广州首起输入性基孔肯雅热的调查分析

广州网络报告的疑似"登革热"患者经广州市疾病预防控制中心流行病学调查、血清学检测、病原学分离培养等做出的诊断为首例输入性基孔肯雅热。又经中国疾病预防控制中心和广东省疾病预防控制中心对疑似基孔肯雅热患者作进一步基孔肯雅病毒抗体和核酸等检测,并对扩增出的基孔肯雅病毒特异性片段进行了序列测定和分析。核苷酸同源性比较显示,E2区(336nt)和NS1区(314nt)的核苷酸序列与意大利基孔肯雅病毒分离株ITA07-RA1及多株印度的基孔肯雅病毒分离株的序列高度同源(98%以上)。根据现场流行病学和实验流行病学的调查结果,可以确认这例疑似境外感染的输入性登革热实为基孔肯雅热病例,也是中国首例输入性基孔肯雅热病例。     

云南辛德毕斯病毒的生物学性状研究

本文对云南首次分离到的Sindbis病毒进行了滤过试验,耐酸耐醚试验、致细胞病变、动物敏感性试验、血压 凝特性、空斑和毒力等试验研究,结果符合披膜病毒科的病毒特性。交 因抑试验和免疫荧光试验,以及空斑减小中和试验进一步证实为甲病毒属的Sindbis病毒,其空斑纯化株的生物学特性也与原株相符,纯化株的制备为该株病毒分子生物学研究的准确性和一致性提供了条件。云南Sindbis病毒的首次分离具有重要的流行病学意义,其生物学特性研究结果对我省该病的诊断和防治具有重要的指导意义。     

云南辛德毕斯病毒的生物学性状研究

本文对云南首次分离到的Sindbis病毒进行了滤过试验、耐酸耐醚试验、致细胞病变、动物敏感性试验、血凝特性、空斑和毒力等试验研究,结果符合披膜病毒科的病毒特性。交叉血抑试验和免疫荧光试验,以及空斑减少中和试验进一步证实为甲病毒属的Sindbis病毒。其空斑纯化株的生物学特性也与原株相符,纯化株的制备为该株病毒分子生物学研究的准确性和一致性提供了条件。云南Sindbis病毒的首次分离具有重要的流行病学意义,其生物学特性研究结果对我省该病的诊断和防治具有重要的指导意义。     

白纹伊蚊和埃及伊蚊对基孔肯雅病毒的易感性和传播性的研究

用４株基孔肯雅病毒经口感染白纹伊蚊和埃及伊蚊,进行了易感性和传播性的研究。结果表明,这两种蚊虫对基孔肯雅病毒易感。无论白纹伊蚊或埃及伊蚊,感染后第５－６天即可通过吸血将病毒传播给乳鼠,至第８－１３天,传播率可高达５５．５５％－１００％。感染蚊亦可经叮咬将病毒传播给小鸡。埃及伊蚊的易感性和传播率高于白纹伊蚊。实验还发现,不同来源毒株之间存在一定差异,如分离自云南白纹伊蚊的Ｍ８１株的感染率和传播率均高于其它毒株。这些结果表明,白纹伊蚊和埃及伊蚊在基孔肯雅病毒的保存和传播中起重要作用。     

基孔肯雅病毒浓缩提纯及多肽抗原研究

采用聚乙二醇(PEG 6000)沉淀法(粗提)和蔗糖密度梯度速率区带离心(精提)浓缩纯化基孔肯雅病毒获得满意效果。以SDS-PAGE和免疫印迹法分析基孔肯雅病毒结构蛋白的组成及抗原性。结果证实:基孔肯雅病毒含有三种结构蛋白(E_1、E_2和C),另一种病毒特异性蛋白E_3与完整毒粒无结构上的联系;病毒粗提样品与精提样品的免疫印迹结果基本一致,尽管在SDS-PAGE图谱上二者相差甚大,因而就某些研究或应用目的而言,病毒的纯化程序可简化。文中初步探讨了以基孔肯雅病毒包膜糖蛋白为特异性抗原用于流行病学调查和临床     

基孔肯雅病毒检测方法及进展

基孔肯雅病毒是引起基孔肯雅热的病原体,主要经伊蚊传播,感染者的症状主要以发热、皮疹和关节疼痛为主。该病毒主要分布在非洲、东南亚等地区,近年来在印度洋地区造成大规模流行。我国主要以输入性病例为主,未发生大规模流行。对基孔肯雅病毒的实验室检测方法及最新研究进展进行了综述。     

基孔肯雅病毒疫苗的研究进展

基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)引起的一种急性传染病。基孔肯雅病毒属披膜病毒科甲病毒属。近年来,该病毒死灰复燃,在全球多处引发大规模疫情暴发,是重要的全球性公共卫生问题之一。目前尚无针对CHIKV的疫苗和有效抗病毒药物。疫苗一直是CHIKV研究的热点领域,目前已经取得了很大的进展,就基孔肯雅病毒疫苗的研究进展进行了综述。     

