PCR检测血清HBV DNA

本文利用ＨＢＶ ＤＮＡ基因组ｐｒｅＣ和Ｃ区的一套引物,以ＰＣＲ法检测了２６例健康正常人血清和９５例免疫标志各异、临床症状不同的乙肝或可疑乙肝患者的血清,前者无１例检出ＨＢＶ ＤＮＡ,后者共检出的６６例血 清存在ＨＢＶ ＤＮＡ。该方法特异性强,适用于检测任一亚型的ＨＢＶ ＤＮＡ,一轮ＰＣＲ最低可检出０．１ｐｇ的ＨＢＶ ＤＮＡ。     

不同临床类型乙型病毒感染者外周血T 细胞亚群与血清HBV DNA 载量 及HBeAg 滴度相关性分析

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血T细胞亚群与血清HBV DNA载量及HbeAg滴度的关系。方法:选取103名HBV感染患者和20名健康者为研究对象。流式细胞术检测外周血T细胞亚群,聚合酶链式反应及酶免疫分析法分别检测血清HBV DNA载量及HbeAg滴度。结果:慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者外周血CD3+T、CD4+T淋巴细胞亚群百分数低于健康对照组,结果有统计学意义(P<0.05或0.01;而CD8+T细胞亚群则呈现相反趋势,结果亦有统计学意义(P<0.05或0.01)。HBeAg阴性组中,HBVDNA水平与CD8+T细胞亚群百分数呈正相关(r=0.567,P<0.01),与CD4+/CD8+T细胞亚群百分数比值呈负相关(r=-0.601,P<0.01),而与CD3+T、CD4+T细胞亚群百分数无相关性。HBeAg阳性组中,HBV DNA水平及HbeAg滴度与CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞百分数及CD4+/CD8+T细胞百分数均无相关性(P>0.05)。结论:不同临床类型的慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血T细胞亚群存在不同程度细胞免疫功能降低和细胞免疫调节异常。HbeAg阴性的HBV感染患者,其血清HBV DNA水平与外周血T淋巴细胞免疫存在相关性。     

HBV-DNA与乙型肝炎血清标志物的相关性分析

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）DNA载量与其血清标志物的相关性。方法：运用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测503例患者HBV．DNA载量和HBV血清标志物。根据HBV血清标志物结果分为大三阳组、小三阳组、少见模式组、抗体阳性及全阴组,比较各组间HBV—DNA的阳性率及定量值。结果：在大三阳组、小三阳组、少见模式组、抗体阳性及全阴组HBV—DNA的阳性率分别为90％、65．1％、65．2％、2．0％,HBV—DNA的定量结果（10gHBV—DNA）别为6．32±1．96、2．01±1．68、3．48＋2．52f抗体阳性及全阴组阳性例数过低,不纳入统计）。大三阳组HBV—DNA的阳性率显著高于小三阳组（P〈0．05）。大三阳组、小三阳组HBV—DNA的阳性率与少见模式组比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）,但大三阳组、小三阳组、少见模式组HBV．DNA的阳性率均显著高于抗体阳性及全阴组（P〈0．01）。HBsAg、HBeAg阳性组HBV—DNA的阳性率分别显著高于HB—sAg、HBeAg阴性组（P〈0．01）。小三阳组、少见模式组HBV．DNA载量均显著低于大三阳组（P〈0．01）,少见模式组HBV—DNA载量显著高于小三阳组（P〈0．05）。结论：HBV—DNA的阳性率与HBeAg、HBsAg相关;HBV—DNA栽量与HBV血清标志物模式相关。     

不同方法检测血清HBV DNA水平的比较

目的:研究不同方法检测血清HBVDNA水平的比较.方法:采用151份标本分别采用COBAS Amplicor、实时定量PCR(LightCycler及Mx3000p)方法进行平行检测.结果:①检测灵敏度:COBAS Amplicor方法灵敏度高于实时PCR方法(P=0.005、0.014),而Mx3000p灵敏度高于LightCycler方法(P=0.042).②相关性:实时定量PCR(LightCycler及Mx3000p)与COBAS Amplicor方法所测HBV DNA结果均呈线性相关(r=0.842,P＜0.01;r=0.946,P＜0.01).结论:实时定量PCR方法是较为经济且准确的HBV DNA检测方法,而Mx3000p在准确性和灵敏度上可能优于LightCycler方法.     

