碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的监测与分析

【摘 要】 目的 调查某医院碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌（carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE）的分布及耐药性。方法 收集2010年至2012年门、急诊和住院患者的细菌培养和药敏结果,对碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌感染病例进行回顾性分析追踪。结果 共检出碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌9株,均来自ICU,阴沟肠杆菌5株,占55.6%,肺炎克雷伯菌3株,占33.3%,大肠埃希菌1株,占11.1%。药敏结果显示对复方新诺明、环丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为55.7%、11.1%、11.1%,患者病情凶险,临床预后较差。结论 为某医院多重耐药菌的预防控制,以及合理使用抗生素提供依据。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床分布及耐药性

目的了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床分布及药物敏感性,为临床治疗提供参考。方法选取2013年1月至2014年12月临床感染患者中分离出的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌66株,采用Vitek 2Compact型全自动微生物分析系统进行细菌鉴定及药敏试验。结果 66株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的主要菌种有肺炎克雷伯菌41株(62.1%)、阴沟肠杆菌12株(18.2%)、大肠埃希菌10株(15.1%)、产气肠杆菌3株(4.6%)。科室分布以重症监护室(ICU)(48.6%)、急诊重症监护病房(EICU)(15.1%)、神经外科(12.1%)、呼吸重症监护室(RICU)(9.1%)、血液肿瘤内科(6.1%)为主。标本类型中,以痰液最为常见,占75.8%(50/66),其次是分泌物占16.7%(11/66)。66株耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌对氨苄西林、氨曲南、头孢唑啉、头孢曲松、头孢吡肟、头孢西丁、阿莫西林/克拉维酸及哌拉西林/他唑巴坦的耐药率均较高(80.0%),对阿米卡星和替加环素的耐药率较低(51.2%)。结论耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌存在着严重的多重耐药,临床治疗需根据药敏试验结果选择抗生素。     

阴沟肠杆菌耐碳青霉烯类抗生素的耐药机制研究进展

阴沟肠杆菌是肠杆菌科中常见的院内感染细菌,碳青霉烯类抗生素由于其抗菌谱广、抗菌力强,成为治疗产ESBLs和AmpC酶革兰阴性杆菌感染的有效抗菌药物.但随着碳青霉烯类抗生素的广泛应用,临床上出现很多耐碳青霉烯类抗生素的阴沟肠杆菌(carbapenem-resistant Enterobacter cloacae,CREL),本研究就其耐药机制,从产碳青霉烯酶和非产碳青霉烯酶两方面做一综述.     

MHT和mCIM试验检测肠杆菌科金属碳青霉烯酶效能的评价

目的 探讨改良Hodge试验（MHT）及改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）检测肠杆菌科细菌金属碳青霉烯酶的应用价值。方法 VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏系统进行细菌鉴定和药敏试验,筛选2015-2017年非重复临床分离的碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌,MHT及mCIM进行产碳青霉烯酶表型确证试验,PCR检测常见的金属碳青霉烯酶IMP-4、IMP-8、VIM-1、VIM-2、NDM基因。比较MHT及mCIM对肠杆菌科金属碳青霉烯酶的检测效能。结果 本实验共收集40株临床分离菌株,MHT阳性36株,阳性率90.0%。mCIM阳性39株,阳性率为97.5%。PCR产物测序Blast比对证实4株为产IMP酶菌株,5株产NDM型菌株,未检测到VIM基因。MHT试验检测IMP酶的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为100.0%、11.1%、11.1%、100.0%,MHT检测NDM酶分别为40.0%、2.9%、5.6%、25.0%。mCIM检测IMP酶的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别100.0%、2.8%、10.3%、100.0%,mCIM检测NDM型分别为100.0%、2.9%、12.8%、100.0%。结论 MHT及mCIM检测肠杆菌科细菌产金属碳青霉烯酶具有良好的灵敏度,但特异性偏低,应结合分子生物学方法进行检测,为感染控制提供保障。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌体外抗菌活性分析

