulfated polysaccharides

Summary We previously demonstrated that human keratinocyte cultures proliferate in the absence of polypeptide growth factors (autonomous growth) and that this autonomous growth is blocked by interaction of heparin with a human keratinocyte-derived autocrine factor (KAF) which we identified as amphiregulin (AR). In the present study, we demonstrate that sulfated polysaccharides other than heparin (low and high molecular weight dextran sulfates) also inhibit the AR-mediated autonomous proliferation of human keratinocytes. Furthermore, sulfated polysaccharides such as high and low molecular weight dextran sulfates, heparan sulfate and, to a lesser extent, chondroitin sulfates B and C were also shown to be inhibitors of human keratinocyte-derived AR (k-d AR)-stimulated DNA synthesis in quiescent murine AKR-2B cell cultures. Our results demonstrate that sulfation of polysaccharides is required for AR inhibitory activity, and that several sulfated polysaccharides (other than heparin) can act as inhibitors of AR-mediated autonomous proliferation in human epidermal keratinocytes and as inhibitors of k-d AR-mediated mitogenic activity in AKR-2B cells.     

桑黄粗多糖除蛋白及抗肿瘤活性

旨在研究Sevag法除桑黄粗多糖中蛋白的最佳工艺,并通过噻唑蓝(MTT)细胞比色法测定除蛋白前后桑黄多糖的抗肿瘤活性。在单因素试验Sevag用量、氯仿与正丁醇体积比、萃取次数、震荡时间的基础上,设计正交试验,经过方差分析,确定Sevag法除桑黄粗多糖蛋白的最佳方案;并且对除蛋白后多糖与粗多糖进行体外抗肿瘤实验。Sevag法除桑黄粗多糖蛋白的最佳工艺:Sevag用量50 mL、V(氯仿)/V(正丁醇)=3、最佳萃取次数6次、最佳振荡时间20 min,在此条件下,多糖的得率为64.8%。体外细胞试验表明除蛋白后多糖与粗多糖对肿瘤细胞EC109和SiHa的抑制率没有明显差异。     

海藻多糖的单糖组成对体外抗氧化活性的影响

比较广西北部湾石莼(Ulva lactuca L.)、海带(Laminaria japonica)、裙带菜(Undaria pinnatifida Surin-gar)、紫菜(Porphyra)的单糖组成及抗氧化活性的差异,揭示多糖结构与其体外抗氧化活性的关系。利用PMP柱前衍生化HPLC分析海藻多糖的单糖组成,采用羟自由基清除试验、超氧阴离子自由基清除试验及DPPH自由基清除试验指征其体外抗氧化活性,结果表明,4种海藻多糖的单糖组成在主成分空间分布离散,石莼及紫菜主要由葡萄糖组成,海带主要由甘露糖组成,裙带菜则主要由半乳糖组成;其体外抗氧化活性存在显著差异,裙带菜多糖对DPPH的清除能力(半抑制浓度IC₅₀值为0. 56±0. 02 mg/mL)显著高于其他3种海藻多糖;石莼、裙带菜与海带对羟自由基均有较强的清除活性,而紫菜多糖对羟自由基的清除能力较差(IC₅₀值为26. 59±0. 98mg/mL);石莼与裙带菜对超氧阴离子的清除活性较强,显著高于海带与紫菜,其中石莼显著高于裙带菜,IC₅₀值分别为1. 61±0. 17、2. 73±0. 06 mg/mL。相关性分析及冗余分析结果表明,对抗氧化活性影响较为显著的因子为葡萄糖(Glc)、核糖(Rib)、木糖(Xyl)(P <0. 01)。