抗乙型肝炎表面抗原不同亚型单克隆抗体细胞株的建立和鉴定

乙型肝炎病毒表面抗原主要的５个不同亚型,是乙肝病毒不同遗传型变种表型的表达,通过四次细胞融合获得了抗－ａ、抗－ｄ、抗－ｙ、抗－ｗ亚型的单克隆抗体,并作了鉴定及初步应用,为进一步对乙肝亚型分型试剂的研制打下了良好的基础     

不同感染状态下EB病毒核抗原亚型表达的研究

本实验用免疫印迹法纯化的抗ＥＢＮＡ亚型抗体,结合显微荧光分光光度检测技术,检测在不同感染状态下,三种亚型ＥＢＮＡ抗原在细胞中的表达程度。结果表明,处于潜伏感染状态下的Ｒａｊｉ细胞ＥＢＮＡ－１表达量较大,经巴豆油和正丁酸诱导进入钝挫感染状态后ＥＢＮＡ－１表达减少,而ＥＢＮＡ－２的表达增强。Ｂ＿（９５－８）细胞也有相似的趋势。表明ＥＢ病毒的激活可能与不同ＥＢＮＡ亚型表达量的改变有关。     

大鼠左心房α1受体及其亚型对β受体正性变力效应的影响

本文用放射配体结合实验研究了α１－肾上腺素受体（α１－ＡＲ）及亚型在大鼠左心房的分布。结果表明,大鼠左心房α１－ＡＲ有α１Ａ与α１Ｂ两种亚型,α１Ａ亚型约占１／３,α１Ｂ亚型占２／３。离体灌流左心房功能实验结果表明,α１－ＡＲ不同亚型对β肾上腺素受体（β－ＡＲ）所介导的正性变力反应具有不同性质的协同作用。当酚妥拉明１０μｍｏｌ／Ｌ同时阻断α１Ａ与α１Ｂ亚型时,ＮＥ（同时激动α１－与β－ＡＲ）的剂量－收缩效应曲线显著左移,当用ＣＥＣ２０μｍｏｌ／Ｌ预处理以阻断α１Ｂ亚型时,ＮＥ的剂量－收缩效应曲线则显著右移,而用ＷＢ４１０１１ｎｍｏｌ／Ｌ阻断α１Ａ亚型后,ＮＥ的剂量－收缩效应曲线出现左移;此外,当用苯肾上腺素激动α１－ＡＲ时,异丙肾上腺素的剂量－收缩效应曲线亦显著右移。提示α１Ａ亚型可抑制β－ＡＲ介导的正性变力效应,而α１Ｂ亚型则可增强β－ＡＲ所介导的反应,但当α１－ＡＲ的上述两种亚型同时激动时,则以α１Ａ亚型的调节作用为主。     

佛波酯对A—549细胞株中蛋白激酶C的调节

探讨了佛波酯（ｐｈｏｒｂｏｌ １２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３－ａｃｅｔａｔｅ,ＰＭＡ）对人肺癌表皮细胞株Ａ－５４９细胞中数种蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ,ＰＫＣ）亚型的调节作用,用蛋白质免疫印迹法在Ａ－５４９细胞中检测到有ＰＫＣ－α、ＰＫＣ－βⅡ、ＰＫＣ－γ、ＰＫＣ－δ和ＰＫＣ－ε等亚型的表达,但未检测到ＰＫＣ－ζ的表达。ＰＭＡ对细胞的短时间处理诱导所有这５种亚型的不同程序的转位（     

基因工程人干扰素α2b和α2a亚型抗病毒效应的实验研究

本文采用鸡胚接种法和微量细胞病变抑制法研究了不同亚型α干扰素（α２ａＩＦＮ和α２ｂＩＦＮ）抗流感病毒、脊髓灰质炎病毒以及麻疹病毒的作用。结果表明：两种亚型α干扰素均显示明显的抗病毒效应,其中（１）α２ｂＩＦＮ抗流感病毒作用略强于α２ａＩＦＮ,（２）两亚型α干扰素抗脊髓灰质炎和麻疹病毒作用相似。     

