盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白实验的几点改进

对盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白实验提出了几点改进,以满足本科生实验的要求。实验主要比较和分析了两种封胶方法（原胶布封胶与改进的琼脂糖封胶）和两种染色方法（原考马斯亮蓝染色法与改进的考马斯亮蓝染色法）对凝胶分离血清蛋白实验的影响。结果显示,改进的盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法是一种灵敏、快速、简便、安全、分辨率高的实验方法。结论：改进的盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白实验非常适合本科生实验。     

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳实验教学的优化设计

醋酸纤维素薄膜电泳（PAME）由于其微量、快速、简便、分辨力高等优点,目前已成为高校生化实验常规项目之一,并被广泛应用于血清蛋白、糖蛋白等生物大分子的临床分离与检测。但它也是在生化实验中影响因素较多、较为复杂并难以取得理想效果的实验。实验采用鸡血清蛋白代替价格昂贵的人血清蛋白进行PAME实验教学,并采取措施优化实验条件和程序,从而较好地调控了实验进程,有效地提高了教学的质量和效率。     

正常猕猴与人的视网膜电图比较

目的比较正常猕猴与人视网膜电图异同,为进一步利用猕猴建立动物模型研究视网膜疾病打下基础。方法健康成年猕猴7只（14只眼）与8例（16只眼）正常人进行视网膜电图检测,对两者Rod-ERG中的b波,Max-ERG的a、b波,Cone-ERG的b波峰时值及波幅和OPs的O2值,Flicker-ERG的P值进行统计学检验。结果猕猴与人的视网膜电图波形结果较为相似,各指标与人的结果相比,潜伏期短,幅值低,但Cone-ERG和Flicker-ERG两者幅值差异不具有统计学意义。结论视网膜电图检测从功能上证明猕猴较其他常用实验动物更接近人,尤其表现在视锥细胞及黄斑区功能,可用作人类视网膜疾病尤其是黄斑区病变的良好动物模型。     

兔抗人外周血单核细胞、兔抗猴脾脏淋巴细胞免疫血清的制备及其在分离人和猕猴胚胎内细胞团中的应用

采用梯度离心的方法用淋巴细胞分离液从浓缩的人白细胞悬液中分离人外周血单核细胞,从猕猴新鲜脾脏中研磨分离猕猴脾脏淋巴细胞;分别将人外周血单核细胞和猕猴脾脏淋巴细胞作为免疫原,每次通过耳缘静脉注射4×108个细胞免疫日本大耳白兔,每周免疫一次,共免疫3次,制备兔抗人外周血单核细胞和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清。体外培养人和猕猴胚胎至囊胚,采用制备的免疫血清,分离人和猕猴囊胚内细胞团,用于建立人和猕猴胚胎干细胞系。结果如下:(1)用半微量细胞毒实验法测得兔抗人外周血单核细胞免疫血清和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清的效价分别为1∶320和1∶640;(2)两种免疫血清成功地裂解了15个人囊胚和33个猕猴囊胚的滋养层细胞,分离出了内细胞团,表明免疫血清的制备取得了成功,为建立人和猕猴胚胎干细胞系奠定了基础。     

实验猕猴在生物医学研究中的福利管理

猕猴作为一种重要的非人灵长类实验动物,在生物医学研究中发挥着重要的作用。该文从动物福利概念、我国实验动物福利制度现状、猕猴在饲养管理过程中的福利保障以及在生物医学研究过程中的福利管理等方面进行了阐述,旨在为提高实验猕猴在生物医学研究中的福利管理水平提供参考和思路。     

人工哺育期腹泻婴猴奇异变形杆菌的分离与鉴定

目的对一株人工哺育期引发恒河猴婴猴腹泻的奇异变形杆菌进行了鉴定,为实验猕猴疾病检测、鉴别诊断提供参考依据。方法通过培养特性、菌落形态、染色、生化试验和血清学诊断鉴别等检查,对分离菌株进行初步鉴定,同时,对分离菌株进行致病性试验及药敏试验。结果通过表型生物学特性鉴定,并结合血清学诊断鉴别方法,确证该分离菌株为奇异变形杆菌,应用药敏试验筛选出了高度敏感的抗菌药,控制了该病的继续发生,致病性试验证明,该分离菌株对小白鼠有高致病性。结论分离到的奇异变形杆菌是导致本次婴猴腹泻死亡的病原菌,该菌为条件致病菌,对实验猕猴和研究人员均有潜在的危害,尽管该菌不是国家标准要求排除的病原菌,但该菌引发的传染病将对动物实验造成严重影响,故应引起高度重视。     

