横纹肌样瘤的起源研究——高变异率BHK-21细胞致裸鼠产生恶性横纹肌样瘤的实验研究

横纹肌样瘤（ＲＴ）的起源迄今仍是世界上悬而未决的重大难题。第一例ＲＴ发现于肾脏。但迄今发现的ＲＴ均难以复制成功。在纯化３代的肿瘤阴性对照猫肾和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率为０％（０／３２）,肿瘤阳性对照Ｈｅｌａ细胞皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率为１００％（４０／４０）的前提下,ＢＨＫ－２１细胞皮下接种裸鼠均产生进行性生长的恶性肿瘤（６５／６５）,其中染色体众数为４０±２（比率５８％～６８％）的ＫＡ株致ＲＴ比率为５２．３８％（１１／２１）,具有两个染色体众数４０±２（比率４１％～５３．５）和７２±２（比率３１％～３５％）的ＹＡ株致ＲＴ的比率为８３．３３％（１０／１２）,染色体众数为７３±３（比率４２％～５０％）的成瘤细胞体外再培养ＮＭ２８／ＹＡ株致ＲＴ的比率为７１．４３％（１５／２１）,染色体众数为４２（比率２８％～３０％）的Ｍ株致ＲＴ的比率为０％（０／１０）,致形态类似于分化比较好的平滑肌肉瘤的恶性肿瘤的比率为１００％（１０／１０）,可见ＢＨＫ－２１细胞不能用作病毒活疫苗培养基质,可替代Ｈｅｌａ细胞用作恶性肿瘤阳性对照细胞。高变异率ＢＨＫ－２１细胞株皮下接种无胸腺裸鼠大多产生恶性ＲＴ（２６／４２）,但要求完形活细胞接种量要大（２～９×１０７／鼠）,肿瘤产生迅速,生长快速,血管丰富,供血充分,接种细胞后１０～２０天或２～３周肿瘤长径×短径均值基本达到３０ｍｍ×２０ｍｍ标准。其它高变异率细胞系接种丧失免疫机能的无菌实验动物,如环境条件和生长状况达到上述标准,理当可能产生恶性ＲＴ。ＲＴ在模型动物体内的首次发现和成功复制,为弄清ＲＴ的起源问题提供了机会。可见,肾上皮是恶性ＲＴ的重要起源组织,本研究开辟了ＲＴ起源研究的新阶段。克隆出致ＲＴ的高变异率ＢＨＫ－２１细胞株,建立ＲＴ裸鼠模型,并应用于ＲＴ的临床诊断防治或进一步探索,都具有重大意义。     

成人肾恶性横纹肌样瘤的研究:1例报告及文献复习

应用组织化学、免疫组织化学及电镜技术对我国首例成人肾恶性横纹肌样瘤（ｍ ａｌｉｎｇａｎｔｒｈａｂｄｏｉｄｔｕｍ ｏｒ, ＭＲＴ） 进行了研究, 与婴幼儿ＭＲＴ相比本例有以下临床病理特点： （１） 以血尿为早期和唯一症状,肿块缺乏特征性ＣＴ 改变; （２） 光镜下大量ＰＡＳ阳性嗜酸性球形小体多位于细胞外, 电镜下细胞外小体由微丝构成并有界膜包绕; （３） 免疫组化显示肿瘤细胞向神经外胚层、横纹肌和组织细胞多向性分化; （４） 肿瘤侵袭力较低, 高度表达ｎｍ ２３－Ｈ１ 蛋白, 随访１８个月术后化疗效果佳, 提示其恶性度较婴幼儿ＭＲＴ 低。     

横纹肌样瘤的起源研究——高变异率BHK-21细胞致裸鼠产生恶性横纹肌样瘤的实验研究(续)

３讨论和结论３．１．不同核型细胞的致瘤性不同,细胞染色体数目变异大小和致癌／致瘤性强弱相关与肿瘤细胞系高变异率株在裸鼠体内的快速选育犬（Ｃａｎｉｓｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）、猫（ＦｉｌｉｓＣａｔｕｓ）和叙利亚地鼠（Ｍｅｓｏｃｒｉｃｅｔｕｓａｕｒａｔｕｓ）...     

