mdr-1和bcl-2基因在K562/ADM多药耐药细胞中的共表达

为探讨肿瘤细胞多药耐药(MDR)形成的分子机理,本文观察了mdr-1、bcl-2和bax基因及其编码蛋白在人红白血病细胞株K562/ADM中的可能共表达。结果显示,在K562/ADM细胞中,在以mdr-1及P-gp过度表达为 特征的MDR形成时,其bcl-2及产物Bcl-2也过度表达,其中Bcl-2的表达阳性率约为相应敏感株K562的11倍;而Bax在二种细胞中均呈阳性表达,但无显著差异(P>0.05),提示bcl-2基因在mRNA和蛋白水平上的过度表达可能是K562/ADM细胞MDR形成时细胞凋亡耐受的分子基础。     

DC-CIK对K562/A多药耐药基因mdr1 表达的影响

目的：体外观察树突状细胞（dendritic cell，DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine inducedkiller，CIK）对K562/A细胞株 多药耐药基因mdr1 表达的影响。方法：采集健康人的外周血，分离出单个核细胞( peripheral blood mononuclear cell，PBMC )，在 体外加入多种细胞因子经诱导生成DC及CIK 细胞，以流式细胞仪检测其表面标志，将DC 细胞内加入K562/A 细胞裂解物致敏 后，再与CIK细胞混合培养48 小时。将致敏后的DC-CIK 细胞与K562/A及K562 分组培养后以荧光定量PCR 检测其mdr1 基 因表达的情况，PBMC 作为对照组。结果：RT-PCR 中可见K562/A+DC-CIK 组中mdr1 mRNA 表达较K562/A明显降低，经荧光定 量PCR 观察到K562/A 内mdr1 mRNA 表达为K562 的10.27 倍、K562/A/PBMC 略低于未处理的K562/A（P>0.05）， K562/A/DC-CIK 细胞中mdr1 mRNA含量较K562/A、K562/A/PBMC 少（P<0.05）。DC-CIK细胞与细胞株混合培养后，mdr1 基因 表达较混合培养前明显降低。结论：实验数据显示DC-CIK 可使耐药细胞株内mdr1 基因表达下调。但K562 与DC-CIK 混合培养 后该基因降低不明显，提示该基因在细胞中存在着基础表达，意义在于维持细胞内稳态。目前针对逆转白血病耐药的研究较少， 需要多进行相关研究以拓宽细胞免疫治疗在逆转耐药领域的应用。DC-CIK 是具有发展潜力的抗肿瘤方法。本实验将为下一阶段 研究逆转耐药的机制提供依据，DC-CIK 细胞免疫疗法有望成为逆转肿瘤耐药的新方法。     

DC-CIK对K562/A多药耐药基因mdr1表达的影响

目的：体外观察树突状细胞（dendritic cell,DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine inducedkiller,CIK）对K562/A细胞株多药耐药基因mdr1表达的影响。方法：采集健康人的外周血,分离出单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,在体外加入多种细胞因子经诱导生成DC及CIK细胞,以流式细胞仪检测其表面标志,将DC细胞内加入K562/A细胞裂解物致敏后,再与CIK细胞混合培养48小时。将致敏后的DC-CIK细胞与K562/A及K562分组培养后以荧光定量PCR检测其mdr1基因表达的情况,PBMC作为对照组。结果：RT-PCR中可见K562/A＋DC-CIK组中mdr1 mRNA表达较K562/A明显降低,经荧光定量PCR观察到K562/A内mdr1 mRNA表达为K562的10.27倍、K562/A/PBMC略低于未处理的K562/A（P〉0.05）,K562/A/DC-CIK细胞中mdr1 mRNA含量较K562/A、K562/A/PBMC少（P〈0.05）。DC-CIK细胞与细胞株混合培养后,mdr1基因表达较混合培养前明显降低。结论：实验数据显示DC-CIK可使耐药细胞株内mdr1基因表达下调。但K562与DC-CIK混合培养后该基因降低不明显,提示该基因在细胞中存在着基础表达,意义在于维持细胞内稳态。目前针对逆转白血病耐药的研究较少,需要多进行相关研究以拓宽细胞免疫治疗在逆转耐药领域的应用。DC-CIK是具有发展潜力的抗肿瘤方法。本实验将为下一阶段研究逆转耐药的机制提供依据,DC-CIK细胞免疫疗法有望成为逆转肿瘤耐药的新方法。     