中国部分地区实验猕猴巴尔通体感染状况及其遗传特征

【目的】五日热巴尔通体(Bartonella quintana)由体虱在人群中传播,可引起多种人类疾病包括战壕热。为进一步搜集猕猴是五日热巴尔通体自然宿主的证据,本研究调查了国内4个地区实验用猕猴五日热巴尔通体的感染状况,对菌株遗传特征进行了分析。【方法】采集猕猴全血和血清样品各550份,用于菌株分离、核酸和血清IgG抗体检测。应用6个管家基因扩增及测序方法进行菌株鉴定、系统发育及核苷酸多态性分析;应用随机扩增多态性DNA标记(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术分析不同宿主来源菌株RAPD指纹图谱差异;应用间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)检测血清中抗五日热巴尔通体IgG抗体水平。【结果】从550只猕猴中分离到8株五日热巴尔通体菌株,带菌率为1.5%;直接PCR检测550份全血核酸的总感染率为8.2%。普通猕猴血清阳性率为19.0%,感染水平明显高于食蟹猕猴(5.6%)。五日热巴尔通体与汉赛巴尔通体RAPD指纹图谱的带型完全不同,猴源和人源五日热巴尔通体菌株Fuller带型基本一致。不同宿主来源菌株核苷酸多态性分析显示,猴源菌株之间差异小,其与人源菌株差异较大。【结论】中国猕猴五日热巴尔通体感染水平较高,普通猕猴自然感染率及抗体水平明显高于食蟹猕猴,猴源与人源菌株的基因型有明显差异。     

关于猕猴(Macaca mulatta)血象和骨髓象的研究

本文报告我们在猕猴正常血象和骨髓象研究中所累积的资料,并收集国内外有关猕猴正常血象和骨髓象资料作比较并加讨论,我们的结果与多数国内外资料基本相同。     

实验用猕猴颈部骨骼和血管的影像学及血流动力学分析

目的为以猕猴为实验对象的基础研究提供有价值的颈部影像学资料。方法选择实验猕猴6只,雌雄各半,年龄3~5岁,体重3.5~5 kg,给予全身麻醉后行颈部CT血管扫描试验,采用平扫及增强扫描技术,进行容积数据采集,获取正常猕猴颈部CT横断面影像。并在横断位图像中测量C6横突孔入口处左右两侧椎动脉直径、C2-C6横突孔的横径、矢状径。彩色多普勒超声对健康猕猴颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA)、椎动脉(VA)的收缩期峰值血流速度(PSV)、舒张期峰值血流速度(EDV)及血管内径(D)进行分析。结果螺旋CT三维重建显示:1猕猴椎动脉经C6横突孔入颈椎,C2横突孔出颈椎,并有钩椎关节的存在,猕猴椎动脉的走行与人极其相似;2猕猴左侧椎动脉直径为(1.89±0.44)mm,右侧椎动脉直径为(1.72±0.39)mm,双侧椎动脉直径比较无统计差异(P0.05),同一节段双侧的横突孔测量指标比较无统计学差异(P0.05)与人相似。彩色多普勒超声检测颈部血管提示:猕猴左右两侧的颈总动脉收缩期峰值血流速度(CCA-PSV)、舒张期峰值血流速度(CCA-EDV),颈内动脉收缩期峰值血流速度(ICA-PSV)、舒张期峰值血流速度(ICA-EDV),颈外动脉的收缩期峰值血流速度(ECA-PSV),椎动脉收缩期峰值血流速度(VA-PSV)的差异有统计学意义。颈部左侧动脉是猕猴的优势动脉。结论获得了实验用猕猴颈部骨骼及血管的影像学资料,血流动力参数及血管内径的测值,为以猕猴为实验对象的科学研究提供一些有价值的基础资料。     

