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用就Q-Sepharose Fast Flow对Vero细胞基质制备的I型口服脊髓灰质炎减毒活疫苗悬液进行纯化。病毒液经滤过澄清和超浓缩,获得85%的病毒感染性滴度回收率,而经Q-Sepharose F.F.纯化的病毒悬液,病毒感染性滴度回收率达100%。纯化后的病毒液用α-^32PdATP标记DNA探针膜杂交法测定,宿主Vero细胞基质DNA残余含量远低于100pg/剂量的标准;rct/40特征 相似文献
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脊髓灰质炎减毒活疫苗的热稳定性试验 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对国产三种剂型OPV进行了热稳定性试验,在所试温度中能保持疫苗有效服用剂的时间为:4℃ 4个月以上,10℃ 2个月,22℃ 7天,34℃ 2天,36℃ 1天。试验发现液体苗对热的稳定性要比糖丸苗相对好些。 相似文献
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目的评价细胞工厂工艺连续生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性。方法疫苗在-20℃放置24个月,检测病毒滴度、外观、抗生素残留量、无菌性,及对病毒血清型进行鉴别;2~8℃放置12个月检测疫苗稳定性;室温放置7周、37℃放置7 d检测加速热稳定性并冻融的稳定性。结果该疫苗-20℃可贮存24个月以上,2~8℃有效期可延长至12个月,且冻融不会影响疫苗的稳定性。结论疫苗质量稳定,各项检测结果均符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)及企业《口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)注册标准》。 相似文献
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验证口服脊髓灰质炎减毒活疫苗的猴体神经毒力试验参考品合格标准是否发生改变及其对疫苗猴体神经毒力试验检测结果的影响。按照WHO推荐的猴体神经毒力中枢神经系统病理学检定方法,统计分析了1996~2002年中猴体神经毒力试验三个型参考品各五批以上的实验数据。并对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型参考品的病变好发部位腰、颈、脑的病变分数进行了比较。结果表明,Ⅰ、Ⅱ型参考品合格标准上、下限及C值有所下降;Ⅲ型参考品合格标准上、下限及C值略有升高。从病理学记分结果显示,三型参考品在腰、颈、脑部的致病力存在着差异;Ⅲ型参考品的致病变力向颈、脑部位扩散的指数明显增大。Ⅰ、Ⅱ型参考品合格标准对疫苗猴体神经毒力试验合格界线趋于严格,而Ⅲ型参考品猴体神经毒力病变指数由腰部向颈、脑部蔓延趋势的增大导致病变扩散指数和强度指数增大,从而使Ⅲ型参考品合格标准对疫苗的猴体神经毒力试验合格界线范围趋大,有可能对Ⅲ型疫苗制品合格率增大。 相似文献
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脊髓灰质炎疫苗衍生株-消灭脊髓灰质炎的新障碍 总被引:3,自引:0,他引:3
口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)或接触了服苗者后,极个别人可发生疫苗相关脊髓灰质炎(VAPP),尤其是近10年来,国内外均报道了小规模的VAPP暴发流行,监测发现,这些VAPP病人的发生与OPV疫苗出现基因突变或基因重组,以致疫苗病毒恢复其毒力有关,本文就目前VAPP发生情况,OPV疫苗基因的变化如基因突变或重组的类型和机制。如何预防和控制OPV疫苗衍生病毒的发生等方面的进展作了介绍。 相似文献
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《微生物学免疫学进展》2015,(4)
目的分析一例疑似疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎(VAPP)的急性弛缓性麻痹(AFP)病例,评估病例与接种疫苗的关系。方法由预防接种异常反应调查诊断专家组根据病例临床表现、实验室和影像学检查结果,结合循证医学证据进行分析论证。结果患儿首次服脊髓灰质炎减毒活疫苗后第14天接种首针b型流感嗜血杆菌结合疫苗,第21天出现发热、肢体乏力,体查:四肢肌力0级,肌张力低,颈部以下皮肤痛觉缺失。麻痹第5天大便标本分离到脊髓灰质炎Ⅲ型病毒疫苗株,实验室检查未发现其他病原体感染,核磁共振检查显示延髓、颈段、下胸段脊髓多发病变,胸11椎体水平以下脊神经前根强化较显著。上述结果符合急性播散性脑脊髓炎的临床表现。结论本病例诊断为脊髓灰质炎疫苗相关ADEM病例,属于疫苗接种异常反应,疾病预防控制人员应注意此类异常反应的发生。 相似文献