乙型肝炎患者HBV复制水平的定量PCR研究

本文采用定量ＰＣＲ方法观察了慢性乙型肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ的复制水平。结果表明在ＨＢｅＡｇ阳性患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率和水平显著高于ＨＢｅＡｇ阴性患者（Ｐ＜０．０１）;血清ＨＢＶ－ＤＮＡ水平的高低与ＡＬＴ异常情况未发现有相关性。     

基线血清外泌体miR-155-5p联合乙型肝炎病毒DNA定量实验预测聚乙二醇干扰素治疗乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎的疗效

探讨聚乙二醇干扰素(peginterferon, Peg-IFN)治疗乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)阳性慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者48周后,基线血清外泌体miR-155-5p表达水平联合乙型肝炎病毒DNA定量实验在预测HBeAg血清学转换中的价值。回顾性分析2016年6月至2019年6月在本中心初次接受抗病毒治疗的HBeAg阳性CHB患者88例。根据Peg-IFN治疗48周后是否发生HBeAg血清学转换,将患者分为治疗应答组和无应答组。采用多因素logistic回归探讨预测Peg-IFN治疗应答的因子,并应用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线下面积评估预测效能。结果发现基线血清外泌体miR-155-5p(OR＝2.193,95% CI 1.315～3.655,P＝0.003)和HBV DNA(OR＝0.398,95% CI 0.163～0.976,P＝0.036)是Peg-IFN治疗效果的独立预测因子。基线血清外泌体miR-155-5p和HBV DNA的截断值分别取2.3和7.2 log₁₀IU/mL时,相应的ROC曲线下面积分别为0.788(95% CI 0.682～0.893)和0.704(95% CI 0.577～0.824)。基线血清外泌体miR-155-5p表达水平≥2.3且HBV DNA定量≤7.2 log₁₀IU/mL的患者,Peg-IFN治疗48周后其HBeAg血清学转换率最高,为66.67% (10/15);而基线血清外泌体miR-155-5p表达水平<2.3且HBV DNA定量>7.2 log₁₀IU/mL的患者,Peg-IFN 治疗48周后其HBeAg血清学转换率最低,仅为3.03%(1/33)。这些结果表明,基线血清外泌体miR-155-5p表达水平联合HBV DNA定量实验可以作为Peg-IFN 治疗HBeAg阳性CHB疗效的预测因子,对于优化CHB的抗病毒治疗有积极作用。     

乙型肝炎病毒DNA的结构

乙型肝炎病毒(Dane颗粒)的直径为42nm,由三部分组成。 一、外壳:厚7nm,由奴层脂质组成,嵌入50～60个亚简位,有些含有HBsAg,有些同时含有前基因产物。 二、核心:为二十面体的对称结构,直径为27nm。 三、HBV DNA(乙型肝炎脱氧核糖核酸)含有小的环状DNA分子。在感染的肝细胞内能够检出游离的或整合的病毒DNA。 HBV的外壳和核心分别在感染细胞核内和胞浆内合成,然后在胞浆内装配成Dane颗粒。     

黑龙江省乙型肝炎血清流行病学调查分析

为了掌握黑龙江省乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)流行现状和人群免疫水平,评价我省儿童乙肝疫苗预防接种效果,为制订乙肝预防控制策略提供依据。采用横断面调查方法,选择全省7个国家级疾病监测点,在每个监测点随机抽取2个乡级单位,1～59岁作为目标人群共调查3337名人群。黑龙江省1～59岁人群乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性率、乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)阳性率和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)阳性率经标化后为5.65%、55.45%、30.50%,1～3岁人群乙肝表面抗原阳性率明显低于15～59岁人群。1～3岁、4～10岁和11～14岁人群乙肝疫苗全程接种率为99.43%、89.40%和64.81%;首针及时接种率分别为86.64%、75.57%和49.87。城市和农村HbsAg阳性率分别为3.26%和5.04%。医院出生儿童乙肝疫苗首针及时接种率高于在家出生儿童。结果显示接种乙肝疫苗可明显提高抗-HBs阳性率,提高人群对HBV的免疫保护能力,降低HBsAg携带率。     

