利用PCR法鉴别牛受精卵的性别获得许可

瑞士Hoffmann-La Roche在93年9月中旬许可日本伊藤火腿(ham)公司将聚合酶链反应(PCR)法应用于雌雄鉴别服务和试剂盒的制造、销售。 这在日本还是第一家得到许可制造销售此种试剂盒。鉴别雌雄服务的许可是继雪印乳业公司之后第二家。由于得到许可,伊藤火腿公司将进行牛受精卵的雌雄鉴别技术的事业化。 农林水产省作了明年度的预算计划,由于PCR法鉴别雌雄技术是新型事业,预算金额为6600万日元。伊藤火腿公司打算利用这项事业进行试剂盒的销售。农林水产省以畜产试验场为对象。而该公司是面向民     

ET与家畜改良

农林水产省经调查宣布,牛受精卵移植技术(ET)作为优良系的培育技术固定下来了。为进一步加强第二代ET技术——体外受精卵移植技术的普及,该省向这届通常国会提出“家畜改良增殖法的一份修改方案”。据农林水产省畜牧局的调查到90年利用受精卵移植技术(ET)诞生的牛为5912头。家畜生产课课长助理横山政广说:“尽管还没达到国内的新生头数160万头中的1％。但该年选择的种牛32头中18头是来     

为了正式生产冷冻体外受精卵而扩大设施

家畜改良事业团的东京生物技术中心正式生产1月开始的农林水产省用于体外受精卵移植事业的冷冻体外受精卵,从2月20日开始扩大设施的改建工程。估计3月底完成,实际运行要5月上旬。之后调整机械需要1～2个月正式生产。随着设施的扩大,人员也将从8名增加到十几名。事业的正式名称为“体外受精卵活用肉用牛增殖紧急对策事业”。是91年指定赞助对象事业之一。农林水产省规定纲要,畜产振兴事业团进行实际赞助。预算为37100亿日元。支付给家畜改良事业团的部分     

用直接移植法移植猪冷冻受精卵成功并产仔

全国农业协同组合联合会(JA全农)饲料畜产中央研究所95年7月5日宣布使用直接移植法将猪冷冻受精卵移植给受卵猪生产仔猪获得成功。使用直接法生产仔猪是世界首例。作为与茨城大学生物生产学科助教授高坂哲也的合作以及农林水产省的家畜受精卵移植技术组合的课题提出了该项研究。该研究组合的课题在95年度完成。因这次使用直接法达到了50％的产率。所以该研究所开始了面向实用化的试验。 JA全农打算将猪冷冻受精卵移植技术用于JA全农进行系统构建的SPF猪“°SP”的生产、系     

PCR技术在性别鉴定及性别控制应用中的研究进展

PCR技术是一项发展迅猛的生物技术,因具有快速、灵敏、简便及特异性强等特点而被广泛应用于性别鉴定及其它许多相关研究领域。应用于性别鉴定的PCR方法从简单PCR法、双重或多重PCR法、巢式PCR法发展到改进的两温度梯度PCR法;而不同性别间除了呈现有或无关系（类似于Sry 基因）的基因序列外,也检测到了很多类似于锌指蛋白和牙釉蛋白的呈现不同性别特征的基因序列,这为性别鉴定引物的设计和PCR法进行性别鉴定提供了另一种全新的思路,即如果根据这种性别多态性DNA序列特点设计引物,采用两温度梯度PCR扩增技术进行PCR性别鉴定,则可望简化鉴定程序、降低检测时间、提高鉴定效率,使PCR性别控制技术更加成熟和实用化。随着研究的深入,PCR技术在性别鉴定及控制的应用中必将日益成熟,并推动此项技术在其它相关领域中的研究和应用取得更大的进展。     

民间企业获得了使用隔离试验田的权利

农林水产省最近决定了94年的隔离试验田利用计划。这项利用计划是执行了93年4月制定的民间企业利用国家隔离试验田的原则“重组植物的模拟环境利用的隔离试验田的运营纲领”。民间企业中北海道绿色生物技术研究所和三井东压公司获得了隔离试验田的使用权。但这次是隔离试验田的分配。进行隔离试验田试验时必须通过别的途径确认适合农林水产省的方针。     

农林水产省计划进行重组番茄食品安全性的试验

农林水产省于92年5月起,在一般试验田进行日本最初的重组作物的栽培试验。重组番茄食品的安全性试验正在计划之中。在93年的预算中,概算需要12000万日元的新方案“使重组体得到高度利用的评估方法的开发”有实施的意向。关于作为食品利用的基因重组作物的指导方针的决策是在日本厚生省的管辖范围内。农林水产省强调说:“这次正在计划之中的安全试验目的是既要证明作为重组物生产的安全性,又要收集获得公众认可所需的数据”。据农林水产省说,安全性试验的对象只是重组番茄,关于今后培育     