目的了解临床分离的59株碳青霉烯酶类抗生素耐药的肠杆菌科细菌(CRE)体外药敏情况。方法采用法国生物梅里埃公司VITEK-2Compact全自动细菌分析鉴定系统进行细菌鉴定及药敏,MALDI-TOF MS确认。琼脂稀释法测定临床常用抗生素的最低抑菌浓度。结果分离的菌株以肺炎克雷伯菌为主。59株CRE除对亚胺培南和美罗培南耐药率100.0%外,对哌拉西林/他巴唑坦和阿莫西林/克拉维酸同样完全耐药。头孢他啶、头孢噻肟、氨曲南耐药率分别为91.5%、98.5%和94.8%。阿米卡星有较好的抗菌活性,耐药率为44.8%。替加环素耐药率最低,为22.0%。结论 CRE耐药率较高,头孢类、青霉素类及其复合制剂单独用药不适合作为本地区CRE菌株抗菌药物,需联合用药。替加环素目前可作为CRE理想用药,阿米卡星也可作为次选。     

宁波地区肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测研究

目的对宁波地区耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药情况和碳青霉烯酶耐药基因进行研究了解。方法收集2010年1月至11月耐亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)或厄他培南(ETP)的肠杆菌科菌株进行Hodge试验确认,对于阳性试验菌株PCR同时检测blaKPC、blaNDM-1、blaIMI-1、blaGES、blaSME、blaNmcA和blaSHV-387种基因。结果共收集到肠杆菌科细菌256株,其中耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌16株,占6.1%;采用改良Hodge试验确认阳性10株,占62.5%株。PCR检测显示10株均携带有blaKPC,其中肺炎克雷伯菌6株,产气肠杆菌2株,阴沟肠杆菌2株。结论宁波地区产blaKPC型碳青霉烯酶是肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类药物的关键因素,其编码基因位于可转移质粒进行传播使得目前的耐药情况越来越严峻。     

肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗菌药物耐药机制的研究进展

碳青霉烯类药物由于其良好的细胞通透性及高度的酶稳定性,是治疗产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶革兰阴性杆菌感染的有效抗菌药物,对肠杆菌科细菌有非常强的抗菌活性,但随着临床的广泛应用,临床已出现了对其耐药的肠杆菌科细菌,且不断有新的耐药基因被发现。本文就其耐药机制、检测方法、常用抗菌药物的选择及预防措施等问题作一综述。     

亚胺培南不敏感的阴沟肠杆菌碳青霉烯酶基因检测

为了解亚胺培南不敏感的阴沟肠杆菌碳青霉烯酶的主要基因型及其流行情况,收集哈尔滨医科大学附属第一医院临床分离出的亚胺培南不敏感的阴沟肠杆菌24株,采用Vitek-2 Compact进行细菌鉴定、药敏试验,聚合酶链反应（PCR）扩增,DNA测序确定菌株产碳青霉烯酶基因型情况。结果显示,24株阴沟肠杆菌均表现为多重耐药,20株菌扩增出KPC-2条带,经测序证实为KPC-2型碳青霉烯酶基因。该院亚胺培南不敏感的阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶的主要基因型别为KPC-2型,临床与实验室应加强监测和控制。     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测

摘要：目的 了解余姚地区耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌的耐药情况和碳青霉烯酶耐药基因类型。方法 收集2014年3月至12月耐亚胺培南和厄他培南的肠杆菌科细菌18株,进行Hodge试验确认。对于阳性试验菌株采用PCR法检测blaKPC、blaNDM-1、blaMH、blaGES、blaSME、blaNmcA和blaSHV-387种基因。结果 18株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌经改良Hodge试验确认阳性11株,占61.1%。经PCR检测显示11株均携带有blaKPC基因,其中肺炎克雷伯菌6株,大肠埃希菌3株,阴沟肠杆菌2株。结论 余姚地区耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌的耐药机制主要是blaKPC型碳青霉烯酶。     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测

目的了解余姚地区耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌的耐药情况和碳青霉烯酶耐药基因类型。方法收集2014年3月至12月耐亚胺培南和厄他培南的肠杆菌科细菌18株,进行Hodge试验确认。对于阳性试验菌株采用PCR法检测bla_(KPC)、bla_(NDM-1)、bla_(MH)、bla_(GES)、bla_(SME)、bla_(NmcA)和bla_(SHV-38)七种基因。结果 18株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌经改良Hodge试验确认阳性11株,占61.1%。经PCR检测显示11株均携带有bla_(KPC)基因,其中肺炎克雷伯菌6株,大肠埃希菌3株,阴沟肠杆菌2株。结论余姚地区耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌的耐药机制主要是bla_(KPC)型碳青霉烯酶。     

