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汪晓辉 《国外医学:分子生物学分册》1996,18(4):160-164
连接酶链反应(LCR)是继PCR后新发展的一些较有前景的体外核酸扩增技术。四条寡核苷酸引物在耐热连接酶作用下通过变性、复性、连接完成核酸的体外扩增,可准确地检测靶基因上的单个或几个碱基的突变,在遗传性疾病、肿瘤和病原微生物的快速、准确检测上有着广泛的应用前景。本综述了该技术的原理、方法及近年来的初步应用。 相似文献
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PCR——四步两段扩增法分离人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因 总被引:2,自引:0,他引:2
引物是决定PCR结果的关键,本实验中,引物Ⅰ,Ⅱ虽有26个碱基,但由于其5′端有8个碱基为限制性内切酶的识别序列,所以实际上只有18个碱基与原始模板互补配对,采用标准的PCR方法时不能产生理想结果,经采用PCR-四步两段扩增法从人胎盘cDNA文库中分离得到了-484bp的DNA片段。通过斑点杂交鉴定,结果表明该DNA片段为hbFGF基因。 相似文献
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大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
用RT-PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑神经元特异性烯醇化酶的cDNA,将此包括编码全长NSE433个氨基酸的DNA片段重组入pUC质粒,并用PCR方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Wistar大鼠与Forss-Petter报导的SD大鼠NSE基因顺序,有两处单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变,同时还对RNA的提取及长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
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人血小板生成素(hTPO)的cDNA克隆,序列测定及其在COS—7细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
本文利用反转录PCR技术从人胎肝mRNA中分别扩增出hTPO N-端和C-端两个cDNA片段,然后经酶切分别连接重组到质粒pUC19中进行序列分析,在确证其序列与国外文献报道完全一致的基础上,酶切、回收、连接其N-端、C端cDNA,并以此为模板,用PCR法扩增出全长TPOcDNA片段,并将其重组到穿梭质粒pSVK3中,在COS-7中进行了瞬时表达并检测出表达产物的活性 相似文献
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用毛细管电泳技术检测DNA点突变 总被引:1,自引:0,他引:1
毛细管电泳(CE)是90年代初发展起来的新技术,具有分辨率高、重现性好、灵敏度高、快速和易于实现自动化的特点。后来又发展了激光诱导荧光检测器(LIF),大大提高了分析灵敏度,对微量样品如单细胞分析等,具有很大的优势。通常,利用CE技术可以在20min内分析完成几千个碱基的DNA片段。CE可以应用于DNA点突变的检测,目前在PCR基础上利用CE技术对DNA已知点突变及未知点突变的检测发展十分迅速。1.已知点突变的检测1.1 扩增抗拒突变系统PCR(ARMSPCR)和短串联重复PCR(STRPCR) ARMSPCR和S… 相似文献
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用RT-PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)的cDNA,将此包括编码全长NSE433个氨基醚的DNA片段重组入pUC质粒,并用PCR方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Wistar大鼠与Forss-Petter报导的SD大鼠NSE基因顺序,有两外单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对RNA的提取及长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献
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人基因组YAC克隆DNA的Alu-PCR反应条件的系统研究 总被引:2,自引:0,他引:2
在人基因组YAC克隆的Alu-PCR指纹分析中要求DNA且扩增带具有YAC特征性;在用AlU-PCR方法对YAC克隆中的人类基因组DNA片段进行特异的同位素标记时则要求被扩增标记的DNA序列在插入片段中具有一定的弥散性。我们建立了两种不同的Alu-PCR反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果。根据不同条件下的Alu-PCR结果,分析了多引发位点PCR中的一些现象,并作出了解释。 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKSDNA的多克隆位点及其侧翼序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核型多角体病毒(LsNPV)的EcoRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终止法/PCR扩增/银染色,从片段两端测定了全部919bp序列,这种ddNTP/PCR/银染测序法简化了操作,大大缩短了测序模板的制备时间,易于实现自动化操作。 相似文献
