表面活性剂Tween-20对离体小麦根钾离子运转的影响

低浓度的Tween-20不仅抑制小麦离体根的K~ 吸收,而且还引起K~ 的外流。抑制K~ 吸收和促进K~ 外流的程度随着Tween-20浓度的提高,处理时间的延长而加深。Tween-20对K~ 运转的抑制作用,可以用去离子水洗去。Twen-20浓度在0.01～0.01％范围内促进小麦根细胞膜上KCl刺激的ATP酶活力,但它的浓度在0.05％以上时则抑制这种ATP酶的活力。延长Twen-20预处理膜-ATP酶的时间,Tween-20抑制膜-ATP酶活力的作用增强。Tween-20抑制 K~ -ATP酶活力的程度大于Mg~(2 )-ATP酶。Tween-20的分子透入细胞膜之后,可能暂时引起膜类脂双分子层分子结构的改变,影响了膜对K~ 的透性;还可能变动膜-ATP酶周围的脂肪环境,当膜-ATP酶的脂肪环境受到Tween-20轻微影响时,酶活力被促进;当脂肪环境的变动加大时,酶活力被抑制。Tween-20对膜-ATP酶活力的影响可能是它影响小麦根细胞K~ 主动吸收的原因。     

一种简便有效的菌落原位杂交法

本方法采用国产定量滤纸代替硝酸纤维素膜进行菌落杂交筛选。省去了真空烤膜和预杂交操作。末端标记的寡核苷酸探针杂交所得结果具有较好的特异性和较强的放射活性。     

甲胎蛋白胶体金检测试剂的的研制

为建立一种快速,简易胶体金免疫层析法（GICA）用于检测血清中的甲胎蛋白（AFP）,将AFP单克隆抗体分别标记胶体金并包被硝酸纤维素膜,制成免疫检测层析试剂,血清中的AFP与金标记抗体结合,沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗体结合可形成肉眼可见的紫红色线条,此检测试剂对本室自制AFP参比品进行了检测,灵敏度达20ng/ml;对甘肃省肿瘤医院的176份癌症患者血清进行了检测。结果与ELISA法相一致,本法检测AFP快速,简便,结果准确,具有推广价值。     

神经元特异性烯醇酶和癌胚抗原胶体金免疫层析联合检测

目的：应用双抗夹心胶体金免疫层析方法,实现对神经元特异性烯醇化酶（NSE）和癌胚抗原（CEA）两种肺癌肿瘤标志物的快速联合检测。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒,并分别对鼠抗NSE、CEA单克隆抗体进行标记,分别与之相配对的另一种单克隆抗体被喷在硝酸纤维素膜（NC膜）上,制成免疫层析检测试条。溶液中的抗原NSE、CEA与金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上固定的抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果：该试纸条只与NSE、CEA有特异性反应,与CA125、CYFRA21-1、TPA等肺癌标志物无交叉反应。标准样品中两种抗原的检测灵敏度分别可达到5ng/mL和3ng/mL。结论：胶体金免疫层析技术检测NSE、CEA特异性强、灵敏度高、简便快速,不需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

神经元特异性烯醇酶和癌胚抗原胶体金免疫层析联合检测

目的:应用双抗夹心胶体金免疫层析方法,实现对神经元特异性烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)两种肺癌肿瘤标志物的快速联合检测。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒,并分别对鼠抗NSE、CEA单克隆抗体进行标记,分别与之相配对的另一种单克隆抗体被喷在硝酸纤维素膜(NC膜)上,制成免疫层析检测试条。溶液中的抗原NSE、CEA与金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上固定的抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果:该试纸条只与NSE、CEA有特异性反应,与CA125、CYFRA21-1、TPA等肺癌标志物无交叉反应。标准样品中两种抗原的检测灵敏度分别可达到5ng/mL和3ng/mL。结论:胶体金免疫层析技术检测NSE、CEA特异性强、灵敏度高、简便快速,不需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

DMSO、Tween-20和Triton X-100对野葛悬浮细胞异黄酮生产的影响

二甲基亚砜(DMSO)、Tween-20和Triton X-100可以增大悬浮培养细胞的细胞膜和液泡膜的透性,促进细胞内次生代谢物的释放,从而影响这些次生代谢产物的产量。为了提高野葛悬浮细胞中异黄酮类化合物的产量,以1％、3％和5％的DMSO、Tween-20和Triton X-100分别处理野葛叶悬浮细胞,结果显示,Tween-20和Triton X-100皆明显促进细胞生物量和葛根素和异黄酮化合物的释放。5％的Triton X-100处理3d,促进细胞产生总异黄酮化合物,增产率达40．6％。     

使用固定于硝酸纤维膜上的抗原筛选单克隆抗体的两种方法

<正>近年来免疫化学和放射性免疫的许多工作已经涉及到固定于硝酸纤维膜上抗原的应用。Haukes等人的点一免疫结合试验用微量抗原结合硝酸纤维膜上为筛选单克隆抗体(McAb)提供了一个方案。我们发展了一种简化了的筛选体系,即把抗原点加在一张与96孔微量滴定板同样大小的硝酸纤维膜上,用一块制成单园孔的铝模板置于有抗原点的硝酸纤维膜上面,可加入极少量(2ul)的杂交瘤上清液亦可与大量(可达200ul)杂交     