一株有脱硅作用的产气肠杆菌的筛选和鉴定

生物选矿以能耗低、污染少、适用于贫矿等优点而日益受到人们的关注。选矿菌种的分离和鉴定是进行生物选矿的首要环节。从菜园土中筛选到菌株S2-1,用该菌对伊利石矿粉进行了浸矿脱硅的实验,测得接种S2-1的溶液中的硅的浓度是对照液中的167.07%,说明S2-1对伊利石有脱硅作用。通过形态特征的观察,生理生化特性的测试,以及16S rRNA序列的比对分析,对菌株S2-1进行了鉴定。结果显示S2-1呈两端钝圆的短杆状,大小约1.3~1.5μm×0.4~0.6μm,革兰氏染色阴性,有端生鞭毛;生理生化特性的多项测试中大多数与产气肠杆菌(E.aerogenes)相同;16S rRNA序列的比对分析与产气肠杆菌(E.aerogenes)AF395913的同源性最高。实验结果表明S2-1属于产气肠杆菌(E.aerogenes)。本文还对产气肠杆菌的脱硅条件进行实验,结果表明,S2-1脱硅的最适条件是温度30℃,起始pH值7.0,装液量60 mL和转速200 r/min。     

Imipenem resistance in Enterobacter aerogenes is associated with derepression of chromosomal cephalosporinases and impaired permeability

Enterobacter aerogenes mutants with high-level resistance to imipenem were studied. They were derived from strains characterized by stable over-production of a class-I beta-lactamase. This enzyme (pI = 8.2) exhibited high affinity toward imipenem and hydrolysed the drug slowly. Imipenem-resistant mutants lacked a major 43-kDa outer membrane protein and displayed decreased permeability to cephaloridine. Introduction of a plasmid coding for the regulatory ampD gene abolished beta-lactamase production and rendered the mutants susceptible to imipenem.     

产气肠杆菌fhlA基因克隆、表达及重组菌株产氢量

【目的】本研究以产氢细菌产气肠杆菌Enterobacter aerogenes ATCC13408为研究对象,克隆甲酸-氢裂解酶(formate hydrogen lyase,FHL)系统的转录激活蛋白FHL activator(fhlA)基因,构建过表达重组菌株,以提高菌株产氢效率。【方法】利用简并引物和Genome walking技术,克隆fhlA的全长基因,将该基因连接到改造质粒pGEX-4T-2-Cat中,电击转化得到重组菌株,用厌氧发酵方法测定重组细菌的产氢量。【结果】E.aerogenes ATCC13408fhlA ORF全长2073bp,编码一个含690个氨基酸残基的蛋白(GenBank accessionGU188474)。SDS-PAGE和Western blot分析证明fhlA基因在重组菌中得到了融合表达。对重组后菌株的产氢量进行了测定,结果表明:底物产氢潜力由原来的1.23±0.08mol H2/mol葡萄糖提高到了1.48±0.04mol H2/mol葡萄糖,提高了20.36%。【结论】本研究首次克隆了E.aerogenes ATCC13408的fhlA基因,并将该基因在原菌中过量表达。重组后菌株的产氢量得到显著提高,为进一步研究和开发利用E.aerogenes ATCC13408的fhlA基因提供了基础。     

丁二酮高产菌株的选育及发酵动力学分析

目的：筛选出稳定的高产丁二酮突变菌株,并对其进行发酵动力学分析。方法：以原养型产气肠杆菌（Enterobacter aero-genes编号CICC 10293）为出发菌株,采用紫外线诱变,并结合亮氨酸平板和丁二酮平板筛选方法,获得耐高浓度底物——葡萄糖的高产丁二酮突变菌株,定名为UV-3,利用气相色谱测定代谢产物量,考察诱变前后菌株代谢途径中碳源的流向。基于Logistic和Luedeking-Piret方程,建立突变株UV-3细胞生长动力学、底物消耗动力学、丁二酮生成动力学模型,确定动力学方程。结果：突变株UV-3的丁二酮产量提高18.7倍,达到1.045g.L-1,乙偶姻产量降低48.4%,乙醇产量降低71.4%,乙酸产量提高34.6%,且遗传性质稳定。用实验数据对各种动力学模型进行了验证,拟合度均为98.5%以上。结论：紫外线是一种操作方便,效果良好的诱变方式。绘制了突变株UV-3的发酵曲线,建立了动力学模型,为优化丁二酮的生产工艺奠定一定的理论基础。     