基孔肯雅病毒囊膜蛋白假病毒模型的构建

目的:以HIV为骨架构建单次复制性的含基孔肯雅病毒囊膜蛋白的假病毒模型,观察其对哺乳动物细胞的侵染性。方法:PCR合成基孔肯雅病毒囊膜蛋白基因,克隆到真核表达载体上,与HIV慢病毒包装系统质粒共转染293FT细胞,48 h后收培养上清,在8μg/mL Polybrene存在下感染293FT细胞,感染48 h后在荧光显微镜下观察结果。结果:PCR合成了基孔肯雅病毒囊膜蛋白基因并克隆到真核表达载体上,测序结果正确;共转染293FT细胞后,检测到基孔肯雅病毒囊膜蛋白的表达并包装成假病毒,感染新鲜293FT细胞后能够检测到绿色荧光蛋白。结论:合成的基孔肯雅病毒囊膜蛋白基因能正确表达并包装成假病毒,含基孔肯雅病毒囊膜蛋白的假病毒能感染293FT细胞并表达绿色荧光蛋白,可用该假病毒模型进一步研究基孔肯雅病毒的感染性,筛选评价抗基孔肯雅病毒药物。     

基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片的建立

根据GenBank中收录的基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒E蛋白基因序列,设计及筛选针对2种病毒的寡核苷酸探针及引物,制备基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片,对芯片的灵敏性、特异性进行了验证,并将可视化基因芯片、荧光基因芯片进行灵敏性比较.结果显示,制备的两种基因芯片都能检测到基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒特异性杂交信号.可视化基因芯片、荧光基因芯片检测两种病毒质粒的灵敏度达到9.1×103 copies/mL, 6.8×101 copies/mL和9.1×104 copies/mL, 6.8×103 copies/mL,与普通PCR比较差异显著. 荧光基因芯片灵敏度是PCR方法的10倍,可视化基因芯片是荧光基因芯片灵敏度的100倍. 模拟病毒检测过程特异性检验证明,可视化基因芯片都具有良好的特异性.本试验建立了基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒两种特异的可视化和荧光基因芯片检测方法,两种方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒的流行病学调查和种特异性鉴定.     

基孔肯雅病毒浓缩提纯及多肽抗原研究

采用聚乙二醇(PEG 6000)沉淀法(粗提)和蔗糖密度梯度速率区带离心(精提)浓缩纯化基孔肯雅病毒获得满意效果。以SDS-PAGE和免疫印迹法分析基孔肯雅病毒结构蛋白的组成及抗原性。结果证实:基孔肯雅病毒含有三种结构蛋白(E₁、E₂和C),另一种病毒特异性蛋白E₃与完整毒粒无结构上的联系;病毒粗提样品与精提样品的免疫印迹结果基本一致,尽管在SDS-PAGE图谱上二者相差甚大,因而就某些研究或应用目的而言,病毒的纯化程序可简化。文中初步探讨     

Genotypic and Phenotypic Characterization of Chikungunya Virus of Different Genotypes from Malaysia

Background

Mosquito-borne Chikungunya virus (CHIKV) has recently re-emerged globally. The epidemic East/Central/South African (ECSA) strains have spread for the first time to Asia, which previously only had endemic Asian strains. In Malaysia, the ECSA strain caused an extensive nationwide outbreak in 2008, while the Asian strains only caused limited outbreaks prior to this. To gain insight into these observed epidemiological differences, we compared genotypic and phenotypic characteristics of CHIKV of Asian and ECSA genotypes isolated in Malaysia.

Methods and Findings

CHIKV of Asian and ECSA genotypes were isolated from patients during outbreaks in Bagan Panchor in 2006, and Johor in 2008. Sequencing of the CHIKV strains revealed 96.8% amino acid similarity, including an unusual 7 residue deletion in the nsP3 protein of the Asian strain. CHIKV replication in cells and Aedes mosquitoes was measured by virus titration. There were no differences in mammalian cell lines. The ECSA strain reached significantly higher titres in Ae. albopictus cells (C6/36). Both CHIKV strains infected Ae. albopictus mosquitoes at a higher rate than Ae. aegypti, but when compared to each other, the ECSA strain had much higher midgut infection and replication, and salivary gland dissemination, while the Asian strain infected Ae. aegypti at higher rates.

Conclusions

The greater ability of the ECSA strain to replicate in Ae. albopictus may explain why it spread far more quickly and extensively in humans in Malaysia than the Asian strain ever did, particularly in rural areas where Ae. albopictus predominates. Intergenotypic genetic differences were found at E1, E2, and nsP3 sites previously reported to be determinants of host adaptability in alphaviruses. Transmission of CHIKV in humans is influenced by virus strain and vector species, which has implications for regions with more than one circulating CHIKV genotype and Aedes species.     

Plaque Size Heterogeneity: a Genetic Trait of Lymphocytic Choriomeningitis Virus

All of the ten strains of lymphocytic choriomeningitis virus assayed on BHK 21/13S cells showed various degrees of plaque size heterogeneity. The amount of virus released from these plaques was usually very small because of rapid photodynamic inactivation by neutral red. When virus from large and small plaques of a specific strain was plated, the same distribution of plaque size was obtained from each clone. Although it was shown that surface virus could possibly be randomly distributed at the time of addition of neutral red overlays, no virus could be isolated from nonplaque areas. Two different strains of virus (CA1371 and WE) with markedly different plaque size ranges were separated by plaque excision from plates infected with a mixture of both viruses.     

