条斑紫菜多糖PY-D2对4种人肿瘤细胞株生长的影响

目的:研究条斑紫菜多糖体外抗肿瘤的生物学活性。方法:应用生化技术分离和纯化条斑紫菜多糖,获得条斑紫菜多糖的2个组分,分别为PY-D1和PY-D2;在体外培养条件下分别用不同浓度的条斑紫菜多糖PY-D2处理4种人肿瘤细胞,通过MTT法观察条斑紫菜多糖PY-D2对4种人肿瘤细胞生长的影响;采用流式细胞仪检测肿瘤细胞的细胞周期变化。结果:条斑紫菜多糖PY-D2诱导HO-8910、MCF-7、K562和7721肿瘤细胞72h后,对其生长有明显的抑制作用,呈剂量依赖效应,500mg/LPY-D2的抑制率分别为21.2%、23.6%、19.8%和21%(P<0.001)。流式细胞仪检测表明PY-D2可以阻滞肿瘤细胞的细胞周期于G0/G1期或G2/M期。结论:条斑紫菜多糖PY-D2具有抑制肿瘤细胞HO-8910、MCF-7、K562和7721生长的作用,其有关的分子生物学作用机理值得进一步研究。     

一种紫菜多糖的制备及对淋巴细胞生长的影响

用DEAE－纤维素和SephadexG-200柱层析法分离纯化条斑紫菜的热水提取物,从中得到多糖PY2,并测出其分子量为2．0％10^4。用紫外和红外光谱对PY2的性质进行了鉴定。进一步测定了PY2对体外培养的小鼠骨髓细胞及淋巴细胞生长的影响。结果表明,PY2是一种少见的紫菜多糖,它不含有大多数紫菜侈糖具有的3,6－内醚－兰乳糖和硫酸基,它对小鼠脾脏淋巴细胞、胸腺淋巴细胞以及混合淋巴细胞的增殖有一定的抑制作用,而对骨髓细胞的增殖没有明显的影响。     

条斑紫菜多糖的分离纯化与抗肿瘤活性的初探

目的：本文主要应用生化提纯技术从条斑紫菜（ Porphyra yezoensis ）中提取不同纯度的多糖,并观察各多糖组分对人乳腺癌细胞 MCF-7 生长的影响。方法：通过 DEAE-52 柱层析和 Sephadex G-200 柱层析,对条斑紫菜粗多糖热水提取物进行纯化;经HPLC,紫外和红外光谱对多糖各组分的纯度及结构进行初步鉴定;并用 MTT 法和流式细胞仪检测多糖对人乳腺癌细胞 MCF-7 生长的影响。结果：分离纯化出的各组分条斑紫菜粗多糖对人乳腺癌细胞 MCF-7生长均有不同程度的抑制作用,其中PY-D2可诱导MCF-7细胞凋亡。结论：条斑紫菜多糖具有杀伤肿瘤细胞MCF-7的作用。     

条斑紫菜多糖抗疲劳生物活性研究

主要应用活体动物实验技术,研究了纯化产物紫菜多糖的抗疲劳作用及量效关系。通过紫菜多糖PY-G1不同剂量对小鼠游泳时间、乳酸脱氢酶活性、肌糖原和肝糖原含量等指标的检测,分析了紫菜多糖提高小鼠抗疲劳生物活性功能及其量效关系。实验结果表明,紫菜多糖可显著延长小鼠游泳时间,最高可以提高37%;并且可以使小鼠在游泳前后乳酸脱氢酶含量分别增加35%和37.5%(P<0.05);增加小鼠肌糖原储备量和肝糖原储备量,其肌糖原储备量和肝糖原储备量最高可以分别增加85.6%和86%。实验结果表明,条斑紫菜多糖具有明显提高小鼠抗疲劳生物学活性。     

条斑紫菜中一种琼胶多糖的分离纯化及鉴定

条斑紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ）的热水提取物,经ＤＥ－２３和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００柱层析纯化,得到一种含微量硫酸基的琼胶精品（ＰＹ１）。此多糖经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ柱层析鉴定为单一组分,分子量为２２０ｋＤ。紫外光谱显示它不含蛋白质、多肽及核酸。红外光谱揭示它含３,６－内醚－半乳糖的特征吸收以及微量的硫酸基。该多糖的水解产物经气相色谱分析,主要由半乳糖及其衍生物组成,有少量     

