参仙升脉口服液联合曲美他嗪对缓慢性心律失常患者外周血单个核细胞中cAMP/PKA信号通路相关蛋白水平的影响

摘要 目的：观察缓慢性心律失常（BA）经参仙升脉口服液联合曲美他嗪治疗4周后的临床疗效及对外周血单个核细胞中环磷酸腺苷( cAMP) /蛋白激酶A（PKA）信号通路相关蛋白水平的影响。方法：将2017年8月~2020年8月期间我院收治的126例BA患者随机分为两组,对照组和观察组,各63例。对照组接受曲美他嗪治疗,观察组接受参仙升脉口服液联合曲美他嗪治疗,观察并对比两组24 h动态心电图指标（最慢心率、静息状态下心率、24 h平均心率）、心功能指标[左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、心脏指数(CI)]、疗效、外周血单个核细胞中cAMP/PKA信号通路相关蛋白（cAMP蛋白、PKA蛋白）水平及不良反应。结果：观察组的临床总有效率90.48%（57/63）高于对照组的71.43%（45/63）,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗4周后,与对照组比较,观察组静息状态下心率、24 h平均心率、最慢心率均较高（P<0.05）。治疗4周后,观察组LVEF、CO、CI高于对照组（P<0.05）。治疗4周后,观察组外周血单个核细胞中cAMP蛋白、PKA蛋白水平高于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间对比无差异（P>0.05）。结论：参仙升脉口服液联合曲美他嗪治疗BA患者,可改善治疗效果,促进24h动态心电图、心功能指标改善,其主要作用机制可能与调节cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达有关。     

竹节参皂苷IVa减轻异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌纤维化作用机制研究

摘要 目的：探讨竹节参皂苷（IVa）减轻异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化作用机制。方法：白变种实验室老鼠（Balb/C）小鼠40只并随机分为4组：正常对照组（n=10）、ISO模型组（n=10）、IVa低剂量组（n=10）、IVa高剂量组（n=10）。采用皮下注射ISO构建小鼠心肌纤维化模型,IVa剂量组在建模同时给予IVa治疗,正常组给予等量生理盐水。采用马松（Masson）三色标准和HE染色方法分析评估心脏组织形态学和胶原沉积。采用小麦胚芽凝集素（WGA）染色法测定心肌细胞面积。蛋白免疫印迹试验检测细胞自噬相关标志物（LC3-Ⅱ、Beclin1和p62）和腺苷单磷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/自噬激活激酶1（ULK1）信号通路相关标志物。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中血管紧张素II（Ang II）和I型前胶原羧基末端肽（PICP）的含量。结果：高剂量IVa（15mg/kg）治疗后,HW/BW和LVW/BW较ISO模型组升高,而血清中Ang II和PICP含量降低。IVa以剂量依赖的方式减轻心肌细胞在心脏组织中的损伤。皮下注射ISO后,心肌间质内胶原沉积明显,IVa治疗后胶原沉积明显减少。IVa可有效降低ISO诱导的小鼠心肌细胞面积大小。IVa能有效抑制ISO诱导的LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白降低,减少p62蛋白增多。AMPK直接磷酸化ULK1（Ser555）,通过抑制mTOR磷酸化间接抑制ULK1（Ser757）磷酸化,均参与了ISO诱导的心肌纤维化小鼠自噬活性的降低;此外,IVa低剂量组和IVa高剂量组均显著增加了AMPK磷酸化,并抑制了mTOR磷酸化,降低了ULK1(Ser757)磷酸化。结论：IVa通过AMPK/mTOR/ULK1途径激活自噬,减轻了ISO诱导的心肌纤维化。表明IVa是一种潜在的抗心肌纤维化候选药物,是治疗心脏病的潜在药物靶点。     

