百合不同杂交系品种花粉贮藏特性分析

百合花粉贮藏是解决育种过程中花期不遇以及种质资源保存的重要环节,该试验以亚洲百合、东方百合和OT杂种系列的12个品种为材料,筛选出适合大部分品种花粉萌发的培养基及萌发率的观测时间,探讨花蕾发育时期[完全显色(-1级)、2/3显色(-2级)]、花粉收集后处理方式[离心管(处理Ⅰ)、离心管口加棉花(处理Ⅱ)、离心管口加棉花和管底添加干燥剂(处理Ⅲ)]、贮藏温度(常温、4℃、-20℃和-80℃)对花粉活力的影响。结果显示:(1)5%蔗糖+100(150)mg/L硼酸+30(50)mg/L氯化钙为适合大部分品种花粉萌发的液体培养基配方,百合花粉培养24h后测定萌发率为宜。(2)-1级花粉的萌发率比-2级的高且保持生命力的时间更长,如‘Tresor’-1级新鲜花粉的萌发率可达到83.2%,但其-2级只有21%。常温条件最不利于花粉保存,20d时大部分花粉萌发率为0;4℃与-20℃下较利于花粉短期贮藏且差别不显著。(3)经过4℃、120d贮藏,亚洲百合4个品种花粉萌发率最低能保持24.7%,最高能有55.9%左右;2个东方百合品种4℃下花粉萌发率为6.8%～12.7%;花粉在-80℃条件能较长时间保持活力,亚洲百合和东方百合花粉萌发率分别能保持26.7%～61.9%和7.1%～16.2%。(4)各个品种在不同温度条件下,大部分在处理Ⅲ下花粉萌发率较其他两种处理稍高。因此,-80℃结合在离心管口加棉花和管底添加干燥剂(处理Ⅲ)适合百合花粉的长期贮藏。     

海州常山花粉低温贮藏及其生理生化特征研究

以海州常山花粉为研究材料,探究了贮藏方式、贮藏时间、贮藏温度及预冻方式、低温解冻方式对花粉萌发率的影响,以及-80 ℃及4 ℃低温贮藏过程中海州常山花粉保护酶活性和渗透调节物质含量的变化,以筛选海州常山花粉的培养方法及贮藏条件,为其杂交育种奠定基础。结果表明：（1）进行低温贮藏时,花药和散粉两种贮藏效果差异不显著;不同的预冷方式对花粉低温贮藏影响并不显著;-80 ℃贮藏条件下,37 ℃水浴解冻效果显著优于室温解冻。（2）海州常山花粉在-80 ℃低温下贮藏90 d后仍具有7.99%的萌发率,更有效的保持了花粉萌发率。（3）随着低温胁迫时间的延续,4 ℃及-80 ℃两种低温条件下贮藏的海州常山花粉超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化物酶（POD）活性均呈现出先升后降的趋势。（4）4 ℃及-80 ℃两种低温贮藏的海州常山花粉可溶性糖含量及-80 ℃低温贮藏的海州常山花粉可溶性蛋白含量,随着低温胁迫时间的延续,呈现出先升后降的趋势;4 ℃低温贮藏条件下的海州常山花粉可溶性蛋白含量呈现逐渐下降的趋势。研究认为,海州常山花粉更适宜于在-80 ℃低温下长期贮藏,它可以通过提高自身的SOD、POD活性,增加可溶性糖和可溶性蛋白累积来增强抗寒性,维持自身活力。     

唐菖蒲花粉低温保存过程中的生理生化特征

以唐菖蒲切花栽培品种嫦娥粉花粉为实验材料,比较其花粉各项生理生化指标在-80℃和4℃贮藏过程中(360 d)的变化,以探讨2种保存条件下花粉保存效果出现显著性差异的生理生化原因.结果表明:唐菖蒲花粉在2种保存温度条件下,随保存时间的延长,各项生理生化指标表现出显著差异.与4℃保存处理相比,-80℃保存处理抑制了花粉中MDA的积累,增强了超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)的活性,减轻了花粉膜质过氧化和膜系统受伤害程度,同时提高了花粉可溶性蛋白质和可溶性糖的含量,增强了花粉的抗冻能力,从而使低温保存花粉活力维持在相对较高水平,这或许是-80℃条件下花粉保存效果较好的部分生理生化原因.     

