一种含不同流感病毒血凝素抗原表位的核酸疫苗

流感病毒表面抗原血凝素( hemagglutinin,HA)是流感核酸疫苗重要的靶抗原,针对HA的保护性中和抗体主要由HA上的五个抗原表位诱导产生.在本文中,我们构建了一种以新甲型H1N1流感病毒HA1为骨架的含2个A/PR/8( H1N1)流感病毒HA抗原表位和3个新甲型H1N1流感病毒HA抗原表位的核酸疫苗,并在B...     

甲型流感病毒内膜蛋白的分离提纯

甲型流感病毒内膜蛋白(MP)是该病毒分子量最小(21000—28000道尔顿);含量最丰富(占病毒蛋白总量33—50％)的一种非糖多肽,具有型特征,每个病毒颗粒大约有3000个分子的MP,等电点为pH 4.6,用电     

甲型流感病毒重组血凝素蛋白的真核表达及免疫效力分析

利用真核表达系统稳定表达HA重组蛋白并评价其免疫原性及攻毒保护效果,为重组流感亚单位疫苗的研制提供更多的理论基础。本研究以H1N1型流感病毒HA胞外区域序列为目的基因构建重组质粒KS001-HA并转染至CHO细胞得到表达重组蛋白rHA的单克隆细胞株,通过离子交换层析法纯化rHA。将rHA与佐剂联合免疫小鼠以评估免疫原性,并对免疫后的小鼠进行攻毒,监测小鼠存活率和体重变化,检测其肺组织病毒载量,并分析肺组织的病理变化。重组质粒KS001-HA在CHO细胞中稳定整合并分泌表达rHA蛋白,其相对分子质量约70 kD,经PNGaseF酶处理后,蛋白大小变为60kD。纯化后rHA蛋白纯度>95%。加强免疫后小鼠血清抗体效价显著增强,佐剂配伍免疫效果优于rHA单独免疫,其中HA203佐剂配伍组15、30、60μg剂量组免疫效应显著高于阳性对照组H1N1疫苗原液组。攻毒后HA203佐剂配伍组无小鼠死亡,小鼠体重平均下降率低于10%,肺组织肺泡结构清晰,仅见肺泡壁轻度增厚,伴随少量的炎性细胞浸润,仅检测到少量呈灶性分布的棕黄色颗粒。本研究成功构建了重组质粒KS001-HA,于CHO细胞中表达,并...     

江苏首例甲型H1N1(2009)流感病毒分离及其血凝素分子遗传特征分析

2009年6月12日,江苏确诊首例甲型H1N1(2009)病例。通过细胞和鸡胚分离系统,我们分离到一株具有较高血凝活性的病毒,命名为A/Jiangsu/1/2009。为了跟踪病毒的变异情况,我们开展了病毒的全基因组测序工作,在此基础上对其血凝素基因(Haemagglutinin,HA)的遗传特性进行了详细研究。分离株HA蛋白不具有多碱基HA裂解位点,具有低致病性流感病毒特点。与参考株A/California/04/2009相比,分离株A/Jiangsu/1/2009HA蛋白的有4个氨基酸发生了突变,但都不在已知的抗原位点上。分离株有5个潜在糖基化位点,这与近年来古典猪H1N1和北美三源重配猪H1病毒完全一致,保留了古典猪H1的特点。与禽流感H1病毒相比,分离株HA蛋白受体结合位点上的E190D和G225D发生突变,这可能成为新甲型H1N1(2009)在人际间传播的一个重要分子基础。此外,其它受体结合位点上相关氨基酸同时具有人和猪流感病毒的特点。本研究首次对早期流行的甲型H1N1(2009)流感病毒的HA蛋白的分子遗传特征进行了详细研究,对进一步监测病原变异具有重要指导意义。     

两种甲型肝炎病毒抗原快速检测方法的建立

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲型肝炎病毒抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法,较双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高1～2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而甲型肝炎病毒抗原双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。     