恶性横纹肌样瘤(MRT)的起源研究取得突破——高变异率BHK-21细胞移植于裸鼠皮下多呈MRT细胞形态生长为阐明该瘤的起源问题提供了机会

弄清恶性横纹肌样瘤（ＭＲＴ）的组织细胞起源是进行诊断并攻克防治问题的基础。自１９７８年首例发现于肾脏以来,有关该肿瘤的报道逐年增多,但迄今发现的ＭＲＴ均难以复制成功,ＭＲＴ的起源仍是医学上悬而未决的重大难题。作者在纯化３代的肿瘤阴性的对照猫肾和犬肾原...     

病毒疫苗制备用不同核型VERO细胞系在裸鼠体内致癌/致瘤性的系统实验研究

生产疫苗用细胞系可能具有致瘤性,一些常用的细胞系需要检查不同代次有无致癌性。在建立传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产病毒活疫苗所用8株VERO细胞系在219只裸鼠进行了致癌(瘤)实验。本研究结果表明,VERO细胞染色体核型可发生变异,亚四倍体JA株与超二倍体KA株具有强的致癌性,不能用于致弱活病毒疫苗制备,但可替代HeLa细胞系用作恶性肿瘤阳性对照细胞。筛出无致瘤性的YB、dC、M和JB株亚二倍体VERO细胞系,可替代BHK-21细胞用于狂犬病减毒活疫苗制备。VERO细胞系染色体遗传相对稳定。不同代次变化不大。研究发现细胞染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性,不同核型细胞致瘤性不同,细胞染色体数目变异大小和致癌性成正相关,通过体内外交替选育可在裸鼠体内快速选育成功高变异率肿瘤细胞系。高变异率HeLa或VERO细胞系移植于裸鼠可能产生恶性横纹肌样瘤。因此,应当强调疫苗生产用细胞系致瘤性评价的重要性。     

人脆性组氨酸三联体（FHIT）基因的克隆及在HeLa细胞中表达的研究

目的：构建人脆性组氨酸三联体（fragile histidine triad gene,fhit）基因与报告基因egfp的双顺反子表达载体及融合表达载体,研究fhit基因过表达对HeLa细胞生长及凋亡的影响。方法：根据已知fhit基因的mRNA序列,RT-PCR得到493bp的cDNA序列,将其构建到pMD18-T中,筛选目的片段插入正确的重组质粒,经限制性内切酶切割,回收目的片段分别插入双顺反子表达载体pIRES2-EGFP和融合表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中。再以脂质体介导转染HeLa细胞,G418筛选稳定转染的克隆,分别通过基因组PCR、RT-PCR、免疫细胞化学及TUNEL法在DNA、RNA和蛋白质水平检测其表达情况。结果：转基因细胞基因组PCR获得493bp片段,证明目的基因已整合到细胞基因组中;RT-PCR检测其在RNA水平得到表达;免疫细胞化学及TUNEL法分析表明fhit基因在HeLa细胞内实现了稳定遗传与表达。结论：实验证明fhit基因过表达可有效促进HeLa细胞的凋亡。     