条斑紫菜中一种琼胶多糖的分离纯化及鉴定

条斑紫菜(Porphyra yezoensis)的热水提取物,经DE-23和Sephadex G-200柱层析纯化,得到一种含微量硫酸基的琼胶精品(PY1)。此多糖经Sepharose 6B柱层析鉴定为单一组分,分子量为220 kD。紫外光谱显示它不含蛋白质、多肽及核酸。红外光谱揭示它含3,6_内醚_半乳糖的特征吸收以及微量的硫酸基。该多糖的水解产物经气相色谱分析,主要由半乳糖及其衍生物组成,有少量岩藻糖存在。通过高磺酸氧化和Smith除解以及１３C-NMR谱的分析,该多糖主要由琼胶二糖结构单元和它的生物前体组成,以琼胶二糖为主。     

条斑紫菜抗高温和快速生长细胞株系HB的建立及栽培

本文主要应用单细胞培养技术培育紫菜新品系,以建立紫菜细胞工程快速育苗系统。通过酶解技术分离出紫菜叶状体细胞,并进行多克隆,从中获得4个细胞纯系植株(HA,HB,HC,HD)。对该4个细胞株系进行了纯系培养,并对其细胞苗和丝状体的生长速度和抗高温(19℃,21℃,23℃,25℃)性进行了测定。结果显示,HB株系具有较高的抗高温性和最快生长速度。在1998年到2000年间,在江苏省启东县海丰海区对HB株系进行了海上栽培实验,结果显示,实验组的产量高于当地对照组产量,证明了条斑紫菜HB株系不仅具有较高的抗高温性,而且也有较快生长速度。本实验说明应用细胞工程进行条斑紫菜育种是一条很好的快速育种途径。     

条斑紫菜抗高温和快速生长细胞株系HB的建立及栽培

本文主要应用单细胞培养技术培育紫菜新品系,以建立紫菜细胞工程快速育苗系统。通过酶解技术分离出紫菜叶状体细胞,并进行多克隆,从中获得4个细胞纯系植株(HA,HB,HC,HD)。对该4个细胞株系进行了纯系培养,并对其细胞苗和丝状体的生长速度和抗高温(19℃,21℃,23℃,25℃)性进行了测定。结果显示,船株系具有较高的抗高温性和最快生长速度。在1998年到2000年间,在江苏省启东县海丰海区对HB株系进行了海上栽培实验,结果显示,实验组的产量高于当地对照组产量,证明了条斑紫菜船株系不仅具有较高的抗高温性,而且也有较快生长速度。本实验说明应用细胞工程进行条斑紫菜育种是一条很好的快速育种途径。     

紫菜多糖对免疫细胞及肿瘤细胞生长的影响（英文）

采用细胞培养技术测定从条斑紫菜中得到的多糖PY3对小鼠免疫细胞及人肿瘤细胞K562生长的影响。结果表明,PY3对小鼠骨髓细胞和脾脏淋巴细胞的增殖以及对混合淋巴细胞反应均有一定的促进作用。PY3对血癌细胞K562的生长有一定的抑制作用,研究表明多糖PY3不仅能够提高小鼠免疫细胞的功能,而且有一定的抗肿瘤作用。     

紫菜多糖对小鼠TNF-α、NO的诱生作用

探讨紫菜多糖对小鼠免疫功能的刺激作用。以不同浓度的紫菜多糖及生理盐水(NS)经BALB/C小鼠腹腔连续注射7 d(1次/d)后,通过结晶紫染色法及Griess法分别测定小鼠的脾细胞分泌TNF-α、NO水平。0.15 g/kg紫菜多糖注射组小鼠脾细胞分泌TNF-α、NO的水平高于NS对照组(P<0.05)。结果可见,适宜浓度的紫菜多糖具有增强小鼠免疫功能的效应。     

On the Differentiation and Development of Cells Isolated from Thalli of Porphyra yezoensis Ueda

Cells were isolated after enzyme treatment from the thalli of Porphyra yezoensis Ueda and cultured in enriched seawater media (MES). Cultures were put in an incubator with light intensity of 2000--2500 lx from cool-white flurescent lights and were maintained on a 12:12 LD cycle. The temperature was 20±2℃ and the media were changed weekly. Two main types of differentiation and development ways in cultured cells under light microscope: 1. Cells directly formed the single cell seedlings Eke monospores; 2. Cells first divided into cell aggregates, then released lots of spores that could germinate into sporelings. Both single cell seedlings and sporelings were called cell seedlings. So it is possibole to breed from the ceils isolated directly from the thalli in Porphyra yezoensis.     