产气肠杆菌EAM-Z1尿苷磷酸化酶的分离纯化及性质研究

从产气肠杆菌 (Enterobacteraerogenes)突变株EAM Z1中分离出一种具有较高转移酶活性的尿苷磷酸化酶 (UPase)。经测定这种Upase的分子量为 1 2 .8× 1 0 4,亚基分子量为 4 .3×1 0 4,由 3个同型亚基组成。N端氨基酸序列为 :MRMVDLIATKRDGGE。等电点为 4 .46。对尿苷的Km为 0 .2 9mmol L。酶反应的最适pH为 7.8,最适温度为 50℃。该酶能磷酸化尿苷、胸苷、5 氟尿苷、2′ 脱氧 5 氟尿苷及尿嘧啶 β D 阿拉伯呋喃糖 ,且具有较高的转移酶活性 ,能将尿苷和 5 氟尿嘧啶转化成 5 氟尿苷 (一种抗癌药物的中间体 ) ,其转化率为 47%。该酶的这些特性对于酶法合成核苷类抗肿瘤药物和抗病毒药物是十分有用的。     

Biodegradation Kinetics of Four Substituted Chlorobenzoic Acids by Enterobacter aerogenes

Enterobacter aerogenes is generally found in soil, sewage plants, and human gastrointestinal tract. Thus, this study was conducted to evaluate the ability of Enterobacter aerogenes to degrade four chlorobenzoic acid compounds (2-chlorobenzoic acid (2-CBA), 3-chlorobenzoic acid (3-CBA), 4-chlorobenzoic acid (4-CBA), and 3,4-dichlorobenzoic acid (3,4-dCBA)) in minimal salt medium. Enterobacter aerogenes was partially able to degrade and dechlorinate these CBAs at concentration of 3.5 mM within 72 h of incubation. According to Haldane single-substrate model, the values of maximum predicted growth rate (μ_max), half saturation constant (K _s), and inhibition constant (K _i) fell in the range of 0.2–0.8 h^?1, 8–41 mM, and 5–53 mM, respectively. Based on the estimated values of both α, a growth-associated constant, and β, a non–growth-associated constant, the production of chloride was predominantly growth associated, since negligible values of the β were determined. Haldane model gave a good prediction of the CBA substrate utilization and degradation, and was in a very good agreement with the experimental data. Because of the capability of Enterobacter aerogenes to utilize these aromatic compounds as carbon and energy sources, this microorganism can be a valuable and promising candidate for use in the biotreatment of wastewater and soil samples contaminated with mixtures of chlorobenzoates.     

Chromate reductase activity of Enterobacter aerogenes is induced by nitrite

Abstract A chromate resistant mutant of Enterobacter aerogenes manifested its chromate resistance only under aerobic conditions. Both parent and mutant showed substantial levels of anaerobic chromate reductase activity when grown on glycerol plus fumarate. The chromate reductase was further induced by growth in the presence of nitrite but was repressed by nitrate. The chromate reductase activity paralleled that of the formate-linked nitrite reductase. There was no significant difference in chromate reductase levels between the parent and its chromate resistant mutant, indicating that this enzyme activity is not, in fact responsible for chromate resistance as was suggested previously by others.     

Rapid detection of a gfp-marked Enterobacter aerogenes under anaerobic conditions by aerobic fluorescence recovery

A gfp- and kanamycin-resistance gene-containing plasmid pUCGK was successfully constructed and transformed into Enterobacter aerogenes to develop a rapid GFP-based method for quantifying the bacterial concentration under anaerobic conditions for production of biohydrogen. Since the use of GFP as a molecular reporter is restricted by its requirement for oxygen in the development of the fluorophore, fluorescence detection for the fluorescent E. aerogenes grown anaerobically for hydrogen production was performed by developing a method of aerobic fluorescence recovery (AFR) of the anaerobically expressed GFP. By using this AFR method, rapid and non-disruptive cell quantification of E. aerogenes by fluorescence density was achieved for analyzing the hydrogen production process.     

Cloning and sequencing of genes encoding the beta subunits of the ATP-synthases from Enterobacter aerogenes and Flavobacterium ferrugineum

Abstract The genes encoding the β-subunit of the ATPase from Enterobacter aerogenes and Flavobacterium ferrugineum were cloned and their sequences determined. The predicted amino acid sequences were compared with the corresponding proteins from other eubacteria. Homology values of 58–98% confirmed the highly conserved character of the ATPase β-subunit. The enterobacterial ( Escherichia coli, E. aerogenes ) β-subunits represent the shortest sequences, whereas the corresponding F. ferrugineum protein exhibits an additional 33 amino acid residues as insertions at three different locations.