封闭Skp2基因表达对大肠癌LS-174T细胞裸鼠皮下移植瘤生长与转移抑制的研究

目的:建立人大肠癌LS-174T细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,应用Skp2基因特异性siRNA重组腺病毒治疗,观察其在体内对肿瘤生长和转移的影响,并探讨其相应的作用机制.方法:将大肠癌LS-174T细胞以5×106个/只接种于雌性裸鼠右侧腋窝皮下,待平均瘤体积长至50～150mm3时筛选成模动物分组给药,分别给予重组腺病毒pAD-Skp2/siRNA 5×108和5× 109pfu/只瘤内注射,阳性组给予今又生5×109pfu/只瘤内注射,另设空病毒对照组.每周给药2次,连续4周,以安乐死时肿瘤体积大小和重量来评价治疗效果.然后用Western Blot检测肿瘤组织中Skp2、p27kipl、c-myc、Bcl-2的表达,用免疫组化法检测肿瘤组织中MMP-2的表达.结果:安乐死时阴性对照组平均肿瘤体积与空病毒对照组生长情况基本一致(P≥0.05);今又生组平均肿瘤体积明显小于模型组(P≤0.05);pAD-Skp2/siRNA低、高剂量组平均瘤体积均显著低于模型组(P≤0.01),且有剂量依赖性.今又生组瘤重抑制率为58.16％,pAD-Skp2/siRNA低、高剂量组瘤重抑制率分别为75.59％、86.45％.Skp2蛋白表达在模型组、空病毒对照组和今又生组均有较强表达,而在pAD-Skp2/siRNA低剂量和高剂量组均未见表达;而p27kipl仅在pAD-Skp2/siRNA低剂量和高剂量组有表达,其余三组均未见其表达;c-myc和bcl-2表达趋势一致,均在模型和空病毒对照组有表达,而在今又生组和pAD-Skp2/siRNA两个剂量组均表达明显减弱.模型组和空病毒对照组有棕黄色阳性表达,而今又生组和pAD-Skp2/siRNA两个组均未检测到MMP-2阳性表达.结论:在高转移性大肠癌LS-174T裸鼠移植瘤模型中,封闭Skp2基因可以抑制肿瘤的增殖和转移,其作用机制与细胞周期调控、细胞凋亡中的c-myc和bcl-2以及基质金属蛋白酶MMP-2相关.     

咖啡酸对食管鳞状细胞癌KYSE450裸鼠移植瘤生长的影响及分子机制研究

摘要 目的：探讨与研究咖啡酸对食管鳞状细胞癌KYSE450裸鼠移植瘤生长的影响及分子机制。方法：将食管鳞状细胞癌移植瘤裸鼠（n=48）随机平分为三组-模型组、5-氟尿嘧啶组与咖啡酸组。三组分别经腹腔注射0.2 mL生理盐水、5-氟尿嘧啶25 g/kg、5-氟尿嘧啶25 g/kg与咖啡酸50 mg/kg,2次/周,持续4周。结果：5-氟尿嘧啶组与咖啡酸组治疗第2周与第4周的体重高于模型组（P<0.05）,咖啡酸组高于5-氟尿嘧啶组（P<0.05）。5-氟尿嘧啶组与咖啡酸组治疗第2周与第4周的肿瘤体积少于模型组（P<0.05）,咖啡酸组高于5-氟尿嘧啶组（P<0.05）。5-氟尿嘧啶组与咖啡酸组治疗第4周的血清TNF-α与IL-6含量低于模型组（P<0.05）,咖啡酸组低于5-氟尿嘧啶组（P<0.05）。5-氟尿嘧啶组与咖啡酸组治疗第4周的移植瘤Bax、Caspase-3蛋白相对表达水平与凋亡指数高于模型组（P<0.05）,咖啡酸组高于5-氟尿嘧啶组（P<0.05）。结论：咖啡酸在食管鳞状细胞癌裸鼠的应用能与5-氟尿嘧啶发挥协同作用,能通过上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,促进移植瘤细胞凋亡,抑制炎症因子的表达,减少血管总数,从而抑制移植瘤生长,促进恢复裸鼠体重。     

抗氧化剂对HeLa细胞在竹红菌甲素（HA）光敏损伤下的保护作用的研究

通过细胞台盼兰拒染检测、电镜观察以及３Ｈ—Ｔｄｒ同位素掺入等方法,分别从细胞水平及分子水平上,定性定量测定了维生素Ｅ（ＶｉｔＥ）、丁羟基甲苯（ＢＨＴ）、阿魏酸钠（ＳＦ）三种抗氧化剂对于竹红菌甲素（ＨＡ）光敏所致ＨｅＬａ细胞损伤的抑制作用。结果表明：三种抗氧化剂对于细胞的损伤均有不同程度的抑制作用,其中ＶｉｔＥ的抑制作用最明显,ＢＨＴ及ＳＦ的抑制作用则较弱,提示脂质过氧化在细胞膜和细胞核损伤中起着重要的作用。