用免疫点试验检测未浓缩的杂交瘤培养上清液中的同型和轻链型鼠单克隆抗体

<正>长期以来生物化学家们在核酸的工作中就广泛利用硝酸纤维素滤膜作为一种固相支持物以吸附和固定核酸。Towbin等(1979)首先证实它在从聚丙烯酰胺胶转移或贴印蛋白的用途,随后又用于检测抗体。Sharon等(1979)和Hawkes等(1982)介绍了一种点-免疫结合试验,直接应用硝酸纤维膜中的抗原点来筛选单克隆抗体和其它抗体。 单克隆抗体技术的广泛应用,在许多实验室就产生了一种需要,即从大量的单克隆蛋白中简便地检查鼠免疫球蛋白同型物(isotype)和轻链类。生产抗同型血清既费力又费钱。如果将抗体固定在硝酸纤维膜上     

胶体金渗滤方法检测乙肝患者血清中乙肝核心抗体的研究

目的:建立胶体金免疫渗滤法检测乙肝患者血清中乙肝核心抗体(anti-HBc Ig M)抗体的方法,评价其灵敏度、特异性和重复性。方法:预先在硝酸纤维素膜上包被乙肝核心抗原HBc Ag,将血清或者血浆加在硝酸纤维素膜上,血清或者血浆中的anti-HBc Ig M与HBc Ag结合。洗涤去掉非特异结合,加入胶体金标记的抗人-Ig M,洗涤去掉没有结合的抗人Ig M抗体。硝酸纤维素膜上的抗原-Ig M-抗人Ig M形成的"三明治"复合物呈现红色圆点,证实实验有效。结果:102份乙肝患者血清,anti-HBc Ig M阳性标本99份。检出率97%。50份正常血清中,有一份检测结果弱阳性,特异性98%。结论:胶体金免疫渗滤法检测anti-HBc Ig M敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要特殊的仪器设备,在anti-HBc Ig M快速检测上有广阔的应用前景。     

单增李斯特菌磁性试纸条层析体系的研究

将单增李斯特菌的多克隆抗体和羊抗鼠IgG(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)上分别作为检测线C和质控线T。将单增李斯特菌的单克隆抗体与磁性纳米材料进行化学偶联构建磁性纳米探针,建立双抗夹心模式的检测试纸条。通过在层析体系中分别添加表面活性剂、盐离子、杂蛋白和糖类,探讨其对层析的影响,以提高检测的准确性和灵敏度。研究发现,在层析体系中添加一定浓度的Tween-20、KCl、BSA和葡聚糖,可以实现单增李斯特菌的快速检测。本文研究对今后研发类似磁性试纸条检测技术具有重要参考价值。     

促进剂对Bacillus subtilis NX-21合成γ-谷氨酰转肽酶的影响

通过金属离子及表面活性剂的单因素试验及正交试验,对Bacillus subtilisNX-21胞外合成γ-谷氨酰转肽酶的发酵条件进行优化。结果表明,Mn2+、Mo6+和Tween-20的使用可有效促进菌体产酶,其最佳组合配方为:Tween-20 0.15%、(NH4)2MoO40.8 g.L-1、MnSO40.05 g.L-1。优化后该菌株产酶酶活达到3.9×103U.L-1,较原培养条件提高了21.6%。     

单细胞PCR体系的建立及其在CRISPR/Cas9靶点活性检测中的应用

单细胞PCR是以单个细胞所含的DNA或RNA为模板进行扩增,因此其模板的制备是影响整个反应成功与否的关键因素。利用三种不同蛋白酶K细胞裂解液(SDS细胞裂解液、NP-40细胞裂解液、Tween-20细胞裂解液)分别对体外培养成熟的单个猪卵母细胞进行裂解,并直接作为模板进行PCR扩增,结果表明:NP-40细胞裂解液制备的模板质量最好,其扩增效率为95%;其次为Tween-20细胞裂解液,其扩增效率为65%;SDS细胞裂解液产物中未检测到阳性条带。结合显微注射技术对sgRNA靶点活性进行检测,结果表明利用单细胞PCR结合显微注射的方法,在受精卵内对CRISPR/Cas9靶点活性进行检测确实可行,检测结果真实可靠。     

以膜为固相载体的免疫胶体金快速试验

免疫胶体金标记技术是现在免疫标记技术的一个重要范畴,20世纪80年代末期,人们把胶体金免疫技术与固相膜结合发展了胶体金免疫快速试验,由于其简便、快速、结果直观从而得到了广泛的发展和应用,且其商业前景广阔,目前人们对其需求越来越多。本文对其基本原理及其中应注意的问题做了一些介绍,并对其应用领域及发展方向进行了探讨。     

如何降低免疫印迹实验的成本

为在我国高校中顺利开展为本科生所开设的免疫印迹实验就必须大幅度降低实验的维持费用.笔者用自己制备GFP血清抗体和采用国产的醋酸纤维素滤膜替代进口的硝酸纤维素滤膜的方法很好地解决了这个问题.     