二乔玉兰花粉贮存条件的比较研究

探讨了二乔玉兰(MagnoliasoulangeanaSoul.-Bod.)花粉在不同温度和贮存条件下的活力。结果表明:二乔玉兰花粉在5%蔗糖 0.01%硼酸及5%蔗糖 0.1%硼酸两种培养液上萌发较好,萌发率均达到70%以上。随着保存时间的延长,花粉萌发率不断降低,降低速度从快到慢依次为室温、5℃和-20℃。超低温(-196℃)保存花粉的萌发率并没有随着保存时间的延长而降低,液氮保存2a的花粉萌发率达到79.3%,与新鲜花粉的萌发率差异不显著。超低温反复冻存6次的花粉萌发率与新鲜花粉没有显著变化。     

桃品种'八月香'花粉的超低温保存

桃品种‘八月香’的花粉经4℃硅胶干燥8h或(20±1)℃下玻璃化液PVS4(35%甘油 20%乙二醇 0.6mol·L-1蔗糖)处理60min后直接投入液氮保存,解冻后的萌发率都可以达到70%以上,萌发率与保存时间长短无关。     

曼地亚红豆杉‘Hicksii’花粉活力检测条件优化和适宜诸藏温度分析

采用单因素实验设计对适宜于曼地亚红豆杉‘Hicksii’(Taxus media‘Hicksii')花粉活力检测的TTC染色法和离体培养法的实验条件进行了选择,并采用优化条件研究了在25℃～-196℃条件下储藏13周花粉活力的变化.结果表明:采用TTC染色法测定的花粉活力均高于离体培养法.在TTC染色法的3个影响因素(染液pH、TTC浓度和染色温度)中,染液pH对检测结果有极显著影响,而染色温度和TTC浓度则无显著影响,但温度对染色速率有影响.在离体培养法的3个影响因素(培养基中蔗糖添加量、H3BO3和Ca(NO3)2浓度及培养温度)中,蔗糖添加量对检测结果有极显著影响,在含质量体积分数15％蔗糖的培养基上花粉活力最高,而在含质量体积分数20％和25％蔗糖的培养基上花粉均不能萌发;在含100和200 mg ·L-1H3BO3的培养基中添加200 mg·L-1Ca(NO3)2均能显著提高花粉活力;培养温度对花粉萌发速率有影响但对花粉活力没有明显影响.TTC染色法的最优检测条件为:用5.0g·L-1TTC染液(pH 7.0)在35℃下染色2.0h;离体培养法的最优检测条件为:用含质量体积分数15％蔗糖、100 mg·L-1H3BO3和200 mg·L-1Ca(NO3)2的培养基暗培养4d.在25℃、4℃、0℃、-20℃、-80℃和-196℃条件下储藏13周,‘Hicksii'花粉活力和保持时间有明显差异,其中,于-80℃和-196℃储藏3d 花粉就丧失活力;于25℃和-20℃储藏7周、4 ℃储藏10周,花粉仍有一定的活力;而在0℃条件下花粉活力最高,且储藏11周花粉仍有活力.推测曼地亚红豆杉‘Hicksii’花粉对低温的抗性较差,0℃为其适宜的储藏温度.     

长鞭红景天悬浮培养细胞的玻璃化法超低温保存研究

对长鞭红景天悬浮培养细胞的玻璃化法超低温保存进行了初步研究.结果表明,预培养、预处理、脱水处理及冻后处理对长鞭红景天悬浮培养细胞存活率均有重要影响,方差分析结果均显示差异显著.长鞭红景天悬浮培养细胞过程中最佳培养条件是:在含5%二甲基亚砜(DMSO)的MS培养基上预培养1 h,室温下80%PVS2预处理40 min,然后用100%PVS2于0℃处理50 min,投入液氮(LN)保存1 h后在40℃水浴中迅速化冻,再用1.2 mol/L蔗糖培养液洗涤3次,每次10 min,洗涤后的悬浮培养细胞用氯化三苯四氮唑(TTC)法检测,其存活率可达72.70%.     