Nrf2/HO-1/HMGB1信号通路在白血病细胞K562/A02化疗耐药中的机制研究

目的:通过观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)、转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)及血红素加氧酶1(HO-1)基因沉默对白血病化疗耐药细胞(K562/A02细胞株)的影响,探讨该信号通路在白血病化疗耐药中的作用及其可能机制。方法:将HMGB1基因、Nrf2基因及HO-1基因的特异性干扰RNA分别转染阿霉素耐药细胞株K562/A02,荧光实时定量(RT-PCR)方法检测HMGB1、Nrf2及HO-1的mRNA表达水平,Western blot方法检测HMGB1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平,免疫荧光方法检测Nrf2的蛋白表达,并使用CCK-8方法检测转染前后K562/A02细胞株的细胞活性。结果:HMGB1基因、Nrf2基因或HO-1基因沉默的K562/A02细胞活性皆显著低于对照组及空白组(P0.05),化疗敏感性恢复。结论:HMGB1高表达导致了白血病细胞株K562/A02对阿霉素的化疗耐药,Nrf2/HO-1信号通路参与了HMGB1诱导的K562/A02细胞的化疗耐药,其表达上调可恢复K562/A02细胞对阿霉素的敏感性。     

K562耐药细胞的建立及相关蛋白表达改变的研究

为研究肿瘤细胞发生多药耐药后蛋白整体水平表达的改变,将K562细胞与阿霉素(ADR)共同培养,逐渐增加药物浓度,最后建立耐阿霉素的细胞K562/ADR株。MTT法检测阿霉素(ADR)、顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)和长春新碱(VCR)对K562和K562/ADR细胞的半数抑制率(IC_(50))。利用蛋白质组学技术,通过双向凝胶电泳分离K562和K562/ADR细胞的总蛋白,银染显色,分析差异蛋白,对部分蛋白点进行胶内酶解,用基质辅助激光解析飞行时间质谱法得肽质量指纹图谱,用AutoMS-Fit软件查询NCBInr数据库鉴定蛋白质。结果表明K562细胞经ADR诱导后出现多药耐药现象,ADR、DDP、5-FU和VCR对K562/ADR细胞的IC_(50)明显高于K562。将K562和K562/ADR的双向电泳图谱进行差异比较,初步鉴定仅在K562/ADR图谱上出现的蛋白是一些与细胞分裂、基因转录有关的蛋白质。这些蛋白的变化与耐药细胞的特性相关,可能与临床化疗的多药耐药现象有联系。     

K562耐药细胞的建立及相关蛋白表达改变的研究

为研究肿瘤细胞发生多药耐药后蛋白整体水平表达的改变,将K562细胞与阿霉素(ADR)共同培养,逐渐增加药物浓度,最后建立耐阿霉素的细胞K562／ADR株。MTT法检测阿霉素(ADR)、顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)和长春新碱(VCR)对K562和K562／ADR细胞的半数抑制率(IC50)。利用蛋白质组学技术,通过双向凝胶电泳分离K562和K562／ADR细胞的总蛋白,银染显色,分析差异蛋白,对部分蛋白点进行胶内酶解,用基质辅助激光解析飞行时间质谱法得肽质量指纹图谱,用AutoMS-Fit软件查询NCBInr数据库鉴定蛋白质。结果表明K562细胞经ADR诱导后出现多药耐药现象,ADR、DDP、5-FU和VCR对K562／ADR细胞的IC50明显高于K562。将K562和K562／ADR的双向电泳图谱进行差异比较,初步鉴定仅在K562／ADR图谱上出现的蛋白是一些与细胞分裂、基因转录有关的蛋白质。这些蛋白的变化与耐药细胞的特性相关,可能与临床化疗的多药耐药现象有联系。     

青蒿琥酯抑制白血病耐药细胞株K562/ADM转铁蛋白受体表达

目的:观察青蒿琥酯对于白血病多药耐药细胞细胞株K562/ADM转铁蛋白受体表达的影响。方法:将K562/ADM(耐阿霉素)细胞分别经浓度为12.5、25、50μg/m L的青蒿琥酯处理48 h,同时25μg/m L实验组在12 h、24 h、36 h分别收集足量细胞。采用流式细胞术检测青蒿琥酯对细胞转铁蛋白受体(Tf R)密度的调控作用,Western blot检测青蒿琥酯对细胞Tf R蛋白表达的调控作用。CCK-8法分析青蒿琥酯对K562/ADM细胞生长增殖的影响。结果:K562/ADM细胞Tf R密度和Tf R蛋白表达水平分别经12.5、25、50μg/m L青蒿琥酯处理后均下降,呈浓度依赖性。25μg/m L青蒿琥酯处理K562/ADM细胞不同时间段后转铁蛋白受体蛋白表达水平随着Art作用时间延长而逐渐降低,表明呈时间依赖性。K562/ADM细胞经青蒿琥酯处理后其耐药性减弱:与对照组相比,12.5、25、50μg/m L实验组细胞耐药逆转倍数分别为1.38、2.12和2.95倍,从而抑制K562/ADM细胞增殖。IC50值为19.7μmol/L。结论:青蒿琥酯能降低细胞Tf R密度和下调Tf R蛋白的表达,逆转K562/ADM细胞的耐药性,从而起到抗肿瘤作用。     