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减毒沙门氏菌用作重组口服活疫苗载体的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
减毒沙门氏菌不仅被用于预防沙门氏菌的感染,还可以作为异源抗原的载体,构建成表达其它病原体保护性抗原的活疫苗,通过口服免疫获得相应局部免疫、体液免疫和细胞免疫反应。本文从其减毒机理、重组菌构建方法等方面进行综述 相似文献
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水痘带状疱疹病毒减毒活疫苗自从1974年由日本高桥研制成功后,已在世界大多数国家开发应用,具有良好的社会经济效益。本文介绍了VZV的生化结构、感染特点以及VZV疫苗的免疫原性、使用规定和研究现状,并提出了今后的努力方向 相似文献
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减毒活疫苗作为DNA疫苗载体的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
由于胞内感染菌与宿主细胞之间的相互作用,使相应的减毒活疫苗有可能成为更为理想的DNA疫苗载体,本文就减毒活疫苗作为理想的DNA疫苗的生物学基因,研究进展,存在的问题等方面进行综述。 相似文献
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Staphylococcal hyaluronate lyase (hyaluronidase) derived from a pathogenic strain of staphylococcus was purified by means of salt fractionation with ammonium sulfate and gel filtration through Sephadex G-100. Most of the enzyme activity from concentrated culture supernatant fluids of staphylococci was obtained in a fraction precipitated by 90 to 100% saturation with ammonium sulfate. A small amount of enzyme was also precipitated by 80 to 90% saturation with the salt. The hyaluronidase-rich fractions did not contain other staphylococcal enzymes, such as coagulase, protease, lipase, and staphylokinase. These enzymes were present in the original concentrates. Molecular sieving chromatography of the partially purified enzyme by filtration through Sephadex G-100 resulted in a further increase in specific enzyme activity. However, more than one active peak was obtained after gel filtration, thus suggesting that there may be more than one molecular form of the enzyme. Immunodiffusion in agar gel of the chromatographically purified enzyme fraction, with immune serum from rabbits injected with concentrated staphylococcal culture supernatant fluids, indicated that there was one major antigen. A similar antigen, giving reactions of identity with the purified material, was present in the original culture supernatant fluid. 相似文献
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从荞麦生化遗传以及器官衰老机理的研究目的出发,以苦荞叶片为材料,制备出活力较高的铜锌趋氧化物歧化酶。对其理化性质分析表明:该酶在259nm处有一特征吸收峰,分子量约为31kD,含有308个氨基酸残基,同工酶电泳结果显示三条活性带。 相似文献