广西壮族自治区HIV-1流行毒株的基因序列测定和亚型分析

使用ＰＣＲ技术对１４份广西ＨＩＶ－１阳性感染者外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）样品进行扩增,获得ＨＩＶ－１膜蛋白（ｅｎｖ）基因的核酸片段,并对其Ｃ２－Ｖ３及邻区３５０－４５０个核苷酸序列进行了测定和分析。结果表明,１４份样品中９份为泰国Ｂ（Ｂ′）亚型,５份为Ｅ亚型毒株。其中Ｂ′亚型毒株的基因离散率为４．２％,与Ａ－Ｅ参考亚型及部分Ｂ亚型代表株序列相比较,与包括泰国、缅甸及云南德宏在内的Ｂ亚型毒株序列十分接近,相互之间基因离散率在３．０％－４．４％的范围内;而Ｅ亚型毒株的基因离散率为２．１％,与国际Ｅ亚型毒株的基因离散率最近,为５．６％,与其它国际参考亚型基因离散率很远,在２１．１％－２７．３％。根据以上数据及其它资料提示,广西存在Ｂ′和Ｅ两种亚型的ＨＩＶ－１的流行,且其Ｂ′亚型毒株的传入,与流行在云南德宏州的相同亚型ＨＩＶ－１毒株密切相关,而Ｅ亚型毒株则可能是由泰国经越南传入广西的     

草鱼IGF—Ⅰ cDNA的克隆和在原核生物中的表达

根据亲缘关系较近的鲤鱼胰素样生长因子－Ⅰ（IGF－Ⅰ）cDNA设计一对引物,通过RT－PCR从草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肝组织首次克隆了草鱼IGF－ⅠcDNA开放阅读框（ORF）片段,经序列分析表明克隆的草鱼IGF－ⅠcDNA为Ea－2亚型,ORF与鲤鱼有95％的同源性,与人有63％的同源性;草鱼IGF－Ⅰ蛋白与鲤鱼IGF－Ⅰ仅2个氨基酸残基不同,与人IGF－Ⅰ也仅有13个残基不同,将表达成熟草鱼IGF－Ⅰ(gcIGF-Ⅰ）蛋白的cDNA片段亚克隆至谷胱甘肽S－转移酶（GST）融合表达载体pGEX－4T－3,再将构建的重组表达载体pGEX-T-gcIGF-Ⅰ转入大肠杆菌BL21。在IPTG的诱导下,GST－gcIGF-Ⅰ融合蛋白高效表达。兔抗鲑鱼IGF－Ⅰ抗血清进行了Western Blot检测显示重组草鱼IGF－Ⅰ蛋白具有免疫活性。     

中国不同地区和人群HDV cDNA的筛选、克隆及抗原编码区基因异质性的分析

为研究我国不同地区不同人群中ＨＤＶ毒株的感染分子特征,从我国河南、内蒙、北京、四川、广西、西藏、新疆、辽宁、上海等地的ＨＤＶ健康携带者、慢性丁肝病人与重症肝炎病人中筛选获得１０余份ＨＤＶ－ＲＮＡ阳性血清。经逆转录一多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）交叉扩增获得ＨＤＶ抗原编码区的ｃＤＮＡ片段并克隆到ＰＧＥＭ－３Ｚｆ（－）或ＰＧＥＭ－Ｔ载体上,经序列分析研究其基因结构特点,结果表明：中国的ＨＤＶ毒株基因型均为Ⅰ型,但至少存在ⅠＡ、ⅠＢ两个亚型,ＨＤＶ毒株在不同地区间存在异质性,其中河南－１、－２、－３株及新疆株与台湾株同源性较高（核苷酸与氨基酸同源性分别大于９２．１％与８６．９％）．当为ⅠＡ型;内蒙－１、四川、广西、西藏－１、辽宁、北京株与美国－１株同源性较高（核苷酸与氨酸同源性分别大于９４．３％与８８．８％）,当为ⅠＢ亚型;上海株与意大利株的核昔酸同源性最高,为９８．１％。研究证明我国新疆、内蒙、西藏等地区抗ＨＤ阳性率比其他省市高并不是由于存在其他基因型所致。     

广西壮族自治区HIV—1流行毒株的基因序列测定和亚型分析

使用ＰＣＲ技术对１４份广西ＨＩＶ－１阳性感染者外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）样品进行扩增,获得ＨＩＶ－１膜蛋白（ｅｎｖ）基因的核酸片段,并对其Ｃ２－Ｖ３及邻区３５０￣４５０个核苷酸序列进行了测定和分析。结果表明,１４份样品中９份为泰国Ｂ（Ｂ＇）亚型,５份为Ｅ亚型毒株。其中Ｂ＇亚型毒株的基因离散率为４．２％,与Ａ－Ｅ参考亚型及部分Ｂ亚型代表株序列相比较,与包括泰国、缅甸及云南德宏在内的Ｂ亚型毒株序列十     

