响应面法降低肝细胞冷冻保护液中的二甲基亚砜浓度

为有效降低干细胞冷冻保护液中的二甲基亚砜(Me2SO,DMSO)浓度,减少其作为冷冻保护剂对细胞低温保存时产生的毒性,提高细胞存活率,以肝细胞为目标,采取响应面法对冷冻保护剂配方进行了优化。结果表明：冷冻保护剂的最佳配比为DMSO浓度3%、甘油浓度6%、海藻糖浓度0.1%,在此条件下肝细胞复温存活率可达到84.35%,研究结果有效地降低了DMSO的浓度,减少了由此带来的对肝细胞造成的毒性损害,为后续的研究奠定了基础。     

DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响

组织工程化真皮的超低温保存技术是皮肤组织工程的重要组成部分,对皮肤组织库的建立有重要意义。低温保存与低温保护剂的种类、浓度、降温复温程序及低温保护剂的添加与去除方式有着密切的关系。实验目的：研究DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响。实验方法：以培养一定时间的组织工程化真皮为试材,以不同浓度的DMSO溶液为低温保护液,以不同的降温速率降温保存,以四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,辅以光学显微镜和扫描电镜观察分析。实验表明：降温速率为1℃／min,DMSO浓度为1．4mol／L时可获得在实验范围内较高的细胞存活率,为75％,超低温保存后的扫描电镜照片表明其细胞形态最为接近新鲜状态,细胞与支架材料的黏附也很紧密,这与细胞存活率的研究结果有很好的相关性。     

虫生真菌玫烟色棒束孢Pf9606抗逆性的研究

采用凹玻片悬滴法测定了玫烟色棒束孢在高温、紫外照射、紫外保护剂和杀菌剂等逆境胁迫下分生孢子的存活率。结果表明:玫烟色棒束孢Pf9606分生孢子在36～45 ℃高温下连续处理24 h后,该菌孢子几乎不能存活;36～45 ℃短时高温处理后,随温度的升高和处理时间的延长,孢子存活率明显降低;随紫外照射时间的延长,玫烟色棒束孢孢子存活率明显降低,当紫外照射50 s时,孢子存活率为55.33%,当照射时间延长为180 s时,孢子不能存活;不同浓度的抗坏血酸和高浓度的荧光素钠可提高玫烟色棒束孢抗紫外照射能力,抗坏血酸的理想浓度为0.2 mg/mL,荧光素钠的理想浓度为0.9 mg/mL,而不同浓度的刚果红和氧化锌对玫烟色棒束孢没有保护作用;玫烟色棒束孢与杀菌剂72%农用硫酸链霉素、70%代森联和58%甲霜灵锰锌混用后,对该菌孢子存活影响较小,不同浓度下孢子存活率均达85%以上,而常规浓度的氟吗·锰锌对玫烟色棒束孢孢子存活有较强的抑制作用。     

玻璃化冷藏条件对连香树定芽细胞存活率及微结构的影响

选择6种保护剂、2种玻璃化方式和2种低温处理方式对连香树定芽的冷藏条件进行筛选,用TTC还原法测定冷藏定芽的细胞存活率,并用电子显微镜观察定芽细胞冷冻时的受损情况,以优选连香树定芽的冷藏技术条件。结果表明:(1)保护剂、玻璃化方式、冷藏温度均对莲香树定芽的细胞存活率具有显著影响,不同冷藏处理的定芽组织细胞内冰晶形状、数量不同,细胞破裂数也不同。(2)连香树定芽的最佳冷藏条件为:用含甘油35.0mL、乙烯乙二醇20.0mL、DMSO 15.0mL、甘氨酸1.0mg和3%蔗糖脱氨MS液体培养基组成的100mL保护剂于真空下浸泡30min,再经-20℃预冻处理6h后,于液氮中玻璃化和冷藏60d,其定芽细胞的存活率最高,相对存活率达95%。(3)细胞微结构观察显示,在该优选条件下明显抑制了连香树定芽细胞内冰晶体的形成,消除了冰晶对细胞的涨破和刺伤,其细胞结构完整无损伤。     