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人基因组YAC克隆DNA的Alu—PCR反应条件的系统研究 总被引:3,自引:0,他引:3
在人基因组YAC克隆的Alu-PCR指纹分析中要求DNA扩增带具有YAC特征性;在Alu-PCR方法对YAC克隆中的人类基因组DNA片段进行特异的同位素标记时则要求被增标记的DNA序列在插入片段中具有一定弥散性,我们建立了两种不同的Alu-PCR反应体系以满足这一不同要求,并已得到较为满意的结果,根据不同条件下的Alu-PCR结果,分析了多引发位点PCR中的一些现象,并作了解释。 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKS DNA的多克隆位点及其侧冀序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核多角体病毒(LsNPV)的EooRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终点 相似文献
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扩增大段靶DNA的PCR方法 总被引:3,自引:0,他引:3
扩增大段靶DNA的PCR方法陈尚武,王章(中山大学生命科学学院,广州)PCR和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Taq(Thermusaquaticus)DNA聚合酶的应用以及PCR技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使DNA片段的PCR扩增成... 相似文献
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RAPD在植物育种上的应用及其技术校正 总被引:1,自引:0,他引:1
RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) ,是在PCR的基础上发展起来的一种DNA多态性检测技术 ,由Willams[1] 和Welsh[2 ] 于 1990年建立 ,原理是以一系列不同的 ,少数碱基组成的随机核甘酸序列为引物 ,对样本基因组DNA进行PCR扩增 ,每个RAPD片段的产生要求在可增范围内存在与引物匹配的反向互补序列。引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间碱基的缺失插入或转换都能导致扩增片段的数目和长度的差异 ,经PAGE或琼脂糖凝胶电泳分离和EB染色来检测DNA片段的多态… 相似文献
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为了获得HIV辅助受体CXCR4基因,进一步探索艾滋病(AIDS)的诊断、防治方法,采用逆转录巢式聚合酶链式反应(RT-nPCR)从中国人外周血淋巴细胞中克隆了CXCR4 cDNA基因,得到了预期的1 100bp左右的片段。将PCR产物与T载体连接,并进行了酶切反应鉴定,获得与T载体正向连接的克隆。测序结果表明:克隆的片段含有一个开放性阅读框架,编码352个氨基酸残基。搜索GenBank,目标片段与M99293、XM051223、XM051224、 XM051225有很高的同源性,比较结果显示:克隆的片段包括完整的编码序列,含两个碱基的差异。 相似文献
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人Nmi mRNA编码区存在变异形式 总被引:1,自引:0,他引:1
Nmi基因编码一种可与Myc相互作用的蛋白质.在人红白血病细胞系TF-1细胞去细胞因子GM-CSF后8h,发现NmiRNA表达水平升高.利用PCR方法从中扩增NmicDNA编码区,发现除正常大小的扩增片段外,还有一比公布核酸序列小约100~200bp的扩增片段.序列分析表明该片段为编码区第337~509位的碱基缺失,由GTTCCATTGCG11个碱基取代,形成一个开放读码框架,编码254个氨基酸,比野生型Nmi编码的307个氨基酸少53个氨基酸. 相似文献
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特超强毒型马立克病病毒囊膜糖蛋白Ⅰ基因序列及与其它致病型毒 … 总被引:2,自引:0,他引:2
特超强毒型648A株马立克病病毒(MDV)的囊膜糖蛋白I(gI)基因经PCR扩增后克 进pUC18质粒载体,并对其ORF完成了DNA测序。与已发表的其它室致病型毒株的糖蛋白I的DNA和氨基酸序列比较表明,648A株的gI基因序列与超强毒RBIB株已发表的ORF5’端761个碱基完全相同。查是在该基因中完整ORF的1068个碱基中,648A与强毒GA株间有8个碱基变异并导致7个氨基酸的变化,且这一变 相似文献
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核酸扩增技术在感染常规诊断中的作用已被确认,技术不仅包括多聚酶链反应(PCR),而且也包括连接酶链反应(LCR),自我持续序列复制(3SR),扩增探针和Qβ复制酶。本文综述了LCR在衣原体检测中的应用,并与其它方法进行了比较,以助于了解LCR技术在衣原体诊断中的应用优势。 相似文献