PIC-BE对K_(562)/ADM多药耐药细胞mdr-1和bcl-2基因表达的影响

本文以多药耐药(MDR)细胞株K_(562)/ADM作为实验模型,研究了β-榄香烯吗素(PIC-BE)对该细胞中mdr-1、bcl-2和bax基因及其编码蛋白(P-gp、Bcl-2和Bax)表达的影响。结果显示,PIC-BE可显著抑制K_(562)/ADM细胞中mdr-1、bcl-2及P-gp和Bcl-2的表达,并在一定的范围内呈现对浓度和时间的依赖性。相同条件下,PIC-BE对该细胞中Bax的表达虽有所促进,但统计学上无显著差异,提示PIC-BE对K_(562)/ADM细胞MDR的逆转作用可能是通过其直接或间接地影响到该细胞mdr-1、bcl-2及P-gp和Bcl-2的表达或功能而实现。     

shRNA抑制c-fos表达对P-gp介导的乳腺癌多药耐药的影响

多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致化疗失败的重要原因,多药耐药基因(multidrug resistance gene,mdr1)产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过表达是最主要的耐药机制。原癌基因c-fos在肿瘤MDR中的作用渐受重视。主要选用人乳腺癌敏感株MCF-7和阿霉素(adriamycin,ADR)筛选的、mdr1/P-gp高表达的耐药株MCF-7/ADR,探讨c-fos在P-gp介导的乳腺癌MDR中的作用。相对于MCF-7,c-fos在MCF-7/ADR高表达。采用shRNA法下调c-fos表达后,MCF-7/ADR对ADR的敏感性大大增强,且mdr1/P-gp表达减少、P-gp外排功能降低。c-fos表达下调可逆转对P-gp介导的乳腺癌MDR的实验结果,为c-fos成为逆转肿瘤耐药诊断和治疗的新靶标,对实现耐药乳腺癌的分子靶向治疗提供了理论基础。     

P-糖蛋白在多药耐药的K562细胞转运苯妥英纳与卡马西平中的作用

研究证实,多药转运体与难治性癫痫耐药机制密切相关,P-糖蛋白在其中起重要作用．主要研究P-糖蛋白拮抗剂维拉帕米对P-糖蛋白过表达的K562细胞耐药性及细胞内苯妥英纳与卡马西平浓度的影响．首先建立了P-糖蛋白高表达的K562/Dox(阿霉素诱导)耐药细胞株,比较耐药细胞株和P-糖蛋白表达阴性的K562细胞株对苯妥英纳和卡马西平的耐药性,并观察给予维拉帕米后,耐药细胞内抗癫痫药物的浓度变化．结果发现,苯妥英纳和卡马西平对K562/Dox细胞株的半数抑制浓度(IC₅₀)明显高于K562细胞株,加入维拉帕米后,苯妥英纳和卡马西平对K562/Dox 细胞的IC₅₀明显下降,逆转倍数分别为2.5和1.5．进一步研究发现,K562/Dox细胞内苯妥英纳和卡马西平的浓度均显著少于其药敏K562细胞,仅分别为正常K562细胞的23.6%和32.2%．当加入维拉帕米后,K562/Dox细胞内抗癫痫药物浓度明显升高(P < 0.05)．由此证明,高表达的P-糖蛋白参与了细胞的药物转运,在难治性癫痫的耐药机制中扮演重要角色．     

Stereoselective Accumulation of Propranolol Enantiomers in K562 and K562/ADR Cells

The stereoselective uptake of propranolol enantiomers was investigated by using the K562 and K562 adriamycin‐resistant cell line (K562/ADR) as a model. An enantioselective RP‐HPLC method was applied to determine the accumulation of propranolol (PPL) stereoisomers in K562 and K562/ADR cells. The concentration, time and temperature dependent studies showed that the accumulation of S‐(?)‐PPL was higher than R‐(+)‐PPL in K562 cells and uptake of R‐(+)‐PPL was significantly higher than that of S‐(?)‐PPL in K562/ADR cells. The results indicate the enantioselective accumulation of propranolol enantiomers in K562 and K562 / ADR cells. Chirality 25:361–364, 2013. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.     

