甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

TGFα-PE 40的基因克隆、表达和对人癌细胞生长的抑制作用

本文报告了构建人转化生长因子α和绿脓杆菌外毒素融合基因的表达型重组质粒pYX382和pYX 3825,两种质粒转化大肠杆菌BL21后,经IPTG 诱导,表达融合蛋白TGFα-PE 40,表达产物分子量为46 kd,具有和抗TGF a抗体和抗PE 抗体反应的能力,重组质粒pYX 3825带有信号肽顺序,因而在细菌中表达产物大部分被分泌到培基和周质中。TGFa-PE 40具有和细胞表面EGFR 结合的能力,因而,能与过度表达EGFR 的癌细胞结合,将毒素蛋白的活性部分带入细胞而显示对癌细胞蛋白质合成的强烈抑制和对癌细胞的杀伤。     

人体单克隆抗体出世

单克隆抗体现已广泛应用于医学诊断,大有希望成为治疗药剂。目前,这种抗体是通过啮齿动物产生抗体的脾脏细胞,与此类动物的“永久性”癌细胞相互融合而生产出来的。美国国立卫生研究院的研究小组,从收集健康人体的一般白细胞入手,将这些细胞与用荧     

以“癌”治癌的新疗法

在七十年代,英国两名科学家发现β淋巴细胞的表面有抗体分子。这些抗体分子的尾部象爪子一样裸露在细胞表面,它一旦与抗原结合,β细胞就象触电一样活动起来,进行活跃的分裂,并产生大量抗体(与抗原相对应的专一性抗体)。人造癌“hybridomas”是用一个myeloma细胞和一个激活了的β淋巴细胞融合而成(激活就是预先把β淋巴浸泡在少量聚乙烯醇中)。融合的结果,形成一个大细胞。它既具     

抗HEV嵌合抗体的构建及在CHO细胞中的表达

通过RT-PCR方法从分泌戊型肝炎(戊肝)病毒中和性鼠源单克隆抗体(单抗)8C11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区(VH)、轻链可变区(VK)序列,并分别克隆到含有人gamma 1重链和kappa轻链恒定区序列的pcDNA3.1/Hygro和pcDNA3.1( )质粒中,共转染中华仓鼠卵巢癌细胞(CHO)细胞.RT-PCR结果表明,转染的CHO细胞转录了嵌合重链及轻链基因,间接ELISA及Western blot结果表明:翻译出的两种多肽在细胞内正确组装成嵌合抗体分子,并可分泌至细胞外,表达的嵌合抗体保留了原鼠单抗的抗原结合特异性及对8H3结合抗原的增强作用.8C11嵌合抗体的成功表达可降低鼠源性,为探讨戊肝抗体治疗的可能性奠定了基础.     

常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析

抽提常氏肝癌细胞的总RNA,以oligo(dT)为引物,通过两次转换模板,采用LD-PCR合成全长cDNA,在cDNA两端引入SfiI的酶切位点。以λTriplEX2为载体经过包装后构建了常氏肝癌细胞cDNA表达文库。以ADAMs通用抗体,用免疫筛选技术从常氏肝癌cDNA文库中筛选出22个阳性克隆,经测序分析和BLAST检索,证实其中一个为新基因,部分区域具有蛋白酶的功能,对该基因进行了GenBank登录,获注册号为AY078070。该基因的克隆为研究ADAMs相关基因的功能奠定了基础。     

DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用

目的:基于细胞划痕实验研究DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用。方法:首先采用实时定量PCR检测人胃黏膜细胞GES,胃癌细胞MGC803、SGC7901和MKN74中DDX20基因的表达水平,确定DDX20基因高表达和低表达细胞株;进而针对DDX20基因设计并包装过表达及干扰慢病毒,基于实时定量PCR和Western印迹筛选稳定转染细胞株;基于稳定转染细胞株进行细胞划痕实验并采集图片。结果:与正常的胃黏膜细胞GES相比,DDX20基因在MGC803胃癌细胞中表达水平最高,在MKN74胃癌细胞中表达水平次之,在SGC7901胃癌细胞中表达水平最低。转染DDX20过表达慢病毒后,DDX20基因及蛋白表达水平显著增加;转染DDX20干扰慢病毒,特别是sh-RNA-02干扰慢病毒后,DDX20基因及蛋白表达水平显著降低。过表达DDX20基因能显著促进胃癌细胞的迁移,抑制DDX20基因的表达可显著降低胃癌细胞的迁移。结论:DDX20基因是一个肿瘤转移相关基因,通过抑制该基因的表达能有效降低细胞的迁移,为胃癌的临床治疗提供了一个潜在靶点,具有一定的临床应用价值。     

DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用

基于细胞划痕实验研究了DDX20基因对胃癌细胞迁移能力的调控作用。首先采用实时定量PCR检测人胃粘膜细胞GES、胃癌细胞MGC803、SGC7901和MKN74中DDX20基因的表达水平,确定DDX20基因高表达和低表达细胞株;进而针对DDX20基因设计、包被过表达并干扰慢病毒,基于实时定量PCR和Western Blot筛选稳定转染细胞株;基于稳定转染细胞株进行细胞划痕实验并采集图片。结果显示,与正常的胃粘膜细胞GES相比,DDX20基因在MGC803胃癌细胞中表达水平最高、MKN74胃癌细胞中表达水平次之、SGC7901胃癌细胞中表达水平最低。转染DDX20过表达慢病毒后,DDX20基因及蛋白表达水平显著增加;转染DDX20干扰慢病毒后,DDX20基因及蛋白表达水平显著降低,特别是转染干扰组2干扰慢病毒。过表达DDX20基因能显著促进胃癌细胞的迁移,抑制DDX20基因的表达可显著降低胃癌细胞的迁移。结果表明,DDX20基因是一个肿瘤转移相关基因,通过抑制该基因的表达能有效降低肿瘤细胞的迁移,为胃癌的临床治疗提供了一个潜在靶点,具有一定的临床应用价值。     

展示生长抑素的猪细小病毒样颗粒构建及其免疫原性

为了获得既可预防猪细小病毒感染又能促进生长的嵌合病毒样颗粒疫苗,以PPV NJ-a株基因组DNA为模板扩增VP2基因片段,在VP2基因N端融合人工合成的4拷贝生长抑素基因,构建杆状病毒转移载体pFast-SS4-VP2。通过转化DH10Bac感受态细胞,pFast-SS4-VP2与穿梭载体Bacmid重组,获得重组Bacmid,命名为rBacmid-SS4-VP2。rBacmid-SS4-VP2转染Sf-9细胞,获得重组病毒rBac-SS4-VP2。SDS-PAGE与Western blotting鉴定可见约68 kDa的rSS4-VP2条带;rBac-SS4-VP2感染细胞IFA检测产生很强的特异性绿色荧光;感染细胞超薄切片电镜观察到大量特征性病毒样颗粒。将重组蛋白分别辅以铝胶、IMS和白油不同佐剂免疫小鼠,通过检测免疫小鼠VP2特异性ELISA抗体、PPV特异性中和抗体、生长抑素的抗体水平及生长激素水平来评价嵌合病毒样颗粒的免疫原性。结果表明,辅以铝胶与IMS佐剂重组蛋白组均产生了与PPV全毒组相似的ELISA抗体与中和抗体反应;重组蛋白免疫组均产生较好的针对生长抑素的抗体反应;免疫小鼠体内生长激素的水平明显升高;其中以铝胶佐剂组产生的各抗体水平最高,白油佐剂组各抗体水平最低。为以后生产安全、有效的颗粒化亚单位疫苗提供了一个新的设计思路,又为应用病毒样颗粒递呈外源肽,从而生产多联亚单位疫苗奠定了基础。     

嵌合抗体轻链基因在家蚕细胞中的重组与表达

用家蚕修饰型核多角体病毒为载体,在家蚕细胞获得人鼠嵌合的抗人小细胞肺癌抗体轻链基因的表达。ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明了抗体轻链基因已组建家蚕病毒基因组中。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ和分析都检测到在重组病毒感染的家蚕细胞中产生了人鼠嵌合的抗体轻链。     