红景天苷调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对结肠癌SW480细胞裸鼠的肝脏损伤的影响

摘要 目的：探讨红景天苷（Sal）调节单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/Unc51样激酶1（ULK1）信号通路对结肠癌SW480细胞裸鼠肝脏损伤的影响。方法：通过皮下注射SW480细胞悬浮液建立肝转移裸鼠模型,将造模后的裸鼠随机分为模型组、Sal低剂量（Sal-L,50 mg/kg Sal）组、Sal中剂量（Sal-M,100 mg/kg Sal）组、Sal高剂量（Sal-H,200 mg/kg Sal）组,Sal-H+AMPK抑制剂（Compound C,200 mg/kg Sal+10 mg/kg Compound C）组,以未接种SW480细胞悬液的裸鼠作为对照组。腹部主动脉取血,检测裸鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（AST）、天冬氨酸氨基转移酶（ALT）水平;处死裸鼠,检测肝转移瘤数目及肝脏重量;HE染色观察肝脏组织病理变化;qRT-PCR检测肝脏组织中AMPK、mTOR、ULK1 mRNA表达水平;Western blot检测肝脏组织中自噬（Beclin1、p62）蛋白及通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组裸鼠组织中出现肝转移瘤,肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著增加（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组相比,Sal-L、Sal-M、Sal-H组肝转移瘤数目、肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著降低（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著增加（P<0.05）;与Sal-H组相比,Sal-H+Compound C组肝转移瘤数目、肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著增加（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论：Sal可通过减少裸鼠肝转移瘤形成,保护裸鼠肝脏,其机制可能与激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路,促进肝脏自噬有关。     

温补肾阳法治疗肾阳虚模型大鼠多尿症状的机制研究

摘要 目的：探讨温补肾阳法治疗肾阳虚模型大鼠多尿症状的作用机制。方法：90只雄性SD大鼠随机分成干预组、抑制剂组、空白组、模型组,干预组根据中药剂量分为高剂量组、中剂量组、低剂量组。模型组、干预组及抑制剂组接受肾阳虚模型制备,干预组在成模后每日接受7 g/kg、14 g/kg、28 g/kg剂量中药灌胃,连续灌胃14 d。抑制剂组大鼠接受尾静脉注射通路抑制剂H-89。干预结束后比较各组脏器指数、24 h尿量、24 h尿蛋白水平以及尿液钠离子（Na⁺）、钾离子（K⁺）、氯离子（Cl^-）浓度、肾脏病理变化、血清醛固酮（ALD）、乙醇脱氢酶（ADH）、促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、大鼠促肾上腺皮质激素（ACTH）、大鼠皮质醇（CORT）、蛋白激酶A（PKA）、蛋白激酶A（cAMP）含量、肾脏组织水通道蛋白2（AQP-2）蛋白表达的变化。结果：温补肾阳法可明显减少肾阳虚模型大鼠尿量,改善临床症状,且具有一定的剂量依赖性（P<0.05）。经过中药干预后大鼠24 h尿蛋白、脏器指数、尿液Na⁺、Cl^-均下降,尿液K⁺、血清ALD、ADH、CRF、ACTH、CORT、PKA、cAMP含量、肾脏组织AQP-2蛋白表达上调（P<0.05）,且抑制剂H-89可阻断该作用。结论：温补肾阳法可明显改善肾阳虚模型大鼠多尿症状,其作用机制可能通过cAMP-PKA-AQP2通路介导。     

甜橙黄酮通过调节AMPK/mTOR信号通路改善呼吸道合胞病毒感染大鼠的肺组织损伤

摘要 目的：探讨甜橙黄酮通过AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对呼吸道合胞病毒（RSV）感染大鼠肺组织损伤的改善作用。方法：将30只雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组、甜橙黄酮低剂量组（14 mg/kg）、甜橙黄酮中剂量组（28 mg/kg）、甜橙黄酮高剂量组（56 mg/kg）、甜橙黄酮高剂量+AICAR组（56 mg/kg+500 mg/kg的AMPK激活剂AICAR）,计算大鼠肺指数。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法测定肺组织RSV病毒载量,酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠肺泡灌洗液炎症因子水平,HE染色测定肺组织病理,蛋白免疫印迹（Western blot）法测定AMPK/mTOR通路蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组大鼠肺组织存在炎性浸润,排列松散,肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、mTORC1蛋白表达升高（P＜0.05）;与模型组相比,甜橙黄酮低剂量组、甜橙黄酮中剂量组、甜橙黄酮高剂量组大鼠肺组织损伤减轻,大鼠肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、mTORC1蛋白表达降低（P＜0.05）;与甜橙黄酮高剂量组相比,甜橙黄酮高剂量+AICAR组大鼠肺组织损伤加重,肺指数、肺组织RSV病毒载量、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、炎症评分、p-AMPK/AMPK、MTORC1蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：甜橙黄酮可能通过抑制AMPK/mTOR信号通路发挥对RSV诱导的大鼠抗炎、抗病毒、抗肺部损伤作用。     