山东省归国劳务人员中HIV—1感染毒株的序列特征和亚型分析

为了解自1992年以来,山东省归国劳务人员HIV－1感染毒株的分子流行病学特征。我们采集了11份确认为HIV－1感染者的僵血分离单核细胞（PBMC）,提取前病毒DNA,用套式PCR扩增HIV－1膜蛋白（env）基因,并对其envC2－V3区进行序列测定和分析。结果表明：10名归国劳工人员及1名归国劳工配偶的样本经序列测定和基因分析发现了HIV－1的4种基因亚型：A、B、C、E亚型,其中C亚型7名,B亚型2名、A和E亚型各1名。由此可见;山东省归国劳务人员中HIV－1毒株的感染情况较复杂,通过 些毒株间的基因离散率相差较大,提示应加强归国劳务人员的教育、检测和控制以及其它国家毒株传入。     

乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒＨＢＶＨＢｓＡｇ１２６Ｉｌｅ相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响ａ抗原决定簇（ａ１２４－ａａ１４７）的抗原性。为了证实这一点,构建了突变Ｓ基因表达质粒,在ＳＶ４０早期启动子的控制下进行抗原表达。利用ＨＢｓＡｇ９肽（Ｔｈｒ－Ｉｌｅ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｉ单克隆抗体和９肽（Ｔｈｒ－Ｔｈｒ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｔ单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ｓｅｒ１２６突变蛋白对抗ｉ单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗ｔ单克隆抗体的反应性则与ＨＢｓＡｇ１２６Ｔｈｒ接近。但用三种抗－ａ单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白ＨＢｓＡｇ１２６     

恒山种子植物区系地理成分分析

恒山位于山西北部,有种子植物834种,隶属于342属、84科。种子植物属、种区系成分复杂,比较分析属、种的区系成分,得出恒山以温带成分占优势,在诸多温带成分中北温带分布型、旧世界分布型的属数和温带亚洲分布型、东亚分布型的种数占较高百分比。中国特有种的分布亚型以华北分布亚型种数最多,其次是西北－华北－东北分布亚型和西南－西北－华北分布亚型。     

福建沿海地区人T淋巴细胞白血病病毒1型膜基因的克隆和系统树分析

人Ｔ淋巴细胞白血病病毒１型（ＨＴＬＶ－１）是最早发现的一种ＲＮＡ肿瘤病毒。利用ＨＴＬＶ－１基因组长末重复区（ＬＴＲ）或膜基因（ｅｍｖ）序列进行系统树分析,可分为Ｃ、Ｊ、ＷＡ、ＣＡ和Ｍ５个亚型。为了解我国ＨＴＬＶ－１流行区毒株的主要基因型别,从福建莆田地区克隆出３株ＨＴＬＶ－１的ｅｎｖ基因。其序列与已知各亚型代表株进行系统树分析,结果表明均为Ｃ亚型。首次证实了中国大陆ＨＴＬＶ－１Ｃ亚型的存在。该地区     

乙肝病毒表面抗原的抗体双阳性者中病毒S区基因序列分析

为了解乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗体双阳性患者中病毒的基因型及其HVB S区是否有变异。用放射免疫试剂检测HBsAg阳性样品中的抗－HBs抗体，用聚合酶链反应法检测双阳性样品中的HBV DNA，然后对阳性样品进行克隆和基因序列分析，并将所得序列与HBV不同基因型的代表株进行比较分析。结果显示389例HBsAg阳性样品中有10例为抗HBs抗体阳性；该10例双阳性样品中有5例为HBV DNA阳性；序列分析显示该5株HBV均为B基因型，其中4株为adw亚型，1株为adr亚型；其中有2株在S区的“a”决定簇的氨基酸发生了变异。     

雌激素受体在抗皮肤老化过程中的多效性

雌激素在抗皮肤老化过程中起着重要作用,其通过与皮肤上的雌激素受体结合发挥作用。不同亚型的雌激素受体介导不同的信号传导通路。皮肤细胞中雌激素受体的分布不仅存在数量差异更有类别差异,这些差异性和雌激素受体本身的基因多态性决定了其作用的多效性。简要综述了不同亚型雌激素受体在各皮肤解剖层次中抗老化作用的研究进展。     

容量负荷性肥厚心肌中血管紧张素Ⅱ-1型受体mRNA表达的动态变化

本实验采用腹腔动－静脉瘘制造大鼠容易负荷增加所致心肌肥厚模型,应用反转录－聚梧酶链式反应及同位素掺入技术,检测手术后不同时间点左,右心室组织中ＡｎｇⅡ－１型受体的α亚型及ｂ亚型ｍＲＮＡ的表达。结果表明,术后早期虽反映心肌肥厚的心／体重比指标已有显著性升高、而ＬＶ和ＲＶ组织的ＡＴｌａ ｍＲＮＡ及ＡＴ１ｂ ｍＲＮＡ表达尚未见显著性改变。     