海藻酸微囊替代DMSO和FBS的STO细胞冷冻保存研究

目的:改进现有的细胞冷冻保存方法,建立一个不含二甲基亚砜(DMSO)和血清(FBS)的高效冷冻保存方法,为细胞治疗等临床实践提供优质细胞.方法:海藻酸微囊包埋鼠胚成纤维细胞(STO细胞)后用不含DMSO和FBS的冷冻保存液进行冷冻保存.设四个对照组:添加10％DMSO和20％FBS的组、仅添加10％DMSO的组、仅添加20％FBS、DMSO和FBS均不添加组.在冷冻前后对各实验组细胞用台盼兰染色,进行细胞计数,计算细胞存活率,同时利用溴乙锭的二聚物(EthD)、钙黄绿素-AM(Calcein-AM)进行染色观察细胞的形态,且进一步验证细胞存活率;解冻复苏后用MTT法评估细胞的增殖速度和生长活力.结果:冷冻保存30天后对各组的细胞数量、细胞存活率、细胞形态和解冻复苏后细胞的生长活力进行比较发现,海藻酸微囊包埋冷冻组的细胞数、细胞存活率、细胞形态和生长活力均与添加DMSO和FBS的组之间无显著性差异,而与其它三个对照组呈显著性差异.结论:使用海藻酸微囊替代DMSO和FBS保存STO细胞,能有效的维持细胞形态、数量、存活率,同时不影响细胞的生长活力,从而建立了一个不含DMSO和FBS的高效冷冻保存方法.     

灰黄霉素菌的诱变效应

以灰黄霉素产生菌D－756为出发菌株,经过三代紫外线＋氯化锂诱变处理,获得耐氯变株F－1012,该变株在形态特征及产量、耐氯性等方面均发生变化,当发酵培养基中的氯化物浓度由1.5%提高到2.0%,F－1012的大米孢子效价提高了34.5%;当固体平板培养基中氯化物浓度提高到11％时,F－1012的孢子存活率比出发菌株提高了25.5％。     

飞虱虫疠霉分生孢子在不同温湿度组合条件下的存活率

用荧光染色法研究了不同温度（10－30℃）和湿度（51－100％RH）组合条件下飞虱虫疠霉Pandora delphacis分生孢子的存活率。在无放回抽样观察中,孢子弹射后第24h的存活率在51％、74％、85％、90％、95％和100％RH与不同温度的组合中分别为42－81％、69－89％、70－95％、67－100％、76－100％和56－100％。存放4个月后,不同温度下的孢子存活率在51％、74％、85％和90％RH下分别为55－74％、52％－87％、38－73％和1－65％。而在≥95％RH下孢子存活率24h后锐减,至第7d几乎全部失活。以上结果表明,弹射后的飞虱虫疠霉孢子在头24h的存活易受低湿影响,但存活下来的孢子能继续在低湿下存活较久;饱和或接近饱和的高湿度最不利孢子长久存活。     

海藻酸微囊替代DMSO和FBS的STO细胞冷冻保存研穷

目的：改进现有的细胞冷冻保存方法,建立一个不舍二甲基亚砜（DMSO）和血清（FBS）的高效冷冻保存方法,为细胞治疗等临床实践提供优质细胞。方法：海藻酸微囊包埋鼠胚成纤维细胞（STO细胞）后用不含DMSO和FBS的冷冻保存液进行冷冻保存。,设四个对照组：添加10％DMSO和20％FBS的组、仅添加10％DMSO的组、仅添加20％FBS、DMSO和FBS均不添加组。在冷冻前后对各实验组细胞用台盼兰染色,进行细胞计数,计算细胞存活率,同时利用溴乙锭的二聚物（EthD）、钙黄绿素-AM（Calcein—AM）进行染色观察细胞的形态,且进一步验证细胞存活率;解冻复苏后用MTT法评估细胞的增殖速度和生长活力。结果：冷冻保存30天后对各组的细胞数量、细胞存活率、细胞形态和解冻复苏后细胞的生长活力进行比较发现,海藻酸微囊包埋冷冻组的细胞数、细胞存活率、细胞形态和生长活力均与添加DMSO和FBS的组之间无显著性差异,而与其它三个对照组呈显著性差异。结论：使用海藻酸微囊替代DMSO和FBS保存STO细胞,能有效的维持细胞形态、数量、存活率,同时不影响细胞的生长活力,从而建立了一个不含DMS0和FBS的高效冷冻保存方法。     