外源性P53基因的表达对NCI-H358细胞生长的影响

目前已经证实,肺癌细胞有多种癌基因异常。这些异常在肺癌的发生和发展过程中可起着重要的作用,Ｐ５３基因是一种与细胞生长密切相关的基因〔１〕。探讨逆转录病毒载体介导外源性Ｐ５３基因对肺癌细胞生长的影响,为肺癌的基因治疗提供实验依据。我们以ＮＣＩ Ｈ３５８细胞为模型,观察研究了Ｐ５３基因对ＮＣＩ Ｈ３５８细胞的形态、生长速度、ＤＮＡ合成、细胞克隆及动物体内癌细胞治疗的影响,作如下总结。     

细胞外基质在个体发育早期中的作用

细胞外基质,是存在于细胞外的基本物质,细胞外基质的主要成分是一些多糖和蛋白,这些物质起着很大的作用,比如连接组织结构,细胞与细胞之间,细胞与环境之间都是基于细胞外基质为物理连接点连接的,对于调节组织的构成主要是细胞之间的连接,和细胞的生理活动主要是细胞的分化具有极大的意义。在动物体幼期,对于细胞的存活,分裂以及分化起着重要作用,在这个时期,控制细胞外基质产生以及分泌的基因得以疯狂表达,然而,在一些癌细胞的表面,一些细胞外基质也在疯狂表达,我们知道,细胞外基质对细胞的分化有重要意义,一旦脱离了某些细胞外基质,细胞将停止分化,这说明正常细胞的细胞外基质和癌细胞的细胞外基质是不同的,并且一旦脱离了特定细胞外基质,细胞将会凋亡。我们可以利用Real-time PCR技术去测得正常细胞与癌细胞的某些基因的相对表达量,弄清楚这些基因在两者中的相对表达量的不同,分析哪些细胞外基质对生物体是有益的,哪些促进了癌细胞的生长,对于哪些癌细胞需要的细胞外基质,而正常细胞不需要的,可以利用生物导弹分解,破坏癌细胞赖以生存的环境,杀死癌细胞,这些对于我们去治疗癌症具有重要意义。     

浦乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S＋PreS1融合抗原的理化和生物学性状

研究了哺乳动物细胞（转基因GdSS1-18细胞系）分泌的乙型肝炎（乙肝）病毒表面S＋PreS1融合抗原（SS1）纯品的理化及生物学性状,结果表明,经HPLC柱层近呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS－PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝扫描分析其各条带分别各占22．3％,77．7％、0％、Western blot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明,S、PreS1是特异性条带;N－末端的氨基酸序列和与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明：与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。     

用尖吻蝮蛇毒、蝗蛇毒及抗蛇毒血清处理小鼠S_(180)、EAC腹水癌的初步观察

本文报道了尖吻蝮蛇毒、蝮蛇毒及抗蛇毒血清能使接种S_(180)、EAC腹水癌的小鼠明显延长存活时间、降低接种率,但不能完全阻止痛细胞生长。体外具有较明显的导致,菡细胞肿胀、膜破裂,核纤维化,坏死等。从腹水酶活力测定及抗血清初步研究结果表明,癌细胞病变中产生的某些抗原物质可能与蛇毒中的酶和毒蛋白相近。因此注射蛇毒后可在体内产生相关抗体,中和癌细胞产生的毒素以达到治疗目的。     

防癌细胞扩散的两项成果

癌细胞是正常细胞因某种因素（如内因的细胞DNA异化等和外因的致癌物诱发）而造成的恶果。一旦在机体内扩散而又未来得及有效遏制,无疑对机体的安全构成严重威胁。防止癌细胞扩散是战胜癌症极为重要的一步,也是一个重要难题。国内外对癌细胞扩散的研究格外活跃。有两项成果值得注意：一、RNA可阻断癌细胞扩散：英国牛津大学研究人员发现利用RNA分子能够阻断肿瘤细胞中刺激癌细胞扩散的危险基因,从而为至于癌症带来新希望。     