7种茵陈单体化合物对黄疸大鼠血清培养的hiHep细胞中水通道蛋白8表达的影响

摘要 目的：探究具有保肝利胆作用的7种茵陈单体化合物（6,7-二甲氧基香豆素、对羟基苯乙酮、绿原酸、咖啡酸、茵陈色原酮、东莨菪内酯和茵陈黄酮）对黄疸大鼠血清培养的hiHep细胞中水通道蛋白8（AQP8）表达的影响。方法：将SD大鼠分为正常组和模型组,通过?琢-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导构建黄疸大鼠模型。检测两组大鼠血清中碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBIL）水平。将人源诱导型肝样细胞（hiHep）随机分为9组：对照组、黄疸血清组（JS组）、黄疸血清+6,7-二甲氧基香豆素组（JS+DME组）、黄疸血清+对羟基苯乙酮组（JS+4-HYD组）、黄疸血清+绿原酸组（JS+CHA组）、黄疸血清+咖啡酸组（JS+CAA组）、黄疸血清+茵陈色原酮组（JS+CAP组）、黄疸血清+东莨菪内酯组（JS+SCO组）和黄疸血清+茵陈黄酮组（JS+ARC组）。对照组细胞使用含10%正常大鼠血清的培养基培养,其他组细胞均使用含10%黄疸大鼠血清的培养基培养。对照组和JS组细胞不做药物处理,其他组细胞均分别使用20 mg/L的相应药物培养48 h。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞活力。检测各组细胞的蛋白质渗透压反射系数σ。通过qRT-PCR检测细胞中AQP8的mRNA水平,通过Western blot检测细胞中AQP8、环磷酸腺苷（cAMP）和蛋白激酶A（PKA）的蛋白表达水平。结果：与正常组比较,模型组大鼠血清中ALP、ALT、AST和TBIL水平均显著升高（P<0.05）。各组细胞活力差异无统计学意义（F=1.085,P=0.391）。与对照组比较,JS组细胞的σ值降低（P<0.05）,与JS组比较,JS+DME组、JS+4-HYD组、JS+CHA组、JS+CAA组、JS+CAP组、JS+SCO组和JS+ARC组细胞的σ值均升高（P<0.05）。与对照组比较,JS组细胞AQP8的mRNA和蛋白相对表达量降低（P<0.05）,cAMP和PKA的蛋白相对表达量降低（P<0.05）。与JS组比较,JS+DME组、JS+4-HYD组、JS+CHA组和JS+CAP组细胞AQP8的mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）,cAMP和PKA的蛋白相对表达量升高（P<0.05）。JS组与JS+CAA组、JS+SCO组和JS+ARC组细胞AQP8的mRNA和蛋白相对表达量以及cAMP和PKA的蛋白相对表达量差异无统计学意义（P>0.05）。结论：本研究表明6,7-二甲氧基香豆素、对羟基苯乙酮、绿原酸和茵陈色原酮可上调黄疸大鼠血清培养的hiHep细胞中AQP8的表达,这可能是茵陈治疗黄疸的机制之一。     

针刺对缺氧缺血性脑损伤大鼠脑神经功能及5-HTR1A/cAMP/PKA信号通路的影响机制研究

摘要 目的：探讨与研究针刺对缺氧缺血性脑损伤大鼠脑神经功能及5-HTR1A/cAMP/PKA信号通路的影响机制。方法：研究时间为2022年6月到2022年12月,SPF级健康雄性SD大鼠36只平分为空白组、模型组、针刺组,每组各12只大鼠。空白组不进行造模,针刺组在造模完成1周后进行针刺治疗,空白组、模型组不进行治疗。结果：所有大鼠都顺利完成实验,无死亡大鼠出现。针刺组、模型组治疗后2周与4周的神经功能评分都显著高于空白组（P<0.05）,针刺组的神经功能评分与模型组相比显著降低(P<0.05)。针刺组、模型组治疗后2周与4周的脑缺氧缺血组织体积都高于空白组(P<0.05),针刺组的脑缺氧缺血组织体积与模型组相比显著降低（P<0.05）。针刺组、模型组治疗后2周与4周的血清超氧化物歧化酶活力低于空白组（P<0.05）,血清丙二醛含量高于空白组（P<0.05）,针刺组与模型组对比也有显著差异（P<0.05）。针刺组、模型组治疗后2周与4周的大脑组织5-HTR1A蛋白、cAMP蛋白、PKA蛋白相对表达水平明显低于空白组（P<0.05）,针刺与模型组相比显著提高（P<0.05）。结论：针刺在缺氧缺血性脑损伤大鼠的应用能激活5-HTR1A/cAMP/PKA信号通路,能提高超氧化物歧化酶活力,降低血清丙二醛含量,能改善大鼠的脑神经功能,降低脑缺氧缺血组织体积。     