一种快速检测甲型流感病毒的方法

目的 开发一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法（GICA）的试剂盒,以用于对甲型流感病毒的检测。方法以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗甲型流感病毒内部抗原的单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被两种抗甲型流感病毒单克隆抗体的混合液,制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合,后移动至硝酸纤维素上与固定的单克隆抗体发生反应,形成肉眼可见的红色带。结果GICA试纸条与甲1型和甲3型流感病毒共16种毒株均能发生特异性反应,与乙型流感病毒、副流感病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒无交叉反应。用三种不同甲型流感病毒毒株的不同浓度标本与美国同类经过FDA批准的产品比较,灵敏度相同。结论GICA试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点,对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

从动物到人——流感病毒的跨种传播

正流感是由流感病毒引起的、流行于人群和多种动物中的急性传染病。20世纪以来,人类历史上曾发生过4次世界性的流感大流行,分别是1918年的西班牙流感(H1N1)、1957年的亚洲流感(H2N2)、1968年的香港流感(H3N2)和2009年的甲型流感(H1N1),此外还有一次疫情相对较轻的1977年俄罗斯流感     

亚洲甲型流感病毒发源的研究 Ⅱ.亚洲甲型（A2）与亚甲型（A1）流感病毒的抗原关系

最近几年,许多学者对于A2流感病毒的发源曾进行过研究,并提出一些假设,这些假设有的单凭少数病毒株的抗原关系,有的尚缺乏直接的有力的证据,故仍未能令人满意地解释A2流感病毒的发源问题。 1957年A2型流感的大流行首先在我国发生,早在1957年2月在我国贵州省已有流行,同时分离出A2病毒。其后,在3、4月份全国各地均先后发生,所有分离的病毒经鉴定均属A2型。在A2流行之前。     

2009年中国流行的甲型流感病毒（H1N1）血凝素特征分析

目的研究甲型流感病毒（H1N1）暴发流行以来中国各地甲型流感病毒血凝素（HA）的特征。方法搜索甲型流感病毒（H1N1）暴发流行以来中国各地报道的血凝素（HA）的氨基酸序列,比较当年不同时期血凝素（HA）的氨基酸序列的变化,并比较2009年报道的血凝素（HA）的氨基酸序列和2008年、2007年报道的血凝素（HA）的氨基酸序列作比较,以分析和前2年血凝素（HA）氨基酸序列相比所发生的变化。结果2009年中国各地甲型流感病毒（H1N1）的血凝素（HA）的氨基酸序列（人源）的同源性为99%-100%,但和2008年以及2007年的同源性非常低,分别为70%-77%和71%-90%。结论2009年暴发流行的甲型流感病毒（H1N1）的血凝素氨基酸序列较往年发生了很大程度的变异,这可能是今年甲型流感病毒（H1N1）暴发流行的主要原因。     

新分离乙型流感病毒的培养温度

乙型流行性感冒病毒在鸡胚培养的温度,各国学者曾作过研究,认为35℃结果最好。我们实验室的分离及传代的常规方法也是培养于35℃。但在1961及1964午乙型流感病毒分离过程中发现,阳性标本的鸡胚羊水或尿液的血凝很不规律,有时甚至全部阴性,特别是冷冻保存(-40℃)的病毒材料,有时盲传二代仍然未见阳性血凝现象。     

甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单抗杂交瘤细胞株的制备与初步鉴定

目的:建立具有高特异、高效价的甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白(HA)单抗的杂交瘤细胞株。方法:以纯化的昆虫杆状病毒表达的甲型H1N1流感病毒HA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法筛选阳性克隆,经ELISA和Western blot分析单抗的特性和特异性。结果:获得6株甲型H1N1流感HA抗原特异单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗原肽库ELISA检测结果表明其中3株(1E12,3F12,1C11)单抗只与甲型H1N1流感HA抗原肽库反应,不与H5N1病毒HA抗原肽库反应;Western blot分析表明,单抗1B3只特异识别甲型H1N1流感HA抗原,而与其他季节性甲流病毒(H1,H3)及人禽流感H5N1病毒不反应。结论:所获杂交瘤细胞株特异性强,效价高,分泌抗体性能稳定,为分析甲型H1N1流感病毒抗原性位点、建立诊断试剂奠定了基础。     