体外展示技术及其在抗体工程中的应用

体外展示技术包括核糖体展示技术、mRNA展示技术、DNA展示技术,是在无细胞蛋白质表达体系内将基因型和表型通过一定的方法连接在一起,体外高通量的筛选多肽和蛋白质的技术。抗体的产生是一个不断选择的过程,利用体外展示技术在体外选择针对某一抗原的抗体分子,并结合基因工程技术对抗体进行改造,以产生高亲和力、高特异性的抗体。体外展示技术的研究和应用已越来越广泛,有望成为下一代的抗体制备技术。     

基因治疗怎样避免免疫反应

基因治疗怎样避免免疫反应基因治疗是常用没有复制能力的残损病毒如工程腺病毒作载体把治疗用的基因导入患者细胞的,但免疫系统不能区别残损病毒与完整病毒,会杀灭所有已受工程腺病毒感染的细胞,而且,免疫反应还产生中和腺病毒的抗体,所以,免疫反应是基因治疗的最大...     

山奈酚对胃癌细胞PARP1以及P53基因表达的影响研究

胃癌(GC)是最常见的恶性肿瘤之一,是人类健康的主要威胁,其发病机制是一个单基因或多基因逐步突变的过程,与细胞的侵袭、增殖和转移有关,包括癌基因遗传和表观遗传的突变、肿瘤抑制基因、DNA修复途径基因、细胞周期途径基因和幽门螺杆菌感染等。而山奈酚具有多种生物学活性,能够抑制多种肿瘤细胞的细胞周期,诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞/组织的侵袭及转移。因此本研究用不同浓度的山奈酚处理胃癌细胞,并检测了胃癌细胞的形态变化情况、癌细胞凋亡相关因子P53和PARP1基因的表达水平和其对应的蛋白质表达变化。结果表明大于100μmol/L山奈酚处理后的胃癌细胞中P53基因和P53蛋白的表达水平被显著提高,而相反的PARP1基因和蛋白的表达则被显著抑制,且山奈酚处理后胃癌细胞的凋亡数目也明显增加,因此本实验结果表明,山奈酚能够有效的促进胃癌细胞凋亡的发生,以此来达到抑制癌细胞恶性增殖的作用。这一结果可以为后续针对胃癌新疗法的研究提供一些思路和理论支持。     

利用B细胞培养和RT-PCR技术从我国HIV-1感染者中筛选膜蛋白特异性单克隆抗体的初步研究

本研究通过采集1型人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者抗凝全血,分离出外周血单个核细胞,然后用磁珠分选纯化记忆性B细胞和体外活化记忆性B细胞,促使其分泌抗体,用ELISA法识别阳性B细胞克隆,并提取阳性B细胞的RNA,从中扩增抗体重链和轻链基因并克隆到表达载体中,再用携带重链基因的质粒和携带轻链基因的质粒共转染293T细胞,获得HIV-1特异性人单克隆抗体,进行抗体特性的鉴定。结果从1例HIV-1感染者的记忆性B细胞中筛选出了4株HIV-1包膜糖蛋白(Envelope glycoprotein,Env)特异性人单克隆抗体,其中2株具有较好的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用活性,另有1株对HIV-1假病毒有较弱的中和活性。说明我们成功地引进了利用B细胞培养和RT-PCR技术从人体淋巴细胞中筛选特异性抗体基因的人单克隆抗体技术平台。用该技术可以成功获得HIV-1Env特异性单克隆抗体,为将来从能产生高滴度广谱中和抗体的感染者体内筛选广谱中和抗体打下了基础。     

Nat Med:利用CRISPR-Cas9进行全基因组筛选找到胰腺肿瘤弱点

正在科学家们建立了CRISPR-Cas9基因编辑技术之后,该技术得到了广泛利用。一些研究利用CRISPR-Cas9基因编辑工具进行基因筛选,在癌细胞内找到了一些可以用于开发潜在治疗方法的基因弱点。最近,来自加拿大多伦多大学的研究人员在RNF43突变的胰腺导管腺癌(PDAC)细胞中进行了全基因组范围的CRISPR-Cas9筛选,并找到了可以用于治疗该类型癌症的潜在抗体药物。这种类型的PDAC依赖Wnt信号进行增殖。在这项研究中,研究人员通过筛选发现一个有FZD5参与的Wnt信号通路