基于TLR4MyD88信号通路观察粪菌移植对DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎干预作用机制

摘要 目的：探讨粪菌移植（fecal microbiota transplantation,FMT）对葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate, DSS）诱导小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）干预作用及其炎症相关的分子机制。方法：30只昆明小鼠采用DSS喂养建立结肠炎小鼠模型并随机分为模型组、FMT低剂量组和FMT高剂量组,另取10只作为对照组。FMT低剂量组、FMT高剂量组自造模后第1 d开始分别给予8 g/kg、15 g/kg粪菌剂量灌肠处理,灌肠体积0.2 mL。对照组和模型组给予等体积生理盐水灌肠处理。分别在实验第1、7、14及21 d称量小鼠体重。实验结束后处死小鼠,取出结直肠,观察各组小鼠结直肠形态变化并通过HE染色观察病变程度。ELISA检测小鼠结直肠组织匀浆液上清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6, IL-6）、白细胞介素-4（interleukin 4, IL-4）和白细胞介素-10（interleukin 10, IL-10）的表达变化;免疫组化法和RT-qPCR分别检测结直肠组织中核因子κB-P65亚基 (nuclear factor-κB P65, NF-κB P65)蛋白和mRNA的表达情况;Western blotting检测结直肠组织中Toll 样受体4 (Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子 88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)的蛋白表达情况。结果：对照组相比,造模小鼠在第6 d起至第14 d体重明显减轻,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,FMT低、高剂量组小鼠第10 d起至第14 d体重明显减轻,FMT高剂量组小鼠体重升高更加明显,差异具有统计学意义（P<0.05）;与对照组相比,模型组小鼠结直肠组织中TNF-α、IL-6、NF-κB P65 mRNA和蛋白阳性表达、TLR4、MyD88 蛋白表达均显著升高(P<0.05),IL-4、IL-10表达显著下降（P<0.05）;FMT高剂量组IL-4、IL-10较模型组显著升高,其余指标均显著下降（P<0.05）。结论：FMT可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路缓解炎症反应,发挥对UC的治疗作用。     

芍药苷对溃疡性结肠炎大鼠肠道屏障功能和ERK信号通路的影响

摘要 目的：探究芍药苷对溃疡性结肠炎（UC）发生过程中肠道屏障功能和ERK信号通路的影响。方法：将24只7-8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为4组：正常组（Normal组,未造模及给药的大鼠）、模型组（Model组,100 mg/kg TNBS给药造模）、低剂量芍药苷组（LPF组,100 mg/kg TNBS +10 mg/kg芍药苷给药处理）和高剂量芍药苷组（HPF组,100 mg/kg TNBS +100 mg/kg芍药苷给药处理）,每组6只大鼠。对大鼠推注5%三硝基苯磺酸（TNBS）进行UC大鼠造模,然后灌胃指定浓度的芍药苷,连续处理14 d。通过苏木精伊红（HE）染色进行组织病理学观察,通过阿尔辛蓝（AB）染色计算结肠粘液层厚度。通过ELISA法检测结肠组织中细胞因子（IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-10）、髓过氧化物酶（MPO）和粘蛋白（MUC2和MUC5AC）的水平。通过免疫组化检测各组大鼠结肠组织中IL-6和IL-10的蛋白表达。通过Western blotting分析蛋白激酶Cα（PKCα）、p-PKCα、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达。结果：与Model组（8.38±0.42 cm）相比,LPF组（9.88±0.49 cm）和HPF组（10.92±0.55 cm）UC大鼠的结肠长度显著增加（P<0.05）。与Model组（22.54±1.13 μm）相比,LPF组（41.07±2.05 μm）和HPF组（50.33±2.52 μm）UC大鼠结肠粘液层厚度显著增加（P<0.05）。与Model组相比,LPF组和HPF组UC大鼠的结肠形态明显改善,结肠组织中IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的水平显著降低,而IL-10显著升高（P<0.05）。与Model组相比,LPF组和HPF组UC大鼠结肠组织中MUC2和MUC5AC水平均显著升高,p-PKCα和p-ERK1/2的磷酸化水平也显著升高（P<0.05）。结论：芍药苷抑制了TNBS诱导的UC大鼠结肠炎症并增加了结肠粘液层厚度,从而保护了肠道屏障功能,其机制可能与ERK信号通路的激活有关。     