从云南省蝙蝠脑组织中分离出乙型脑炎病毒

为进一步阐明蝙蝠在保存乙脑病毒中的作用,于1997年7月,在云南省耿马县捕捉蝙蝠64只,取脑组织作病毒分离,从一只金管鼻蝠脑组织中分离出1株病毒。该毒株能引起BHK21细胞病变和乳鼠发病死亡,在pH5.75～7.4时能凝集鸽红血球,经用单克隆抗体血凝抑制和免疫荧光试验鉴定,证实为乙型脑炎病毒。进一步证明蝙蝠在乙型脑炎病毒保存和扩散中具有重要作用。从金管鼻蝠体内分离出乙型脑炎病毒属国内外首次报道。     

我国新分离乙型脑炎病毒株毒力特征研究

将分离自不同年代的17株乙脑毒株在小鼠脑内传代,然后将病毒在BHK21细胞单层上观察不同毒株的空斑形成大小形态,小鼠脑内和皮下途径接种观察病毒的毒力,结果显示不同毒株在BHK21细胞上形成的噬斑大小不尽相同,减毒株形成的噬斑最小。所有毒株对小鼠的脑内毒力都很强,病毒滴度高达lg8.0/mL以上,毒株间无明显差异。毒株对9～11g小日龄小鼠的皮下毒力有一定差异但不明显,但对14～16g较大日龄小鼠则差别明显。PFU/LD50的对数值差异除一株(M47株)为8.44外,其余各株差别在3.94～0.45间。本研究结果证明自然界乙脑毒株存在明显的神经外毒力差异,毒力差异与分离年代和病毒基因型无关,但从人体分离到的毒株毒力表现较强。     

一株牛源阿卡斑病毒的分离鉴定

阿卡斑病毒(Akabane virus,AKV)是能引起牛、绵羊、山羊流产、早产、新生胎儿畸形的虫媒性RNA病毒。为了解家畜虫媒病毒在我国西南边境地区的分布和流行情况,本研究对中缅边境西盟县的52份牛抗凝血和140份血清(牛70份、羊70份)中的蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、鹿流行性出血热病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)、AKV等虫媒病毒进行检测与分离,通过ELISA及qRT-PCR方法检测病毒,通过核酸阳性抗凝血接种BHK细胞传代以分离病毒,通过设计特异性引物,扩增分离毒株S基因721bp片段及M基因816bp片段,通过克隆测序及中和试验以鉴定病毒,最终从38号牛的抗凝血中分离到一株AKV,TCID50为10-3.5/0.1mL,经比对,分离株S片段与日本KS-2/Mo/06毒株亲缘关系最近,核苷酸同源性为97.66%,M片段与中国DHL10M110毒株亲缘关系最近,核苷酸同源性为96.56%。本研究首次报告了从云南边境地区牛群中分离到AKV,证实了西南边境存在AKV的流行,为AKV在我国的流行病学和边境地区疫病风险防控提供了重要参考及有力依据。     

北京市手足口病的病原学研究

1984年北京手、足、口病流行时,采集了18例病人的皮疱液标术。用乳小白鼠作病毒分离,10份阳性,鉴定为阿萨奇A16型病毒(CoxA16)。双份血清标本中和抗体测定结果亦证明为CoxA18感染。     

我国新分离虫媒病毒的初步鉴定

1990－1994年,从新疆地区的蚊、蜱和病人血清分离了多株病毒,为了明确这些病毒的分类地位,对其中的20株病毒进行了组织培养细胞感染实验和血清学检验,对部分毒株做了动物接种实验和理化性质鉴定。结果显示：20株病毒均可使BHK－21细胞病变（1－3天）,主要表现为细胞圆宿、聚集,融合,破碎,脱落等;致Vero细胞病变为2－4天;15株病毒致C6／36细胞病变（2－4天）,5株病毒对C6／36细胞连续观察7天未见细胞病变。11株病毒对乳鼠2－4天致死,对成年鼠2－5天致死。选取6株病毒进行理化性质鉴定,4株病毒（90260、91002、91004和91028）对5－氟脱氧尿苷耐受,对乙醚和酸敏感,提示为有膜RNA病毒;一株病毒（90265）对5－氟脱氧尿苷、乙醚和酸均敏感,提示为有膜DNA病毒;另一株病毒（9059）对5－氟脱氧尿苷耐受,对乙醚和酸也耐受,提示可能为无膜RNA肠道病毒。20株病毒中,17株病毒与甲病毒、乙型脑炎病毒和布尼亚病毒的特异性免疫腹水不反应,提示这些病毒中可能不存在甲病毒、黄病毒和布尼亚病毒;3株病毒（90260、91002和91004）只与甲病毒的特异性免疫腹水反应,与乙型脑炎病毒和布尼亚病毒的不反应,提示这三株病毒为甲病毒。