乙肝患者血清的HBV-DNA含量与ALT水平的关系研究

目的:探讨和研究乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)DNA复制水平与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的关系,为临床中乙肝患者的诊治提供参考。方法:对240例慢性乙型肝炎患者采用荧光标记定量PCR方法测定血清HBV-DNA含量,采用全自动生化分析仪测定血清ALT水平,比较和分析HBV-DNA含量与ALT水平之间的关系。结果:慢性乙肝轻、中、重度患者的HBV-DNA含量三组之间差异有统计学意义(p0.01),肝脏的损害程度与HBV-DNA含量之间具有一定的关联,等级相关系数为0.162(P=0.012);ALT水平也与HBV-DNA载量之间存在关联,等级相关系数为0.371(P0.0001)。结论:肝损伤程度与HBV-DNA含量有显著相关性;同时血清ALT水平与HBV-DNA含量呈正相关。检测血清中的HBV-DNA含量和ALT水平为指导乙肝患者HBV感染、复制、传染性的判断、治疗方案的选择和疗效评定提供有一定的依据。     

~(125)Ⅰ标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用

本文报道用国产~125I-碘化钠标记乙型肝炎病毒DNA制备探针,可得到较高比度的产物,一般稳定在10~7—10(?)cpm/μg DNA。用该探针对不标记的乙型肝炎病毒DNA进行点分子杂交。可检测到5pg左右DNA。对17例血液标本进行点分子杂交,结果与32p-标记乙型肝炎病毒DNA探针杂交结果基本一致。     

不同临床类型乙型病毒感染者外周血T细胞亚群与血清HBVDNA载量及HBeAg滴度相关性分析

目的：探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血T细胞亚群与血清HBVDNA载量及HbeAg滴度的关系。方法：选取103名HBV感染患者和20名健康者为研究对象。流式细胞术检测外周血T细胞亚群,聚合酶链式反应及酶免疫分析法分别检测血清HBVDNA载量及HbeAg滴度。结果：慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者外周血CD3可、CD4T淋巴细胞亚群百分数低于健康对照组,结果有统计学意义（P〈0．05或0．01;而CD8＋T细胞亚群则呈现相反趋势,结果亦有统计学意义（P〈0．05或0．01）。HBeAg阴性组中,HBVDNA水平与CD8T细胞亚群百分数呈正相关（r=0．567,P〈0．01）,与CD47CD8＋T细胞亚群百分数比值呈负相关（r=-0．601,P〈0．01）,而与CD3＋T、CD4＋T细胞亚群百分数无相关性。HBeAg阳性组中,HBVDNA水平及HbeAg滴度与cD3＋1r、cD41、CD8叮细胞百分数及CD47CD8＋T细胞百分数均无相关性（P〉0．05）。结论：不同临床类型的慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血T细胞亚群存在不同程度细胞免疫功能降低和细胞免疫调节异常。HbeAg阴性的HBV感染患者,其血清HBVDNA水平与外周血T淋巴细胞免疫存在相关性。     

内蒙古地区乙型肝炎病毒的基因分型及临床意义

为了探讨乙型肝炎病毒在内蒙古地区的基因分型,为本地区乙型肝炎的临床治疗、病情进展和发病机制等方面研究提供有益的实验依据。2013年7月至2014年7月本研究在内蒙古自治区人民医院、内蒙古医科大学第一附属医院、通辽市医院的门诊及住院病例中随机选取已感染乙型肝炎病毒的253例。以荧光定量PCR法检测HBV基因分型和HBV病毒基因载量,Elisa法检测血清标志物HBeAg,全自动生化分析仪检测ALT、AST、TBA、TBIL和ALB。实验发现,内蒙古地区253例患者HBV基因分型结果以B型(49例,19.37%)、C型(188例,74.31%)为主,且C基因型显著多于B基因型(p<0.05);HBeAg阳性率为67.59%,且C基因型HBeAg阳性率高于B基因型;高载量病例中B型占31例(63.27%),而C型占162例(86.17%),C基因型组中HBV DNA载量显著高于B基因型组(p<0.01);B基因型与C基因型TBA、TBIL和ALB结果比较差异无统计学意义(p>0.05),但C基因型的ALT和AST这两项生化指标均显著高于B基因型组(p<0.05)。本研究结果初步说明,内蒙古地区HBV感染以B型和C型为主,尤以C型居多;且C型病毒的复制较活跃,致病力较强,HBV感染者更易转成严重肝病。     

IFNL4 rs12979860 polymorphism influences HBV DNA viral loads but not the outcome of HBV infection in Moroccan patients