平衡时间、冷冻方法及解冻程序对马精液冷冻效果的影响

精液平衡、冷冻及解冻是冻精制作过程中三个必不可少的环节,对精液冷冻效果起着决定性作用。在马(Equus caballus)精子冷冻中针对这三个过程的研究较少,为进一步优化马精液冷冻方法,提高精液冻后质量,本研究比较不同平衡时间、冷冻方法及解冻程序对冻融后精子运动参数、质膜完整性及线粒体膜电势的影响。平衡120 min、180 min和240 min组冻融后精液活力及质膜完整性明显高于平衡0 min、45 min、90 min及8 h平衡组;距离液氮面2 cm和4 cm高度熏蒸冷冻获得了与程序冷冻仪冷冻法相似的冷冻效果;采用高温瞬时解冻法(75℃7 s和46℃20 s)比常规方法(37℃30 s)获得了更高的冻后精液活力(P0.05)。综合上述结果,在马精液冷冻过程中综合采用120~240 min平衡,距离液氮面2~4 cm熏蒸法和高温瞬时解冻法(75℃7s和46℃20 s)可获得更好的精液冷冻效果。     

支原体菌株低温保存活力稳定性研究

目的研究低温冻存时间及温度对支原体菌种保存稳定性和菌种活力的影响。方法用固体平板计数法计算不同冻存时间、温度下的口腔支原体、肺炎支原体菌落数差异,分析这2个因素对口腔支原体、肺炎支原体菌种活力的影响。结果口腔支原体在生长48 h后达到生长高峰,肺炎支原体生长较为缓慢,在103 h到达生长高峰。口腔支原体在-70℃冻存1个月时,菌落数由10¹² cfu/mL下降至10¹¹ cfu/mL,冻存1个月的菌落数和冻存3个月、12个月的菌落数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。肺炎支原体在-70℃的冻存条件下,菌落数一直处于稳定水平;比较-35℃与-70℃的冻存条件下肺炎支原体的菌落数,差异无统计学意义(P>0.05),口腔支原体在-70℃冻存条件下的菌种活力明显高于-35℃(P<0.05)。结论口腔支原体生长迅速,但对于储存温度的敏感性较高,肺炎支原体相较口腔支原体生长缓慢,停滞期较长,菌株对冻存温度和时间的敏感度较低,稳定性高。菌种冻存温度应选择较低温度,冻存周期在1年内较为稳定。     

雨生红球藻FACHB-712营养细胞和厚壁孢子低温保藏效果及优化

以高产虾青素的雨生红球藻（Haematococcus pluvialis Flotow）FACHB-712藻株为材料,研究2种细胞形态（营养细胞和厚壁孢子）在低温保藏下的复苏率及其差异原因。结果显示,采用两步法（先预冻降温后再投入液氮中）冻存其营养细胞,在不同冻存条件下,其存活率均低于5%,以10%甘油作为保护剂、冻存速率为0.5℃/min、预冻温度为-40℃、保留30 min,然后再投入液氮罐（-196℃）中保藏,其存活率可达到13.3%。采用两步法冻存厚壁孢子,其复苏存活率高达66.13%,复苏萌发后细胞的生长特性、虾青素含量与液氮保藏前无明显差异（P > 0.05）。对液氮保藏前后藻细胞形态和超微结构观察结果表明,超低温保藏后,营养细胞的结构受到较大损伤,而厚壁孢子受到的损伤相对较小。当添加不同保护剂后,直接将厚壁孢子分别冻存在-20℃、-80℃低温及液氮中,发现-80℃低温冻存处理组的复苏存活率相对较高,可达27%。研究表明采用两步法先预冻降温后再投入液氮中冻存厚壁孢子,是长期保藏雨生红球藻FACHB-712的最佳方法,也可采用一步法将厚壁孢子冻存于-80℃冰箱中。     