α-半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞结构功能的影响

目的　观察α 半乳糖苷酶对猕猴类人B抗原的酶解效果 ,探讨α 半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞结构、功能的影响。方法　采用热吸收放散试验从 30只华南猕猴中选取类人ABO血型抗原较强的 2只A型、3只B型猕猴做为实验对象 ,以基因重组的α 半乳糖苷酶体外酶解猕猴类人B型血抗原 ,并回输到A型猕猴体内 ,测定红细胞脆性、自身溶血率、胆固醇、高铁血红蛋白、乙酰胆碱脂酶、ATP等红细胞的结构功能指标。结果　经α 半乳糖苷酶酶解后 ,猕猴红细胞胞膜完整、携氧能力正常 ,酶解后的“通用”型血回输给受体猕猴无任何输血反应发生。结论　α 半乳糖苷酶酶解对于猕猴红细胞的形态、结构、功能无不良影响 ,且在实验动物体内是安全的。     

太行山猕猴血浆胰岛素的放射免疫分析

猕猴是人类的近亲,其形态结构、生理机能及生化代谢等与人类相似,因而长期以来被广泛用于医学科学实验研究。太行山猕猴是我国北方分布的一种数量最多的猕猴,许多学者对其形态、生理、生殖和遗传等做了大量研究,但未见有关血浆胰岛素含量的报道。本文以放射免疫法测定了太行山猕猴胰岛素含量,并与人血浆胰岛素含量进行比较,以便有效地利用猕猴探讨糖尿病的发病机理。1　材料与方法(1)动物来源　用于实验的29只猕猴均产于我国太行山区河南省济源市和辉县市境内。捕获后入河南师大猕猴养殖场饲养,经检疫和健康检查均系健康者。其中雄14只,雌15…     

实验用猕猴质量控制信息系统设计与开发研究

实验用猕猴微生物学和寄生虫学质量控制不仅是动物作为实验材料能够得以应用的基本前提,也是保证动物实验结果可靠性的基本要求。为做好实验用猕猴的质量控制,提高动物的利用率,我们设计与开发了质量控制信息系统。本文以微生物学和寄生虫学质量控制信息系统中的病毒监测模块为例介绍了此信息系统的设计思路和应用,以期为猕猴的质量控制和科学合理的选择应用提供条件。     

圈养猕猴志贺氏菌的分离鉴定及药敏分析

目的确定猕猴感染志贺氏菌的状况,寻找有效治疗措施。方法采用不同选择培养基对13份病猴粪便样品进行分离培养、细菌革兰氏染色、镜检,并对分离的疑似菌株进行细菌生化鉴定和分子鉴定,经小白鼠致病性实验后,再用纸片扩散法测定分离菌株对23种抗生素的敏感性。结果从13份猕猴粪便样品中共检出12株志贺氏菌,检出率为92.31%,其中痢疾志贺菌(A群)1株、福氏志贺菌(B群)10株、宋内氏志贺菌(D群)1株;致病性试验结果表明,12株菌均能在72h内致死小白鼠,并能回收到注射的菌株;药敏试验结果表明,本实验中分离到的志贺氏菌对头孢噻肟(86.49%)最敏感,对头孢三嗪(75.00%)、头孢他啶(66.67%)次之,对多粘菌素B、羧苄西林、苄唑西林素等抗生素耐药性强。结论初步确定猕猴感染志贺氏菌普遍存在,进而引起腹泻、痢疾的可能性较大,头孢噻肟等为最敏感药物。     

太行山猕猴研究进展与展望

猕猴广泛分布于从阿富汗到泰国和中国南部的亚洲地区.分布于中国的猕猴有6个亚种.太行山猕猴为猕猴华北亚种Macaca mulatta tcheliensis,系中国所特有,目前仅分布于河南、山西两省交界的太行山和中条山南端地区,为世界野生猕猴分布最北的种群.自20世纪80年代初期开始,学者们在数量与分布、形态学(包括普通形态学、骨骼系统形态学)、生态学、微观生物学、疾病、实验技术等方面,对太行山猕猴展开了研究.本文对已有的研究成果进行了综述,并提出了今后亟待开展的研究工作,以期能有助于对这一珍稀物种的有效保护.     