西藏小型猪胚胎成纤维细胞的分离培养及性别鉴定

目的探索和建立西藏小型猪胚胎成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法。方法取35d的西藏小型猪胚胎分离胚胎成纤维细胞,进行体外原代培养及传代培养,观察细胞成纤维细胞的形态和生长状况。根据猪Y染色体上性别决定基因SRY设计引物进行性别鉴定,同时以β珠蛋白作为内参基因,建立PCR反应体系鉴别胚胎的性别。结果西藏小型猪胚胎成纤维体外分离后,呈贴壁生长,快速增殖。PCR性别鉴定结果表明雄性胚胎细胞可扩增出一特异性SRY基因条带,而雌性则没有。该法可快速鉴定胚胎的性别,可用于体细胞克隆动物早期性别鉴定。结论研究结果表明利用胶原酶消化法所获得的西藏小型猪胚胎成纤维细胞可在体外稳定培养并传代,利用PCR鉴定猪胎儿性别具有简单、快速、准确的特点,可应用于克隆猪研究中体细胞系的早期性别鉴定。     

柑桔新品种获专利

龟甲万公司宣布了与农林水产省共同利用细胞融合技术改良品种(包括全部柑桔类)材料的专利和其育种法.这是用细胞融合育成的柑桔品种的基本专利.用细胞融合创造的新植物体作为一般专利在世界上还是第一例.另外,日本企业在美国获得植物专利这也是第     

单细胞PCR体系的建立及其在CRISPR/Cas9靶点活性检测中的应用

单细胞PCR是以单个细胞所含的DNA或RNA为模板进行扩增,因此其模板的制备是影响整个反应成功与否的关键因素。利用三种不同蛋白酶K细胞裂解液(SDS细胞裂解液、NP-40细胞裂解液、Tween-20细胞裂解液)分别对体外培养成熟的单个猪卵母细胞进行裂解,并直接作为模板进行PCR扩增,结果表明:NP-40细胞裂解液制备的模板质量最好,其扩增效率为95%;其次为Tween-20细胞裂解液,其扩增效率为65%;SDS细胞裂解液产物中未检测到阳性条带。结合显微注射技术对sgRNA靶点活性进行检测,结果表明利用单细胞PCR结合显微注射的方法,在受精卵内对CRISPR/Cas9靶点活性进行检测确实可行,检测结果真实可靠。     

SND1转基因小鼠的构建

目的:构建 SND1 过表达的转基因小鼠模型。方法:利用对小鼠 SND1 基因转录本构建 SND1 过表达载体pInsulator-CAG-3×FLAG-SND1,利用受精卵原核注射技术,将外源线性pInsulator-CAG-3×FLAG-SND1转基因载体注射到受精卵细胞核内,将存活受精卵进行胚胎移植制备 SND1 转基因小鼠,用PCR、RT-PCR技术鉴定转基因小鼠是否构建成功。结果:成功构建过表达 SND1 基因的转基因小鼠模型,为进一步研究 SND1 基因在动物体内的生物学功能奠定基础。     

实时荧光定量PCR法检测转基因小鼠拷贝数

目的利用实时荧光定量PCR法鉴定转基因小鼠外源基因插入拷贝数。方法以TG-CARK转基因首见鼠为研究对象,选取小鼠的高度保守基因Fabpi为内参,利用绝对定量的实时荧光PCR法鉴定转基因小鼠拷贝数,并与传统的Southern blot方法的定量结果进行比较。结果实时定量PCR鉴定的转基因拷贝数与Southernblot法完全一致,三只TG-CARK首见小鼠的拷贝数分别为1,7,45。结论实时定量PCR技术具有高准确性、高稳定性、高通量和低成本的优点,是比传统杂交技术更好的鉴定小鼠转基因拷贝数的方法。     

全鱼基因的构建及其在鲫鱼体内的整合与转录

利用PCR技术删除大麻哈鱼生长激素基因的启动序列,通过基因重组构建出全鱼基因（鲤鱼MT启动子－大麻哈鱼生长激素基因）;以融合全鱼基因为外源基因,通过显微注射方法将其线性片段导入鲫鱼受精卵内,研究其整合与转录效率。结果表明,全鱼基因在鲫鱼基因组中的整合率为36．4％（16／44）,对转基因阳性鱼的RNA样本进行Northern印迹杂交检测,转录率为25％（1／4）。因此,该全鱼基因可以作为转基因鱼研究和应用的外源基因。     