条斑紫菜R-藻红蛋白提纯工艺研究

对条斑紫菜叶状体R-藻红蛋白提纯方法进行了研究和分析。首先分别采用冻融法、化学试剂法、溶胀法等单一及组合细胞破碎方法对条斑紫菜细胞进行破碎,结果表明溶胀 组织捣碎法效果最佳。其次用25%～60%饱和度范围内的硫酸铵沉淀法粗提藻红蛋白,发现25%～45%硫酸铵分步沉淀法效果最好,再经结晶法盐析纯度(D565nm/D280nm)达到2.088。盐析液用SephadexG-25层析柱脱盐,再经羟基磷灰石(HA)柱层析,纯度可达到4.98。R-藻红蛋白的最大吸收峰在565nm,其室温荧光发射峰为578nm。SDS-PAGE结果显示,R-藻红蛋白可分为α、β两个亚基,Mr分别为17.0×103和19.0×103。     

条斑紫菜SAMS基因克隆与生物信息学分析

干旱、高盐和低温是限制植物生长和农作物产量的主要逆境因子。S-腺苷甲硫氨酸合成酶（S-adenosylmethionine synthetase,SAMS）与植物抗逆境密切相关,而且超表达SAMS的转基因植物具有更高的抗干旱、高盐和低温能力。进行条斑紫菜（Porphyra yezoensis）S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（PySAMS）cDNA的克隆及序列特征分析。首先利用电子克隆技术得到基因相关的contig,预测全长并设计引物,最后利用RT-PCR技术成功克隆了PySAMS的cDNA序列（GenBank accession：FJ404748）。该cDNA序列含有长1155nt的完整ORF,编码蛋白（PySAMS）分子量41.8kDa,长384AA。PySAMS与盘基网柄菌（Dictyostelium discoideum）、莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）、拟南芥（Arabidopsis thaliana）和水稻（Oryza sativa）等多种生物的SAMS具有较高的序列一致性,含有与SAMS酶活性密切相关的氨基酸残基和保守序列,与人（Homo sapiens）和大肠杆菌（Escherichia coli）的SAMS具有高度相似的三维结构。所以PySAMS与其它生物的SAMS一样,在条斑紫菜的抗逆过程中发挥重要作用。研究PySAMS有助于阐明条斑紫菜耐受非生物胁迫的作用机理,有助于获得高抗逆转基因植物。     

条斑紫菜藻红、藻蓝蛋白逐级放大的纯化工艺

采用“破碎-盐析-层析”的方法纯化条斑紫菜藻胆蛋白,并在提取规模上逐步放大。首先在综合比较凝胶层析去盐效率后,从Sephadex G-25、G-100、S-300和CL-6B中选择G-25作为实验流程中的去盐填料,其次将提取流程的初试原料条斑紫菜量逐步放大,选取了1g、20g和400g三个量,结果表明随着初试紫菜量逐步放大,最终所得藻胆蛋白中吸收光谱纯度>3.2的蛋白产率依次提高,其中400g冻干紫菜的藻红蛋白产率为0.323％,藻蓝蛋白产率为0.148％。由此认为该实验工艺流程具有规模放大的潜力,这为高纯度藻胆蛋白的规模生产提供了一条可行的方案。     

条斑紫菜丝状体总RNA提取方法比较

目的:为了获得质量较高的条斑紫菜丝状体总RNA,对几种常用提取方法进行研究。方法:以条斑紫菜自由丝状体为材料,比较了用异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS/酚法、TRIzol法、RNAplant法提取的RNA的质量和纯度。结果:异硫氰酸胍法提取RNA的成本低,但纯度不高;CTAB法产率较小,且不能完全去除多糖或蛋白质;SDS/酚法未能获得完整的RNA;TRIzol法未能见到5SrRNA条带,且带有杂带;而RNAplant法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高,其D260nm/D280nm值为1.836,经逆转录得到的双链cDNA扩增产物长度在200bp以上。结论:实验结果表明RNAplant法更适于条斑紫菜丝状体总RNA的提取。