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欧文氏菌ER97高效表达了从棒状杆菌SCB3058克隆的2,5-二酮基-D-葡萄糖酸(2,5-DKG)还原酶I基因,5 L罐发酵后,收集菌体破碎,将胞内可溶性的蛋白通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析和Phenyl Sepharose CL-4B疏水柱层析后分离纯化到了2,5-DKG还原酶I,纯化了5倍,得率27%,比活力为3,418 U/mg。测定了该酶的一些特性参数:分子量为34 kD,等电点为6.0,它以NADPH为辅酶,将2,5-DKG还原为2-酮基-L-古龙酸(2-KLG),对NADPH和2,5-DKG底物的Km值分别是0.29mmol/L和14.7 mmol/L,1 mmol/L Cu2 、Zn2 等有强烈抑制作用,EDTA和巯基乙醇对该酶没有抑制作用,酶的最适pH为7.0,最适反应温度为40℃。 相似文献
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从茶叶酶学研究的特殊性出发,设计了有效的纯化路线,并以茶树鲜叶为材料,首次制备出高比活性茶叶铜锌超氧化物歧化酶。经测该酶的分子量约为31kD。在274nm处,该酶有一吸收峰。在8mol/L尿素溶液中,此酶活性仍不受影响。经胰蛋白酶处理后,未见有活性丧失.纯化的酶经等电聚焦分析,呈现三条蛋白区带,其PI值分别是5.02,5.23和5.46。 相似文献
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单链抗体2F3表达条件的优化及其提纯和性质研究 总被引:4,自引:1,他引:3
将构建好的单链抗体 2F3表达载体pTMF2F3ScFv转化到大肠杆菌BL21(DE3)。先挑选出表达量高的单克隆 ,然后让其在 37℃进行表达 ,并将表达时的培养条件进行优化。实验结果表明 :最佳诱导条件为开始诱导时的菌体密度OD590nm =1.0~ 1.8,所加异丙基β-D 硫代半乳糖苷 (IPTG)的浓度为 0.3~0.5mmol/L ,诱导时间 7h ,优化后目的蛋白表达量占菌体总蛋白的20% ,并用发酵罐成功地进行了扩大培养 ,筛选了洗涤包涵体的最佳条件。采用两步法对包涵体复性进行了研究 ,用Westernblotting及ELISA法检测了所表达的单链抗体及其生物活性 ,并成功制备了含硒单链抗体酶. 相似文献
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集胞藻类金属硫蛋白的纯化,性质和溶液构象的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
集胞藻Synechocysitissp.PCC6803光照培养,加入100μmol/LZnCl2诱导藻内类金属硫蛋白(MT-like)的表达。离心收集鲜藻,超声波破碎细胞,离心除沉淀。上清液72℃加热3min去杂蛋白,离心,上清液依次经过分子筛层析柱,阴离子交换柱和脱盐柱,可得蓝藻类金属硫蛋白。5L培养液收集鲜藻7.6g,一次上样1.52g鲜藻的裂解物,冻干后得15mg纯化的蛋白样,为鲜藻重的0.1%.经分析其等电点为pH4.5,分子量为6.986kD,由58个氨基酸残基组成。其序列中含有较多疏水氨基酸残基(36%),但其半胱氨酸含量仅为5%。CD(圆二色性)图谱表明其二级结构主要为无规卷曲,不含α-helix和β-sheet,无哺乳动物的金属硫蛋白所具有的典型双结构域结构。紫外吸收光谱表明Zn结合的类金属硫蛋白在220nm也有较高的吸收值。红外光谱分析的结果表明,此类金属硫蛋白的吸收光谱与高等动物的金属硫蛋白的吸收光谱类似。 相似文献
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集胞藻Synechocystis sp.PCC
6803光照培养,加入100 μmol/L ZnCl 相似文献
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经丙酮粉、硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析等方法,首次从玉米花粉细胞质粗提物中纯化了一种具有ATPase活性的可溶性蛋白。SDS-PAGE测得分子量为28kD,IEF-PAGE测得等电点为8.3。免疫印迹鉴定结果表明该酶蛋白与抗牛脑动蛋白或动力蛋白的抗体无免疫交叉反应。最大紫外吸收波长为278nm,并作了CD谱分析。底物特异性研究表明:ATPase水解活性最高。药理学研究表明:该酶蛋白可被矾酸钠强烈抑制,但对NEM基本不敏感,氟化钠可使酶活力丧失50%左右,寡霉素、硝酸钾及乌本苷对酶活力没有抑制作用. 相似文献
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脯氨酰顺-反异构酶的纯化及对重组蛋白质折叠反应的催化性能 总被引:2,自引:0,他引:2
脯氨酰异构是蛋白质折叠反应的限速步骤之一,体内被脯氨酰顺-反异构酶(PPI)所催化.为了研究PPI在重组蛋白体外折叠复性中的作用,我们自猪肾脏中纯化了PPI,并对重组蛋白的酶促折叠过程进行了探讨.结果表明,PPI催化的重组蛋白的折叠反应主要是提高了它们的折叠速率,而不增加正确折叠率和比活性,PPI在很低的浓度下即有很高的催化活性. 相似文献