利用核移植一卵产三头克隆犊牛获得成功

全国农业协作联合会(JA全农)的饲料畜产中央研究所的青柳敬人等利用核移植技术一卵产三头犊牛(双子×1,单子×1)获得成功。目前核移植的生存犊牛都是1卵产一头犊牛。从受精卵中得到三头存活犊牛在日本还是首例。除此之外,农林水产省家畜改良中心也预计今年11月中旬一卵生产五头犊牛克隆(双胞胎×2,单胞胎×1)。估计明年4月在枥本县酪农试验场诞生克隆牛。在日本克隆牛相继诞生。在这三年以美国、欧洲为中心确立克隆牛的生产技术。去年底报告了1卵产11头的克隆牛。加拿大Alta Genetics公司得到第Ⅲ代克隆牛、第Ⅳ代胚盘泡。     

日本开辟利用畜牧业副产品的产业

日本农林水产省从1987年开始对畜牧业(不限于猪)副产物的有效利用进行调查研究,作为1986年开始的“国产猪肉新用途开发事业”的一个部分。实施的是畜牧业副产品流通实况调查(国内、国外)以及畜牧业副产品的新用途的开发和研究。所谓畜牧业剐产品,是宰杀、解体的家畜除食用部分之外的一切产物。具体就是指内脏和骨、皮、血等,其中也包括供食用的部分,但现在实际上大部分是废弃的。如能从副产品制造出附加价值高的商品,就能降低国产肉类的价格,所以农林水产省致力于其有效利用。     

日本在UPOV条约生效前后修改94年度的种苗法

植物新品种保护国际同盟(UPOV同盟)在10月底召开的第7届UPOV国际机关会上宣布UPOV条约的生效最早也要在94年下半年以后。农林水产省打算在UPOV条约生效前后,修改种苗法,批准条约。但是在下届普通国会上没有提出修改法案,打算在94年度的普通国会上修改法案。 UPOV同盟的24个加盟国(芬兰和挪威从93年加盟)中到目前为止还没有一个国家批准UPOV条约。     

PCR构建融合基因方法的建立

以聚合酶链式反应为基础的片段拼接技术——融合PCR技术是一种新的基因片段融合技术。以含有马铃薯块茎两种淀粉合成关键酶ssⅡ和ssⅢ基因为模板,利用融合PCR对其进行融合拼接,初步建立以PCR产物(不回收)及一步PCR法融合基因的构建方法,并对融合基因构建时PCR产物(不回收)的使用量及一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度等条件进行优化。结果表明,以不回收的PCR产物为模板构建融合基因时PCR产物(不回收)的使用量在10-20 ng范围内为佳;一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度在25-1 000 nmol/L为宜。     

95年销售重组BT剂

94年11月28日农林水产省批准日本第一个重组农药“guard-jet”水合剂的农药登记,本刊已作报道。得到认可之后,久保田决定明年2月销售。这意味着在日本已开始商品化生物农药(对环境没有影响)。 “guard-jet”是美国Mycogen公司用基因操作技术将Bacillus thuringiensis的δ毒素蛋白基因导入荧光假单胞菌的死菌制剂。荧光假单胞菌在野外的残效期比传统的BT剂延长2倍。这次已批准作为甘     

外源基因在鲫鱼胚胎发育过程中的表达

近五年来,通过显微注射技术,已将各种克隆基因片段导入了不同种的鱼类受精卵中,目的是探讨培育能稳定遗传外源基因的鱼类新品系的可行性,为鱼类定向育种开辟新途径。已发表的研究报告证明,外源基因导入鱼类受精卵后均可与受体基因组整合,部分实验显示外源基因可以表达,且其表达产物具有生物活性。目前有关检测外源基因表达的实验大多采用放射免疫方法或观察其整体生物学效应。唯有朱作言等利用分子杂交技术在受体胚胎发育的肌肉效     

4月着手在普通试验田栽培重组番茄

农林水产省农业环境技术研究所申请在开放系试验田栽培在隔离试验田进行栽培实验的重组番茄。目前,重点是评价基因重组植物对环境的影响和安全性。今后,以育种母本的有用性的控制为中心。农林水产省认为,“本申请在日本是在开放系利用重组体的第一份申请”。农林水产省的“在农林水产领域应用重组体的指导方针”中提出基因重组植物商品化实验的4个步