阪崎肠杆菌标准品制备中冻干工艺的优化

本研究对阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)冻干工艺进行优化,旨在为E.sakazaki定性标准品和定量标准品的制备提供技术基础,同时为其他肠杆菌科标准品的制备工艺提供理论指导.实验结果表明:最佳冻干保护剂组合为海藻糖3%,脱脂奶粉8%,谷氨酸钠1.5%;最佳预冻温度和预冻时间分别为-20℃,4 ...     

菌种保藏方法对裂殖壶菌生长及发酵性能的影响

考察保护剂、保藏温度及预冷冻方法对Schizochytrium sp.HX-308菌种存活率及发酵性能保持的影响。结果显示:在-80℃低温保藏6个月后,渗透性保护剂的细胞存活率均比非渗透性保护剂高了5%,其中用60%(质量分数)海藻糖的保护剂最终的株细胞存活率达到80.02%,明显优于其他保护剂。采用液氮-196℃保藏菌种(两步预冷冻法、60%海藻糖保护剂),存储6个月后存活率高达90.70%,生物量、油产量和二十二碳六烯酸(DHA)产量分别达到了61.65、26.41和11.10 g/L,为最优的保藏方法,为裂殖壶菌的实验室研究及工业化生产提供了一种长期安全的保藏法。     

Glycogen metabolism in the liver of the neonatal gsd/gsd and control (GSD/GSD) rat.

1. The metabolism of hepatic glycogen, labelled with [6-3H]glucose at day 19.5 of gestation and with 14C from [U-14C]galactose at delivery, was followed for 10 h in food-deprived gsd/gsd and control (GSD/GSD) neonatal rats. 2. In the affected pups glycogen was maintained at 12% (w/w) and there was no loss of incorporated radioactivity. 3. The 3H and 14C in glycogen from the controls were both decreased by 80%, but 14C was removed at 0--5 h and [6-3H]glucose at 5--10 h. 4. Blood glucose concentrations in the unaffected neonatal rats fell from 5.3 mM at 20 min to 1.7 mM after 10 h. In the gsd/gsd pups blood glucose concentration was decreased from 2 mM at birth to 0.3 mM at 2.5 h: it was maintained at 0.8 mM between 5 and 10 h. 5. In neonatal rats that had been dead for 10 h, hepatic glycogen was decreased by 34% in the controls and by 22% in the gsd/gsd pups. These results demonstrate that liver from the affected rats contains glycogenolytic activity, but that it is not expressed in living tissue.     

利用脱落酸和冷适应提高坛紫菜丝状体种质的冻存效率

为验证脱落酸(ABA)和冷适应能否提高紫菜丝状体种质的冷冻保存效率,研究以坛紫菜(Pyropia haitanensis)自由丝状体为材料,在20℃,光强40μmol·photons/(m2·s),在光周期12L﹕12D条件下以ABA(100μmol/L)处理48h或4℃暗培养6d,随后进行–80℃冷冻保存实验.通过连...     

Tumor targeting of radiometal labeled anti-CEA recombinant T84.66 diabody and t84.66 minibody: comparison to radioiodinated fragments