IL-3和羟基脲协同诱导K562细胞凋亡

本文应用流式细胞分选仪和电子显微镜研究了IL-3和羟基脲对人红白血病细胞株(K562细胞)凋亡的影响.结果显示IL-3和羟基脲分别诱导K562细胞,不能引起细胞凋亡;而IL-3和羟基脲协同诱导K562细胞,可以引起细胞凋亡.用流式细胞仪检测到IL-3和羟基脲协同诱导K562细胞后,DNA含量低于二倍体的细胞数达31.90%,并产生明显的凋亡小峰.同时,IL-3和羟基脲协同诱导K562细胞,可抑制细胞周期中的S期,阻止细胞从S期进入G2/M期,使细胞周期延长,对K562细胞的生长和增殖具有抑制作用.在电镜下可观察到IL-3和羟基脲协同诱导的K562细胞,出现典型的凋亡细胞形态,细胞核内染色质浓缩、凝聚,紧靠在核膜边沿,形成新月形或环状的染色质结构,产生凋亡小体.提示IL-3和羟基脲具有协同效应,IL-3可提高K562细胞对羟基脲的敏感性,并可协同羟基脲诱导K562细胞凋亡.     

Topoisomerase II-mediated alterations of K562 drug resistant sublines

In order to further elucidate the, roles of DNA topoisomerase II (topo II) subtypes, α and β, as drug targets in chemotherapy, we have determined the enzyme levels in K562 cells selected for resistance to mitoxantrone (K562/Mxn), daunorubicin (K562/Dnr) and idarubicin (K562/Ida 20 and K562/Ida 60), as well as topo II-DNA complex formation, DNA damage and cytotoxicity, induced by topo II interactive agents, for example etoposide, teniposide, mitoxantrone and amsacrine. As compared to the parental cells, topo IIα/β protein levels in K562/Mxn, K562/Dnr, K562/Ida 20 and 60 lines, measured with Western blot, were 17/67%, 85/88, 24/31% and 10/7% respectively. DNA damage, determined by DNA unwinding technique, induced by teniposide and amsacrine correlated with both topo IIα/β protein levels (r ²=0.8/0.9,P=0.03/0.01 andr ²=0.8/0.9,P=0.04/0.01, respectively). Topo II-DNA complex formation induced by all studied drugs correlated with topo IIβ protein levels (r ²-range 0.8–0.9,P-range 0.01–0.04), while the correlation with topo IIα was weaker. Topo IIα/β protein levels tended to show an inverse correlation with the cytotoxicity of etoposide (r ²=−0.9/−0.7,P=0.01/0.06). The overall topo II-DNA complex formation correlated with drug-induced DNA damage (r ²=0.9,P=0.0001), whilst not with the cytotoxicity. Our findings indicate that both topo II isozymes are the targets of the antitumor agents studied, and of potential clinical relevance for prediction of treatment efficacy. They could play a role in tailored chemotherapy.     

Spontaneous mitochondrial membrane potential change during apoptotic induction by quercetin in K562 and K562/adr cells

Natural products from plants such as flavonoids are potential drugs to overcome multidrug resistance (MDR) in cancer treatments. However, their modes of action are still unclear. In this study, the effects of quercetin on mitochondrial membrane potential (DeltaPsim) change as well as quercetin's ability to induce apoptosis and inhibit Pgp-mediated efflux of 99mTc-MIBI in K562/adr cells were investigated. Quercetin exhibits cytotoxicity against erythroleukemic cells: IC50 are 11.0 +/- 2.0 micromol/L and 5.0 +/- 0.4 micromol/L for K562 and K562/adr, respectively. Quercetin induces cell death via apoptosis in both K562 and K562/adr cells and does not inhibit Pgp-mediated efflux of 99mTc-MIBI. Quercetin (10 micromol/L, 3 h) and etoposide (100 micromol/L, 24 h) induce similar levels of apoptosis in K562 and K562/adr cells. Quercetin induces an increase followed by a decrease in |DeltaPsim| value depending on its concentration. A decrease in the |DeltaPsim| value is associated with an increase in the percentage of early apoptotic cells. It is clearly shown that quercetin results in a spontaneous DeltaPsim change during apoptotic induction. Therefore, quercetin is potentially an apoptotic-inducing agent, which reacts at the mitochondrial level.