金标免疫渗滤法检测抗HP抗体的临床应用评价

金标免疫渗滤法（ＤｏｔＩｍｍｕｎｏｇｏｌｄＦｉｌｔｒａｔｉｏｎＡｓｓａｙ,ＤＩＧＦＡ）是近年来从固相免疫测定法发展起来的斑点免疫结合试验,其特点是以微孔膜作为载体,用胶体金代替酶结合物,省却底物反应步骤,阳性反应呈红色斑点,肉眼清晰可见,操作快速简便。目前,国内外已用于多种疾病的诊断,如ＨＩＶ、ＡＦＰ等［１,２］。我们采用该法检测有消化道症状的住院及门诊患者６５８例,并用病理切片诊断和尿素酶试验对照加以分析,结果良好,现报道如下。１　材料与方法１．１　一般资料　本组６５８例,其中男３４２例,女３…     

用斑点酶联免疫吸附试验检测轮状病毒抗原

我们用国产试剂和材料建立了一种以硝酸纤维素膜(NCM)作为固相载体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),用于检测粪标本中的轮状病毒. 首先用铁笔将NCM划成5×5mm的小方格,然后将免抗人轮状病毒IgG打点至方格中心,室温凉干后,置封闭液中室温作用1小时,取出用PBST洗涤3～5次,每次5分钟,然后将膜直接浸入待检粪样、阳性抗原对照和阴性抗原对照中.置37℃ 30～60分钟,洗涤。随后将上述诊断膜浸入酶标兔抗人轮状病毒IgG中,室温45～60分钟,洗涤。用底物DAB显色数分钟,至阳性对照样本出现明显褐色斑点时,用自来水终止反应。根据斑点颜色深浅,肉眼即可判断阳性或阴性结果。     

用洁霉素及庆大霉素制备难辨梭状芽孢杆菌的分离培养基

由伪膜性结肠炎及抗生素性腹泻患者粪便中分离病原难辨梭状芽孢杆菌,国际上普遍采用CCFA培养基。但由于其中所用选择抑制剂国内尚不生产,故需花费外汇进口。我们在实验研究的基础上,以庆大霉素及洁霉素代替环丝氨酸及甲氧噻吩头孢霉素,并以国产试剂代替进口培养基基础。经多次试验获较满意结果。比较研究表明,分离的细菌多是芽孢,有利于进一步鉴定,而且价格只及进口培养基的十四分之一。     

膜渗滤亲和层析法纯化腹水单克隆抗体

用膜渗滤亲和层析法纯化腹水单克隆抗体（McAb）.采用硝酸纤维素膜（NCM）作固相支持物吸附抗原,用负压使小鼠腹水渗滤NCM,在滤过的同时腹水中的McAb不断结合于NCM上吸附的抗原,再将McAb从NCM上解离,从而得到高纯度的McAb.用此法纯化抗白蛋白（Alb）McAb.结果提纯的Alb McAb纯度达PAGE电泳单条带,将此McAb点样NCM用于斑点免疫渗滤法（DIFA）检测Alb,其灵敏度比用腹水点样时高20倍.该法快速简便,可代替亲和层析柱用于纯化McAb.     

重组乙肝疫苗纯度高效液相层析(HPLC)测定方法的改进

为建立重组汉逊酵母乙肝疫苗HPLC检定方法,应用TSK－G5000PW检测系统测定汉逊酵母重组乙肝疫苗表面抗原的纯度,对不同样品处理液的配比浓度和处理时间分别进行了探讨,作者选用DTT／Tween-80作为样品处理效果优于DTT＋Tween-20,1:50Tween-80与0.1mol/L等量混合为样品处理液的适宜浓度。样品处理液与等量样品混匀时间介于35s-2min时,HPLC分离效果好,结果稳定。该处理液及处理时间对CHO细胞及Merck酿酒酵母重组乙肝疫苗表面抗原的HPLC纯度测定无影响。结果表明：现有的HPLC检测系统用0.1mol/L DTT与1：50 Tween-80等量混合处理后能有效地检测不同类型重组乙肝疫苗表面抗原的纯度。     

生物膜组分对膜功能和膜脂相变的调控——Ⅰ.吐温表面活性剂对玉米根端线粒体ATP酶活力的影响

膜脂流动性和膜结合酶的关系极为密切,同时膜脂组分也明显地制约着膜的流动性。本试验选用了三种不同脂肪酸碳链的吐温表面活性剂(Tween 20,Tween40,Tween 80)作为线粒体的添加物,观察对玉米根端线粒体ATP 酶活力的调节作用。结果看到玉米根端线粒体ATP酶在8～32℃范围内活化能在15.5℃处出现了一个折点。添加吐温20、40、80后在8～32℃范围内都出现了二个活化能的折点,分别为26.5℃和12.3℃;25.4℃和15.3℃;22.8℃和12.8℃。清洗吐温后ATP 酶活化能的转折点温度与添加吐温时没有明显差异,表明吐温的脂肪酸链可能与线粒体膜相结合,因而改变了线粒体ATP 酶的活化能的折点温度。