甲3型流感病毒早期分离株的抗原特点

目前认为,1968年甲3型流感发生时,至少有二种H3N2亚型的变异株同时存在。一种是1968年7月在香港分离的A/HK/1/68;另一种是1968年8月在日本分离的A/Aichi/2/68。Webster等用一组抗A/Mem/1/77(H3N2)血凝素(HA)的单克隆抗体证实,二种变异株至少有一个反应部位不同。这可能是H3N2亚型有二种不同的世系(lineage),     

从滑桃树种壳中分离到具抗细菌活性的新木脂素

从滑桃树(Trewia nudiflora L.)的种壳中分离到5个木脂素,其中4个是新木脂素,它们的结构分别鉴定为:9'-nethyl americanol A(1)、9'-nethyl isoamericanol A(2)、9'-nethyl americanol A(3)、9'-nethyl americanol A(4)和americanin(5);并制备了化合物5的两个乙酰化产物3,4-diacetyl americanin(5a)和3,4,9-triacetyl americanin(5b).以羧苄青霉素钠盐、硫酸链霉素和利福平为阳性对照,对这7个化合物进行了抗细菌的活性检测:化合物4和5对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和革兰氏阴性菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tubercrlosis)有明显的抑制菌作用,其中化合物4对两种菌的最低抑制浓度均为40μg/Ml,化合物5对两种菌的最低抑制浓度为100μg/Ml,但是化合物5的两个乙酰化产物在每纸片200μg的剂量下没有表现出抑菌活性.     

四川长寿湖两种越冬野鸭的考查报告

本文对长寿湖的绿头鸭Anas platyrnchos、斑嘴鸭A.poecilorhyncha的种群数量变动作了记载和分析,记录了它们的生殖腺的形态变化过程,并对近年来野鸭种群数量下降的原因作了讨论。     

甲型流感病毒在我国动物中分布的初步调查

通过血清学调查证实,人的绝大多数甲型流感病毒能自然感染家离、家畜。通过病原学调查证实了甲型流感病毒在我国动物中分布面广,品种复杂。这些进一步支持人甲型流感病毒新亚型可能来源于动物的观点,并可能有助于进一步弄清近三次人的甲型流感病毒新亚型均首先发现于我国及其附近地区的原因。并进一步证实了甲,与甲。型流感病毒均能由人自然感染猪;首次较确切地在含有H．抗体的猪血清中查到有N。的抗体;在少数鸡血清中再次查到低水平的H．抗体。     

1981～2005年中国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征

为了解1981~2005年我国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征,选取H1N1甲型流感病毒370株,提取病毒RNA,经逆转录和聚合酶链反应扩增HA1并测序,测定的序列用生物信息软件分析,与GenBank中相关序列比较,并对推导的编码氨基酸序列进行基因特性分析。结果表明:HA1氨基酸的变异表现为抗原决定簇4个区均有变异,Sb区和Ca区变化较大;HA1受体结合位点(RBS)的前壁130环的第134位赖氨酸从1991年起在部分毒株HA1序列上开始缺失,以后缺失株逐步增多,自2000年起测定的所有毒株上该氨基酸全部缺失,同时这些缺失株的第137位氨基酸也全部由苏氨酸替换为丝氨酸;糖基化位点从增多到减少,最后稳定在7个;1981~2004年我国H1N1甲型流感病毒血凝素HA1编码的氨基酸在种系发育树上同年代基本呈现集中分布,与时间和地域无关,2005年毒株分成两个分支在时间上有明显差异。