OSBPL3在代谢相关脂肪性肝病中的作用及机制研究

摘要 目的：探究氧化固醇结合蛋白类似物3（Oxysterol Binding Protein-like 3,OSBPL3）在代谢相关脂肪性肝病中的作用及可能机制。方法：建立肝脏特异性沉默OSBPL3小鼠模型和空载体对照组,分别予以普食和高脂喂养12周。分为正常对照组、OSBPL3沉默组、肥胖对照组、肥胖OSBPL3沉默组。观察小鼠一般情况,Real-time PCR检测脂质合成基因及脂质分解基因mRNA水平,western blot检测Akt/mTOR通路关键蛋白的表达。人HepG2细胞株给予不同浓度油酸（oleic acid,OA）处理,观察油红O染色的变化,western blot检测OSBPL3表达水平。结果：正常对照组与OSBPL3沉默组小鼠各项指标相比无统计学差异（P＞0.05）;与对照组相比,肥胖对照组及肥胖OSBPL3沉默组体质量、内脏脂肪及内脏脂肪指数较高（P＜0.05）;与肥胖对照组相比,肥胖OSBPL3沉默组体质量、内脏脂肪及内脏脂肪指数较低（P＜0.05）。与对照组相比,肥胖对照组及肥胖OSBPL3沉默组总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)较高（P＜0.05）;与肥胖对照组相比,肥胖OSBPL3沉默组TC、TG、LDL-C及HDL-C较低（P＜0.05）。与正常对照组与OSBPL3沉默组小鼠SREBP-1C、FAS及PPARα表达水平相比无统计学差异（P＞0.05）;与对照组相比,肥胖对照组及肥胖OSBPL3沉默组SREBP-1C、FAS较高,PPARα表达水平较低（P＜0.05）;与肥胖对照组相比,肥胖OSBPL3沉默组SREBP-1C、FAS表达水平较低,PPARα表达水平较高（P＜0.05）。与对照组相比,肥胖对照组Akt及mTOR磷酸化表达水平较高（P＜0.05）;与肥胖对照组相比,肥胖OSBPL3沉默组Akt及mTOR磷酸化表达水平较低（P＜0.05）。随着OA作用浓度的升高,油红O染色逐渐加深。与0 μmol/L油酸相比,油酸以剂量依赖性方式增加HepG2细胞OSBPL3 mRNA水平（P<0.05）。结论：OSBPL3能够调控脂质代谢的表达,可能通过调控Akt/mTOR信号通路发挥生物学功能,有望为研究NAFLD疾病发生发展及治疗提供参考依据。     

Inhibitory Effect of mTOR Activator MHY1485 on Autophagy: Suppression of Lysosomal Fusion

Autophagy is a major degradative process responsible for the disposal of cytoplasmic proteins and dysfunctional organelles via the lysosomal pathway. During the autophagic process, cells form double-membraned vesicles called autophagosomes that sequester disposable materials in the cytoplasm and finally fuse with lysosomes. In the present study, we investigated the inhibition of autophagy by a synthesized compound, MHY1485, in a culture system by using Ac2F rat hepatocytes. Autophagic flux was measured to evaluate the autophagic activity. Autophagosomes were visualized in Ac2F cells transfected with AdGFP-LC3 by live-cell confocal microscopy. In addition, activity of mTOR, a major regulatory protein of autophagy, was assessed by western blot and docking simulation using AutoDock 4.2. In the result, treatment with MHY1485 suppressed the basal autophagic flux, and this inhibitory effect was clearly confirmed in cells under starvation, a strong physiological inducer of autophagy. The levels of p62 and beclin-1 did not show significant change after treatment with MHY1485. Decreased co-localization of autophagosomes and lysosomes in confocal microscopic images revealed the inhibitory effect of MHY1485 on lysosomal fusion during starvation-induced autophagy. These effects of MHY1485 led to the accumulation of LC3II and enlargement of the autophagosomes in a dose- and time- dependent manner. Furthermore, MHY1485 induced mTOR activation and correspondingly showed a higher docking score than PP242, a well-known ATP-competitive mTOR inhibitor, in docking simulation. In conclusion, MHY1485 has an inhibitory effect on the autophagic process by inhibition of fusion between autophagosomes and lysosomes leading to the accumulation of LC3II protein and enlarged autophagosomes. MHY1485 also induces mTOR activity, providing a possibility for another regulatory mechanism of autophagy by the MHY compound. The significance of this study is the finding of a novel inhibitor of autophagy with an mTOR activating effect.     