ObjectivesThe interferon (IFN) is known to bridge innate and adaptive immune responses, and to play a critical role particularly against hepatitis B virus (HBV) infection. Defects in IFN signals may result, therefore, in attenuated responses against HBV. Accordingly, polymorphisms in genes coding for immune response effectors may affect the clinical outcome of HBV infection. We analyzed the putative association between IFNL4 rs12979860 polymorphism and the outcome of HBV infection in Moroccan patients.MethodsIn this study, 237 chronic HBV (CHB) patients and 129 spontaneously resolved HBV (SRB) individuals were enrolled and genotyped using a predesigned Taqman allelic discrimination assay.ResultsOur data show a significant increase of HBV DNA loads in patients with IFNL4 rs12979860 CC genotype compared to patients with CT and TT genotypes (p = 0.0008). However, there was no consistent association between IFNL4 rs12979860 polymorphism and the outcome of HBV infection.ConclusionsAlthough IFNL4 rs12979860 polymorphism seems to modulate circulating HBV DNA levels, it is disconnected from chronic disease progression. This observation suggests that the role of rs12979860 in liver disease is restricted to viral control and inactive in the deleterious immune pathology that affects liver tissue. Taken together, our data suggest that rs12979860 CC genotypes could be useful as a predictor of success or failure of IFN-based therapy in chronic HBV-infected patients.     

未经抗病毒治疗慢乙肝患者YMDD变异检测及HBV基因分型

目的 :探讨未接受拉米呋啶及干扰素抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中YMDD是否存在变异及HBV的基因亚型。方法 :采用PCR荧光分子信标探针检测技术及PCR微板核酸杂交 ELISA技术进行HBVYMDD变异株 (YIDD YVDD)及HBV基因分型检测。结果 :2 9例慢性乙肝患者HBVYMDD变异阳性 6例 ,阳性率为 2 0 6%。 5例变异阳性中 3例为YIDD阳性 ,2例为YVDD阳性 ,6例均为YMDD野生株和变异株同时存在 ;HBV基因亚型以C、B、D亚型为主 ,分别占41 3% ( 1 2 2 9)、2 4 1 % ( 7 2 9)、2 0 6% ( 6 2 9)。结论 :在未经抗病毒治疗的慢乙肝患者中存在YMDD变异株 ,临床上在应用拉米呋啶对慢性乙型肝炎患者进行抗病毒治疗前 ,应对患者是否存在YMDD变异加以重视 。     

乙型肝炎病毒外膜大蛋白和HBVDNA血清学诊断价值

目的探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白和HBV-DNA在乙肝患者中的血清学诊断价值。方法收集乙肝两对半(HBV-M)中HBsAg阳性血清标本260例作为乙肝研究组,乙肝两对半(HBV-M)阴性血清标本100例作为正常对照组;在不同乙肝模式中采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HBV-LP和Pre-S1,荧光定量PCR检测HBV DNA;比较HBeAg血清中HBV-LP与HBV-DNA和不同HBV-DNA拷贝数的条件下HBV-LP与HBV-DNA剂量关系。结果HBsAg阳性血清中HBV-LP、HBV-DNA和Pre-S1阳性率分别为68.46%、63.08%和24.23%;HBeAg阳性标本中HBV-LP、HBV-DNA和Pre-S1阳性率分别为94.87%、94.87%和79.49%;HBeAg阴性标本中HBV-LP、HBV-DNA和Pre-S1阳性率分别为62.64%、49.45%和0.55%,HBV-LP和HBV-DNA二者检出一致率为67.03%[(50+72)/182];HBV-LP吸光度(A值)与HBV DNA呈正相关。结论HBV-LP与HBV-DNA在HBeAg阳性血清中代表病毒复制具有较高检出一致率;HBV-LP与HBV-DNA在HBeAg阴性血清中具有较大的差异性,HBV-DNA阴性血清中检测HBV-LP反应乙肝病毒复制对乙肝抗病毒治疗更有重要意义;HBV DNA拷贝数与HBV-LP含量呈正相关系。     