峨眉山藏猕猴粪源大肠杆菌耐药性的调查研究

目的了解峨眉山藏猕猴猴群大肠杆菌耐药性情况,为疫病防治和耐药性在野生猕猴群体中的扩散提供科学依据。方法采集峨眉山藏猕猴粪便105份,进行大肠杆菌的分离鉴定,并对分离杆菌进行致病性试验以及按照CLSI推荐的K-B药敏纸片法进行19种抗生素的耐药性检测。结果从105份样品中分离到105株大肠杆菌,其中6株致病性较强,23株有致病性,76株无致病性。各景区所分离的大肠杆菌对痢特灵(FUZ)耐药率较高,一线天达54.29%,钻天坡达39.47%,雷洞坪达46.87%。105株不同区域来源的大肠杆菌耐受的药物种数不同,一线天景区无12耐以上的菌株,而以3耐最多,为11.43%。钻天坡景区无7耐以上的菌株,而以1耐最多,为21.05%。雷洞坪景区无8耐以上的菌株,而以1耐最多,为18.75%。对各猴区分离的29株致病性大肠杆菌对19种抗生素共产生了7种耐药谱。总体来看,优势耐药谱不明显,且不同个体致病性大肠杆菌分离株的耐药谱存在差异。结论应定期追踪峨眉山藏猕猴大肠杆菌耐药情况,对野生藏猕猴疫病的防控具有比较重要的意义。     

成年太行山猕猴肱骨与锁骨的初步研究

本项研究对成年太行山猕猴的肱骨（３３例）及锁骨（２９例）进行了全面测量及观察,计算了５项指数。对太行山猕猴、滇南猕猴、川西猕猴、湘鄂猕猴的肱骨、锁骨和桡骨有关测量指标及指数进行聚类分析,分析结果表明：与其他３个猕猴亚种相比,太行山猕猴肱骨与锁骨的形态结构更适应于地面上的活动,说明其在地上活动较多,在树上活动较少。     

戊巴比妥钠麻醉下正常猕猴的心脏收缩时间间期分析

心脏的收缩时间间期(Systolic time interval 简称STI)是临床上用以判定心脏功能状态的无创伤性检查方法之一。动物实验研究中的应用尚少。猕猴(Macaca mulatta),的STI未见报导,近年来将猴用于心血管疾病的实验研究逐渐增加,寻求无创伤性心功能检查技术以促进实验研究的发展,已为人们所重视。现将对40例正常猕猴在戊巴比妥钠麻醉下的STI值报告于后。     

用于克隆的猕猴耳成纤维细胞的培养及其有关生物学特性

应用组织块培养法成功地分离培养了猕猴耳皮肤成纤维细胞。对培养细胞进行了形态观察、生长曲线测定、免疫细胞化学分析、染色体和周期分析,结果表明培养的细胞具有正常的大小、形态、细胞骨架系统和染色体数目,而且随着细胞汇合程度的增加,G0／G1期细胞所占的比例上升,70％-80％和90％-100％两种汇合程度的G0/G1期和S期比例间存在明显的差异(P<0.05)。对培养猕猴耳成纤维细胞的有关生物学特性进行分析,有利于给同种和异种体细胞克隆猴研究提供形态良好、染色体数目正常的供体细胞,同时也为体细胞转基因等其他领域的研究提供了基础条件。     

猕猴精子优选及体外获能的研究

选择活率高的精子并进行体外获能是开展猕猴体外受精研究的必要程序, 是研究猕猴受精生物学的重要手段。本实验采用上浮法和Percoll 梯度离心法对猕猴精液进行了优选, 并对处理后的精子形态正常率、精子活率、密度及受精率作了比较, 发现二者差异不显著; 用dbcAMP 和咖啡因使精子获能, 发现只有两种获能剂同时存在才能使猕猴精子获能并使卵母细胞受精。结论为: 上浮法和Percoll 法都是有效的精子优选法, 对受精率的影响差异不显著; dbcAMP 和咖啡因在猕猴精子体外获能时缺一不可。