Promotion of Ovarian Follicle Growth following mTOR Activation: Synergistic Effects of AKT Stimulators

Mammalian target of rapamycin (mTOR) is a serine/threonine kinase and mTOR signaling is important in regulating cell growth and proliferation. Recent studies using oocyte- and granulosa cell-specific deletion of mTOR inhibitor genes TSC1 or TSC2 demonstrated the important role of mTOR signaling in the promotion of ovarian follicle development. We now report that treatment of ovaries from juvenile mice with an mTOR activator MHY1485 stimulated mTOR, S6K1 and rpS6 phosphorylation. Culturing ovaries for 4 days with MHY1485 increased ovarian explant weights and follicle development. In vivo studies further demonstrated that pre-incubation of these ovaries with MHY1485 for 2 days, followed by allo-grafting into kidney capsules of adult ovariectomized hosts for 5 days, led to marked increases in graft weights and promotion of follicle development. Mature oocytes derived from MHY1485-activated ovarian grafts could be successfully fertilized, leading the delivery of healthy pups. We further treated ovaries with the mTOR activator together with AKT activators (PTEN inhibitor and phosphoinositol-3-kinase stimulator) before grafting and found additive enhancement of follicle growth. Our studies demonstrate the ability of an mTOR activator in promoting follicle growth, leading to a potential strategy to stimulate preantral follicle growth in infertile patients.     

四君子汤对溃疡性结肠炎小鼠模型occludin和claudin-1表达的影响

目的:探讨四君子汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型结肠粘膜中occludin、claudin-1表达的影响。方法:采用右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC小鼠模型,实验分为五组,即正常组、模型组、四君子汤低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、西药组,共治疗7天。对小鼠肠黏膜的大体形态和组织病理变化进行观察,使用RT-PCR和Western blot检测occludin、claudin-1 m RNA和蛋白的表达。结果:与模型组相比较,四君子汤低、中、高剂量治疗组以及西药组小鼠的饮食、体重、精神、活动度、脓血便等一般情况有所改善,黏膜层缺损、隐窝破坏、炎症细胞浸润等病理表现有所缓解。与模型组相比较,高剂量治疗组小鼠结肠组织中occludin、claudin-1蛋白和m RNA的表达升高(P0.05),低剂量和中剂量治疗组也有不同程度的升高。与西药组相比较,低、中、高剂量治疗组小鼠结肠组织中occludin、claudin-1蛋白和m RNA的表达无统计学差异(P0.05)。结论:四君子汤可以改善脓血便等症状,缓解肠粘膜的损伤,上调occludin和claudin-1的表达,对UC小鼠有治疗作用。     

大豆异黄酮对大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径的影响

本实验研究了大豆异黄酮对SHZ-88大鼠乳腺癌细胞内cAMP／PKA信号途径的影响。实验设3组：空白对照组、50μg／ml大豆黄酮及15μg／ml染料木素组。采用放射免疫测定法（RIA）检测了胞内cAMP的浓度、腺苷酸环化酶（adenylate cyclase,AC）和磷酸二酯酶（phosphodiesterase,PDE）的活性,用（γ-^32P）ATP掺入法测定cAMP依赖性PKA的活性,半定量RT-PCR法分析cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）mRNA表达的变化。结果表明：在处理后5min,大豆黄酮组和染料木素组细胞的cAMP浓度分别比对照组升高了9．5％和11．0％（P〈0．05）：10min时,分别比对照组升高31．0％和40.3％（P〈0．01）。3组细胞的AC活性在处理时间内没有明显变化。但在处理后5min,大豆黄酮组和染料木素组细胞的PDE活性分别降至对照组的71．8％和71．6％（P〈0．05）。处理后20min,大豆黄酮组和染料木素组细胞PKA活性分别上升到对照组的125．8％和122．3％（P〈0．05）;到40min时仍维持在高水平。大豆黄酮组和染料木素组细胞CREB mRNA的表达量在处理后3h分别比对照组增加31．6％和51．1％（P〈0．05）;6h后开始下降。这些结果提示,大豆异黄酮能够激活大鼠乳腺癌细胞内cAMP／PKA信号途径;而且是通过抑制磷酸二酯酶的活性,导致胞内cAMP浓度升高而实现的。