Recombinant antibody fragments offer potential advantages over intact monoclonal antibodies in the radioimmunoscintigraphy (RIS) of solid tumors. Due to their smaller molecular size, antibody fragments have shown rapid tumor targeting and blood clearance, a more uniform tumor distribution and a lower potential to elicit a human immune response. Previously, we have expressed two genetically engineered antibody fragments, the T84.66 diabody (scFv dimer) and the T84.66 minibody (scFv-CH3 dimer), specific to carcinoembryonic antigen (CEA). When radioiodinated, both antibody fragments exhibited rapid tumor targeting and rapid blood clearance in xenografted mice. To extend and optimize their future clinical RIS utility with radiometals, these antibody fragments were conjugated with the macrocycle 1,4,7,10-tetraazacyclododecane N,N',N' ',N' "-tetraacetic acid (DOTA) and labeled with 111In. Tumor targeting and biodistribution studies were carried out in athymic mice xenografted with a human colorectal tumor cell line, LS174T. The [111In]T84.66 diabody (55 kDa) exhibited very rapid tumor targeting with 12.5 +/- 0.4% injected dose per gram (% ID g(-1) +/- standard error) at 2 h and reached a maximum of 13.3 +/- 0.9% ID g(-1) at 6 h. However, kidney uptake was observed to reached a peak of 183.5 +/- 21.0% ID g(-1) at 6 h, a result similar to that reported by others for other low molecular weight fragments labeled with radiometals. Preadministration of an oral dose of D-lysine resulted in a 59% lowering of the renal accumulation at 6 h, but was accompanied by a 31% reduction of tumor uptake to 9.2 +/- 1.2% ID g(-1). The second recombinant antibody fragment, the [111In]T84.66 minibody (80 kDa), displayed rapid tumor targeting of 14.2 +/- 6.1% ID g(-1) at 2 h, and reached a maximum activity of 24.5 +/- 6.1% ID g(-1) by 12 h. Renal uptake achieved a plateau of 12-13% ID g(-1) which cleared to 7.2% ID g(-1) at 72 h. However, hepatic uptake was elevated and reached a maximum of 26.0 +/- 1.0% ID g(-1) at 12 h in these xenograft-bearing mice. Experiments in nontumor bearing mice showed a reduction of hepatic activity at 12 h to 16.6 +/- 1.5% ID g(-1), indicative of an intrinsic hepatic accumulation of the [111In]DOTA-T84.66 minibody or metabolites. While the anti-CEA [111In]DOTA-T84.66 diabody and T84.66 minibody retain the rapid tumor targeting properties of the radioiodinated form, the normal organ accumulation (kidneys and liver, respectively) of the [111In]DOTA forms appeared problematic for RIS and RIT applications. Development of alternative blocking strategies or new metabolizable chelates are under investigation to enhance the utility of the radiometal form of these and other promising recombinant antibody fragments.     

葡萄浆果冰冻切片技术参数的研究

通过对葡萄浆果冰冻切片各操作环节技术参数进行了较为详细的研究后,建立了葡萄浆果冰冻切片操作程序,采果→浆果置于超低温冰箱中（－30度）预冻（8h以上）→冻果修整→把冻果固定到切片机冰冻台面上→速冻（－35度,10－20s)→恒温切片（－20,30S内完成）→封片→观察,切片厚度以25－30um为宜,无水丙三醇作封片剂有利于浆果色素细胞观察研究。     