唐菖蒲愈伤组织超低温保存（简报）

唐菖蒲愈伤组织在培养了 20～25天后为最佳冷冻材料,通过含5％ DMSO的培养基预培养5天和10％ DMSO 10％甘油的冷冻保护剂处理。都能显著提高冷冻后愈伤组织的存活率,而且分步冷冻较快速冷冻效果更好。经过冷冻后的愈伤组织成功地得到增殖和植株再生。     

飞虱虫疠霉分生孢子在不同温湿度组合条件下的存活率*

用荧光染色法研究了不同温度（１０～３０℃）和湿度（５１～１００％ＲＨ）组合条件下飞虱虫疠 霉 Ｐａｎｄｏｒａ ｄｅｌｐｈａｃｉｓ分生孢子的存活率。在无放回抽样观察中,孢子弹射后第２４ ｈ的存活 率在５１％、７４％、８５％、９０％、９５％和１００％ＲＨ与不同温度的组合中分别为４２～８１％、６９～８９％、７０～ ９５％、 ６７～１００％、 ７６～１００％和 ５６～１００％。存放４个月后,不同温度下的孢子存活率在 ５１％、 ７４％、 ８５％和 ９０％ＲＨ下分别为 ５５～７４％、 ５２～８７％、 ３８～７３％和 １～６５％。而在≥９５％ ＲＨ下孢子存活率 ２４ｈ 后锐减,至第７ ｄ几乎全部失活。以上结果表明,弹射后的飞虱虫疠霉孢子在头２４ ｈ的存活 易受低湿影响,但存活下来的孢子能继续在低湿下存活较久;饱和或接近饱和的高湿度最不 利孢子长久存活。     

坛紫菜原生质体的发育研究

用2％的海螺酶和1％的纤维素酶混合,将坛紫菜叶状体的4种不同细胞类型即:营养细胞、根丝细胞、精子囊和果孢子囊,分别解离成原生质体,并研究了这些不同部位和不同生长时期。细胞的生长、发育途径。由根丝细胞分离的原生质体能长成新的叶状体;由早期中部营养细胞分离的原生质体,有70％长成新的叶状体,其余的发育成精子囊和果孢子囊。再生叶状体在室内培养,能正常成熟。由精子囊和果孢子囊分离的原生质体,即精子细胞和果孢子细胞不能再生叶状体。前者形成新的精子囊放散精子,后者形成新的果孢子囊,放散果孢子发育成丝状体。晚期紫菜与早期紫菜比较,再生叶状体的数量显著减少,而发育成精子囊和果孢子囊的数量则大大增多。     

胰岛冷冻保存方法研究进展

本文就目前国内外所研究的胰岛及胰腺组织碎片冷冻保存方法进行了总结,认为胰岛冻存前可进行24小时培养或不培养;抗冻剂DMSO浓度以10％(1.5mol/L)为佳;4℃或0℃平衡30分钟;缓慢降温至-70℃,投入液氮;快速复温(200℃/分)后冰浴中倍比稀释透出DMSO为较理想的冻存和复苏模式。该模式可以最小限度地降低胰岛的损伤,提高胰岛存活率及保持较高的胰岛素分泌功能。     

秋水仙碱对大麦离体培养小孢子存活与成苗的影响

以4份大田生长的优良大麦品种／品系为材料,采用超速旋切法分离小孢子进行培养,提取液和预处理液中添加适当浓度的秋水仙碱可明显提高大麦小孢子的存活率,胚状体的成苗潜力。     

秋水仙碱对大麦离体培养小孢子存活与成苗的影响

以4份大田生长的优良大麦品种/品系为材料,采用超速旋切法分离小孢子进行培养.提取液和预处理液中添加适当浓度的秋水仙碱可明显提高大麦小孢子的存活率、胚状体的成苗潜力.     

人工扩繁代异色瓢虫卵和成虫最适冷藏条件的探讨

探讨了人工扩繁异色瓢虫时卵和成虫的最适冷藏条件。卵的最适保存温度是 1 0℃ ,冷藏 1 5d内孵化率平均在 60 %以上。成虫的最适保存温度是 1 0℃ ,如将刚羽化的成虫直接在该温度下冷藏 ,冷藏 40d时存活率能保持在 5 0 %左右 ;如将刚羽化成虫先在 1 5℃、0L∶2 4D条件下处理 1 6d,然后置于 1 0℃下冷藏 ,经冷藏 70d后存活率接近 1 0 0 % ,冷藏 90d后存活率仍高于 70 %。表明经一定条件下预处理后再冷藏成虫能保持较高的存活率和较长的存活期 ,可满足人工扩繁时对成虫的冷藏要求。     