芦芽山自然保护区种子植物区系地理成分分析

芦芽山位于吕梁山脉北端,有种子植物９１４种,隶属于４０３属、８４科。种子植物属、种区系成分复杂多样;比较分析属、种的区系成分,得出芦芽以温带成分点优势。在诸多温带成分中北温带分布型、旧世界分布型的属数和温带亚洲分布型、东亚分布型的种数占较高百分比。中国特有种的分布亚型以华北分布亚型种数最多,其次是西北－华北－东北分布亚型和西南－西北－华北分布亚型。经过芦芽山及部分山地植物属区系地理成分的ＰＣＡ排序     

兔肝金属硫蛋白结合铅离子的圆二色性光谱研究

从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到金属硫蛋白两种亚型：ＺｎＭＴ－Ⅰ和ＺｎＭＴ－Ⅱ．在酸性条件下脱金属,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱层析得到脱金属硫蛋白（ａｐｏＭＴｓ）．用圆二色性（ＣＤ）光谱法研究,发现两种亚型ａｐｏＭＴｓ 与Ｐｂ２＋ 的结合依赖于Ｐｂ２＋ 的加入比例及ｐＨ 值．ａｐｏＭＴ－Ⅰ在ｐＨ３～５之间,ａｐｏＭＴ－Ⅱ在ｐＨ４～６之间与Ｐｂ２＋ 结合形成特征簇合物Ｐｂ７ＭＴｓ,其ＣＤ谱图特征峰位于３１６ｎｍ （－ ）,２７０ ｎｍ （＋ ）,２４５ ｎｍ （＋ ）及２２５ ｎｍ （－ ）,提示解铅中毒的最佳条件应控制在弱酸性环境．不同亚型ａｐｏＭＴｓ 与Ｐｂ２＋ 的结合方式各不相同：Ｐｂ２＋ 与ａｐｏＭＴ－Ⅰ的结合采取平均分配的方式,而与ａｐｏＭＴ－Ⅱ则为选择性结合方式,表明这两种亚型在解铅毒功能上存在差异．     

近年北京人偏肺病毒基质蛋白、小疏水蛋白和粘附糖蛋白的遗传变异特征分析

为了探讨北京地区儿童中流行的人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)结构蛋白基因特征,本研究着重对hMPV北京地区地方株的基质蛋白(Matrix protein,M)、小疏水蛋白(Small hydrophobic protein,SH)和粘附蛋白(Attachment protein,G)基因进行了基因特征的分析。本研究对2006年至2010年42株hMPV的M蛋白、49株SH蛋白和55株G蛋白基因特征进行了分析,进化分析显示北京地区流行的hMPV的这3个编码蛋白基因分别属于A2、B1和B2基因亚型。地方株M基因高度保守,A和B基因型之间存在7个氨基酸位点的变异(型内高度保守)。不同基因型(A和B)和不同基因亚型(A2和B1、A2和B2)之间的SH基因的氨基酸同源性在60.7%～64.4%之间,而同一基因亚型内的氨基酸同源性则在93.3%～100%之间;同一基因型不同基因亚型之间(B1和B2)的氨基酸同源性在84.7%～88.7%之间。不同年份不同基因亚型G蛋白具有遗传多样性,使用不同的终止密码、核苷酸缺失和插入导致其核苷酸长度不同,变异程度相当高。不同基因型和不同基因亚型之间的G基因的氨基酸同源性在34.0%～38.6%之间,同一基因亚型内的氨基酸同源性在81.5%～100%之间;同一基因型不同基因亚型之间的氨基酸同源性在64.3%～69.2%之间。2008年至2010年的B2基因亚型的毒株大多数在多个位点出现了相同的氨基酸突变,同时出现了2个氨基酸的插入或重复插入,这些毒株在B2基因亚型内形成了一个新的进化簇。抗原位点预测分析显示不同基因亚型的SH和G蛋白的抗原位点均存在差异。     

一株抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的广谱中和活性

以H5N1禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02作为抗原,应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5,单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性.选择33株2002～2006年不同地域,不同宿主中分离的不同遗传变异亚系的H5N1病毒代表株,对单抗8H5分别进行血凝抑制实验及中和试验分析,结果显示单抗8H5对所有H5亚型病毒均有较强反应,而对非H5亚型标准病毒株均不反应,说明8H5是一株广谱性抗H5特异性中和单抗,并提示单抗8H5的HA识别表位可能是一个相当保守的中和表位.并且单抗8H5双抗夹心系统的初步评价显示了其在诊断应用上的前景.