利用基因芯片分析拉米夫定治疗过程中HBV DNA的基因变异

依据乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus; HBV)聚合酶基因序列研制HBV基因芯片,此芯片可分析HBV的7个基因型、4种血清型和HBV聚合酶基因rtV173、rtL180、rtM204和rtV207位点的突变.利用此芯片对A、B两组共计45例拉米夫定治疗12个月的患者进行服药前和服药后3、6、9、12个月的动态检测,其中C基因型39例,且血清型均为adr;B基因型6例,其血清型均为adw.在完成全程检测的38例患者中,17例ALT升高的A组出现1例拉米夫定耐药变异株,而21例ALT正常的B组出现4例变异株,且所有变异株均为rtM204 V/rtL180M,其中2例野生株和变异株共存.rtM204V变异最早在服药6个月时出现,随后出现rtL180M变异.10份PCR产物测序分析表明,芯片检测结果与测序结果基本一致,仅在rtL173位点出现1例差异.进一步分析HBV DNA变异与HBV DNA含量、ALT水平和HBeAg血清转换率的相关性,初步结果表明变异株的出现与治疗过程中的DNA反弹呈正相关,而与起始HBV DNA水平、ALT值无关联.HBV基因芯片可初步用于HBV DNA 检测,可能是临床追踪评价抗病毒治疗效果的较好方法之一.     

利用基因芯片分析拉米夫定治疗过程中HBV DNA的基因变异

依据乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus;HBV)聚合酶基因序列研制HBV基因芯片,此芯片可分析HBV的7个基因型、4种血清型和HBV聚合酶基因rtV173、rtL180、rtM204和rtV207位点的突变。利用此芯片对A、B两组共计45例拉米夫定治疗12个月的患者进行服药前和服药后3、6、9、12个月的动态检测,其中C基因型39例,且血清型均为adr;B基因型6例,其血清型均为adw。在完成全程检测的38例患者中,17例ALT升高的A组出现1例拉米夫定耐药变异株,而21例ALT正常的B组出现4例变异株,且所有变异株均为rtM204 V／rtL180M,其中2例野生株和变异株共存。rtM204V变异最早在服药6个月时出现,随后出现rtL180M变异。10份PCR产物测序分析表明,芯片检测结果与测序结果基本一致,仅在rtL173位点出现1例差异。进一步分析HBV DNA变异与HBV DNA含量、ALT水平和HBeAg血清转换率的相关性,初步结果表明变异株的出现与治疗过程中的DNA反弹呈正相关,而与起始HBVDNA水平、ALT值无关联。HBV基因芯片可初步用于HBV DNA检测,可能是临床追踪评价抗病毒治疗效果的较好方法之一。     

基因工程乙肝疫苗研究进展

乙肝病毒(hepatitisBvirus,HBV)为嗜肝病毒,全世界有超过3亿人受到乙肝病毒的感染。综述近年来乙肝疫苗的最新研究进展,并对乙肝疫苗的发展历程,应用中出现的问题,克服不应答及低应答的策略,乙肝疫苗的发展方向以及目前最新的DNA疫苗进行了阐述 。     

乙肝病毒核衣壳启动子内三链DNA的形成

用电泳迁移分析方法研究了２１ｎｔ脱氧寡核苷酸Ｇ３ＴＧ２ＴＧＴ２Ｇ５ＴＧ２ＴＧＴ（ＣＰ１）与１２９ｂｐ的乙肝病毒（ＨＢＶ）核衣壳启动子（Ｃｐ）片段内一位点结合形成的三链ＤＮＡ的特异性及稳定性．在克隆有ＨＢＶ基因组的质粒ｐＣＰ１０的酶切产物中,ＣＰ１仅与含Ｃｐ的１２９ｂｐ片段结合．在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中其解离常数（Ｋｄ）为１．４×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．不同离子稳定三链ＤＮＡ的效果依次为ｓｐ４＋（精胺）＞Ｍｇ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｎａ＋＞Ｋ＋,离子之间存在相互竞争作用．比ＣＰ１多一误配碱基的脱氧寡核苷酸Ｇ２ＴＧ２ＴＧＴＧ３ＴＧ２ＴＧ２ＴＧ２Ｔ（ＣＰ２）在２０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋溶液中与Ｃｐ结合的Ｋｄ值约为ＣＰ１的１／７,而在６０ｍｍｏｌ／ＬＫ＋或５ｍｍｏｌ／ＬＺｎ２＋溶液中检测不到它与Ｃｐ的结合,这进一步显示了三链ＤＮＡ形成的特异性．细胞的生理离子浓度被认为是：Ｓｐ４＋１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋１０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＋１４０ｍｍｏｌ／Ｌ,因此,ＣＰ１在细胞内将能特异地与Ｃｐ结合并具有较好的稳定性．