二甲基亚砜对黑麦根尖分生组织细胞超显微结构的影响

黑麦根尖在原位用二甲垫亚砜(DMSO)处理之后,电子显微镜下观察发现根尖分生组织区细胞的细胞核和细胞质内也出现类似微丝的微纤丝结构。与我们以前在经DMSO处理过的黑麦小孢子母细胞核中所看到的微纤丝结构一样,根尖分生组织区细胞中微纤丝结构直径也约为6—9 nm,许多根微纤丝平行地排列在一起构成微纤丝束,本研究提示DMSO对于植物的体细胞和小孢子母细胞具有相同的生物学效应。也提示黑麦根尖分生组织细胞和小孢子母细胞的核基质可能具有相似的组成。     

二甲基亚砜对秀丽线虫运动、个体发育和生殖的影响

本研究探讨了不同浓度二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)对秀丽线虫运动、个体发育以及生殖的影响。结果显示:DMSO浓度≥2.5%时,线虫咽泵运动次数显著下降;DMSO浓度≤0.5%时,线虫头部摆动次数显著增加;DMSO浓度≤2.5%时,线虫体长和体宽无明显影响,浓度为5.0%时,抑制线虫个体发育作用明显;DMSO浓度0.5%,线虫子宫内怀卵数增加,而后代数目减少;各试验浓度DMSO对单侧性腺臂卵母细胞数目均无显著影响。综上所述,DMSO对秀丽线虫具有一定毒性作用,且对不同指标产生毒性的浓度阈值不同,在以线虫为模型的药物研究中,为排除DMSO对线虫的毒性作用给试验结果造成的影响,助溶剂DMSO的最佳使用浓度应为0.5%,本研究为今后对秀丽线虫的研究提供研究数据。     

低能氮离子注入西瓜胚芽的存活率的初步研究

以西瓜胚芽为材料 ,研究了低能氮离子注入植物活体组织的存活率和二甲亚砜 (DMSO)预处理对存活率的影响。结果表明 ,真空冰冻对存活率有一定影响 ,离子注入损伤是植物活组织在离子注入时存活率降低的主要原因 ;在能量为 2 5 ke V,总剂量为 3.9× 10 1 6ions/ cm2 ,脉冲剂量为 1.3× 10 1 4 ions/ cm2 的注入参数下 ,1%的 DMSO预处理 2 5～ 35分钟可以降低失水率并大大提高胚芽的存活率。由此讨论了进一步扩大低能离子注入的应用范围 ,以及在果树、花卉和无性繁殖的作物上进行诱变育种或遗传转化的可能性。     

大气 CO2 浓度升高缓解高浓度 NH4+ 对坛紫菜(Porphyra haitanensis)生理特性的胁迫作用

研究不同 CO2 浓度与 NH4+ 浓度交互作用对坛紫菜(Porphyra haitanensis)生长与光合作用的影响。经过 7 d 培养 , 结果表明 120 μmol·L− 1 NH4+ 浓度最有利于坛紫菜的生长 , 此时坛紫菜的光合色素含量、最大光化学量子产量(Fv/Fm), 最大相对电子传递速率(rETRm)也最高; 同时, 升高的 CO2 浓度促进了坛紫菜的生长与光合作用。 NH4+浓度高于 120 μmol·L− 1, 坛紫菜的生长随 NH4+ 浓度增高而降低 ; 坛紫菜的光合活性也受到抑制。但是, 在高 CO2 浓度培养条件下 , 坛紫菜生长与光合活性随 NH4+ 浓度增高而降低的速率变慢。 本研究表明 , 大气 CO2 浓度升高能缓解高浓度 NH4+对坛紫菜所造成的生理胁迫作用。     

利用城市垃圾发酵生产绿色木霉孢子

研究利用城市生活垃圾发酵生产绿色木霉孢子的可行性,培养条件和发酵过程中的种群密度变化规律。结果表明,城市生活垃圾适宜作为生产木霉孢子的培养基质;合适的培养条件为垃圾培养基质中添加 ３０％（Ｗ／Ｗ）的麸皮,接种量 ３０％（ｖ／ｗ）,发酵 ８—１０ｄ,孢子密度可达 １０９／ｇ以上。