四种农药对小菜蛾体温的影响

【目的】本研究旨在为阐明小菜蛾Plutellaxylostella体温在其防治中的应用价值提供资料。【方法】在不同人工气候箱内温度(环境温度)下,测定小菜蛾2, 3和4龄幼虫的体温,建立各龄幼虫体温(y)与环境温度(x)的关系方程;同时测定了不同环境温度下不同浓度阿维菌素、毒死蜱、氟虫腈和高效氯氰菊酯分别处理后小菜蛾3龄幼虫在不同处理时间的体温。【结果】小菜蛾2, 3和 4龄幼虫体温(y)与环境温度(x)关系方程分别为y＝0.95x+1.19(r=0.9463), y＝0.95x+1.18(r=0.9988),以及y＝0.93x+1.45(r=0.9989),等温点分别为22.16℃,21.40℃和21.41℃。在气候箱温度设定为15℃或40℃时,4种农药都对小菜蛾3龄幼虫体温无影响;而其他温度条件下,农药处理都可能改变小菜蛾3龄幼虫体温。对于阿维菌素,25℃下 2, 4和8 mg/L处理12 h,2和4 mg/L处理24 h, 0.5, 2, 4和8 mg/L处理36 h以及0.5, 1, 2和8 mg/L处理48 h时3龄幼虫体温均显著高于对照, 8 mg/L阿维菌素处理24 h时3龄幼虫体温显著低于对照;30℃下0.5 mg/L处理24 h及1 mg/L处理36 h 3龄幼虫体温显著低于对照,1 mg/L处理48 h和各浓度处理60 h时3龄幼虫体温均显著高于对照;35℃下只有1和8 mg/L处理48 h时3龄幼虫体温显著低于对照。对于毒死蜱,20℃下50, 200和800 mg/L处理24 h, 100, 400和800 mg/L处理36 h时3龄幼虫体温都显著低于对照;25℃下100和200 mg/L处理12h, 800 mg/L处理24 h, 100, 200和800 mg/L处理60 h时3龄幼虫体温均显著低于对照,而50, 100, 200和400 mg/L处理24 h, 100和200 mg/L处理36 h及100和400 mg/L处理48 h时3龄幼虫体温均显著高于对照;30℃下只有800 mg/L处理24 h时3龄幼虫体温显著低于对照,50, 100, 200和800 mg/L处理60 h时3龄幼虫体温显著高于对照。对于氟虫腈,20℃下只有0.5 mg/L处理36 h时3龄幼虫体温显著低于对照;25℃下 4 mg/L处理12 h和各浓度处理60 h时3龄幼虫体温显著低于对照,0.5 mg/L处理24 h以及0.25, 1和2mg/L处理48 h时3龄幼虫体温均显著高于对照;30℃下 0.25和0.5 mg/L处理12 h, 0.25和2 mg/L处理24h, 4 mg/L处理48 h以及2 mg/L处理60 h时3龄幼虫体温显著低于对照;35℃下只有0.25和0.5 mg/L处理60 h时3龄幼虫体温显著高于对照。对于高效氯氰菊酯,20℃下2和8 g/L处理36 h, 4和8 g/L处理48 h时3龄幼虫体温显著高于对照;25℃下 2, 4和8 g/L处理12 h时3龄幼虫体温均显著低于对照, 0.5, 4和8g/L处理24 h, 1, 4和 8 g/L处理36 h以及1, 2和4 g/L处理60 h时3龄幼虫体温均显著高于对照;30℃下 0.5和1 g/L浓度处理12 h, 0.5, 1, 4和8 g/L处理24 h以及1, 2和8 g/L处理60 h时3龄幼虫体温都显著低于对照。【结论】小菜蛾幼虫自律性体温调节能力低;阿维菌素、毒死蜱、氟虫腈或高效氯氰菊酯处理影响小菜蛾3龄幼虫的体温,影响形式随农药种类和浓度,环境温度及处理时间不同而不同。本研究拓宽了农药毒理学及害虫防治研究内容。     

Isolation and Purification of Viable Sperm Cells from Stored Bicellular Pollen of Lilium davidii Duch.

A successful mass isolation of viable sperm cells from stored bicellular pollen of Lilium davidii Duch. was reported. When fresh pollen was cultured in BKS 15 medium, 87 % germinated in which the generative cells of the fresh pollen underwent mitosis and formed sperm cells within 28 hours. For pollen stored at -20℃ and -70℃ for 6 months, only less than 20 % germinated; but the germination percentage rose to 80 % after they have been hydrated and gradually warmed. Pollen grains of L. davidii which have been stored at -70 ℃ for 6 months, after being thawed were firstly germinated in a 15% sucrose medium for 28 hours, and then osmotically shocked with 10 % sucrose Solution. The solution was later adjusted to a final sucrose concentration of 15%. After density gradient centrifugation, 4 mL suspension of purified sperm cells with a density of 6 × 106 cells/mL were obtained at the interphase of 5%—15% percoll, with a 12% yield of viable sperm cells. The purified sperm cells had a diameter of 13—15 μm and reacted positive to fluorochrome, indicating that they have intact plasma membrane.