酯酶同工酶及RAPD技术在香菇杂种优势研究中的应用

采用酯酶同工酶及RAPD技术对香菇3个亲本双核体(苏香、野生46^#、野生80^#)及其10个单核体、以及它们的10个杂交后代进行了遗传差异和亲缘关系的研究,同时针对亲本单核体酯酶同工酶标记和RAPD标记遗传距离、以及杂交子和亲本单核体RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势进行了相关性分析。结果表明,酯酶同工酶和RAPD技术都可进行香菇杂种优势群的划分研究,但RAPD标记检测的多态性要远远高于酯酶同工酶标记。相关分析结果表明,亲本单核体酯酶同工酶标记遗传距离与香菇产量超亲优势无相关性,而RAPD标记遗传距离与其存在极显著正相关;杂交子和以苏香为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势也存在极显著正相关,而杂交子和以野生46^#、野生80^#为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与其相关不显著。     

酯酶同工酶及RAPD技术在香菇杂种优势研究中的应用

采用酯酶同工酶及RAPD技术对香菇3个亲本双核体(苏香、野生46#、野生80#)及其10个单核体、以及它们的10个杂交后代进行了遗传差异和亲缘关系的研究,同时针对亲本单核体酯酶同工酶标记和RAPD标记遗传距离、以及杂交子和亲本单核体RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势进行了相关性分析。结果表明,酯酶同工酶和RAPD技术都可进行香菇杂种优势群的划分研究,但RAPD标记检测的多态性要远远高于酯酶同工酶标记。相关分析结果表明,亲本单核体酯酶同工酶标记遗传距离与香菇产量超亲优势无相关性,而RAPD标记遗传距离与其存在极显著正相关;杂交子和以苏香为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势也存在极显著正相关,而杂交子和以野生46#、野生80#为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与其相关不显著。     

酯酶同工酶及RAPD技术在香菇杂种优势研究中的应用*

采用酯酶同工酶及RAPD技术对香菇3个亲本双核体(苏香、野生46#、野生80#)及其10个单核体、以及它们的10个杂交后代进行了遗传差异和亲缘关系的研究,同时针对亲本单核体酯酶同工酶标记和RAPD标记遗传距离、以及杂交子和亲本单核体RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势进行了相关性分析。结果表明,酯酶同工酶和RAPD技术都可进行香菇杂种优势群的划分研究,但RAPD标记检测的多态性要远远高于酯酶同工酶标记。相关分析结果表明,亲本单核体酯酶同工酶标记遗传距离与香菇产量超亲优势无相关性,而RAPD标记遗传距离与其存在极显著正相关;杂交子和以苏香为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势也存在极显著正相关,而杂交子和以野生46#、野生80#为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与其相关不显著。     

RAPD分析─鉴定柑桔体细胞杂种的快速方法

本文利用改进的DNA提取方法,从Volkamer柠檬(Citrus volkameriana Ten. and Pasq.)和酸橙(C. aurantium L.)及其原生质体杂种植株的叶片中抽提总DNA,进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)分析。结果表明: 在随机选取的15种引物中,有10种可单独或与其它引物一道鉴定这一组合的体细胞杂种。与形态学性状观察、同工酶及ONA杂交分析等方法比较,RAPD分析是一种可在试管苗期即可直接、准确、快速鉴定柑桔体细胞杂种的方法。     

RAPD分析用白花丹参叶片DNA的提取方法

本研究采用改良CTAB法和SDS法提取新鲜白花丹参叶片的基因组DNA,初步筛选RAPD扩增引物。结果表明改良CTAB法提取的DNA较SDS法质量好,随机引物p2扩增条带相对较为清晰。再利用p2随机引物对2种方法提取的DNA进行RAPD检测比较,结果显示仅改良CTAB法能扩增出有效条带,说明改良CTAB法更适合用于白花丹参基因组DNA的RAPD检测分析。本文将为白花丹参叶片DNA的提取提供方法学参考。     

大血藤DNA提取及RAPD研究初探

以浙江天台山大血藤为材料,对其DNA提取和RAPD分子标记方法进行了研究。结果表明:所采用的经改进的SDS提取法可获得高质量的大血藤DNA,分子量大于23kb,可满足RPAD扩增;用15个不同的随机引物对所提取的12个个体的大血藤DNA进行了RAPD分子标记分析,其中14个引物扩增产物具有多态性。建立了大血藤DNA提取和RAPD标记的分析程序,为RAPD分析应用于大血藤遗传多样性研究打下了良好的基础。     

玉米抗丝黑穗病基因RAPD分析

该文应用RAPD技术,以感病母本3045和抗病父本3024为试材,应用BSA法,对玉米抗丝黑穗病基因进行分析,建立并优化了玉米的RAPD反应体系,筛选了61条引物RAPD随机引物,18条引物为适宜引物,共扩增出89条DNA谱带,得到了4条具有稳定多态性标记的引物,分别为OPY-09、OPY-10、OPY-18、OPP-09。     

宽叶缬草DNA的提取及正交优化RAPD反应体系

[目的]确定适合宽叶缬草RAPD分析的DNA提取方法以及建立最佳RAPD反应体系。[方法]比较宽叶缬草基因组DNA的两种提取方法(经典CTAB法、试剂盒法);采用正交设计L16(45),针对Taq DNA聚合酶浓度,d NTP浓度,Mg2+浓度,引物浓度,DNA模板浓度进行RAPD扩增,确立最佳RAPD反应体系。[结果]综合比较,试剂盒法较适合宽叶缬草基因组DNA提取;25μl最适宽叶缬草RAPD反应体系为:2.0 U Taq DNA聚合酶、0.4 mmol/L d NTP、4.0 mmol/L Mg2+、4.0μmol/L随机引物、60 ng模板DNA、2.5μl 10×buffer。[结论]试剂盒DNA提取法和正交优化的反应体系适用于宽叶缬草的RAPD分析,为进一步研究黔产宽叶缬草药材遗传多样性奠定了基础。     

SDS-PAGE、同工酶等电聚焦和RAPD标记鉴定两系杂交水稻F1种子纯度对比研究

目的：探讨利用种子贮藏蛋白SDS—PAGE电泳、酯酶同工酶超薄等电聚焦电泳和RAPD分子标记鉴定五个两系杂交水稻组合F_1种子纯度的可行性。方法和结果：利用SDS—PAGE电泳技术未能找到所试五个组合各自的父本特征蛋白质带;利用酯酶同工酶超薄等电聚焦电泳技术和RAPD分子标记可找到所试五个组合的父母本特征酶带和RAPD标记,但酯酶同工酶的多态性同时也受种子萌发时间的影响。酯酶同工酶超薄等电聚焦电泳和RAPD分子标记可用于所试五个两系杂交水稻组合F_1种子纯度的鉴定。     

石斛干品基因组DNA的提取与RAPD分析

市场中药干品的药性差异一直是影响中药标准化的瓶颈,而检测技术相对落后是导致这一现象的主要原因。DNA分子水平检测的困难是药材干品的基因组DNA难以提取。本文以铁皮石斛(Dendrobium candidum)干茎为材料,采用了四种方法从干品石斛中提取基因组DNA。结果表明,采用改良的CTAB法可从石斛干品尤其是干茎皮中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23kb,以此DNA为模板进行不同引物的PCR扩增可获得清晰的RAPD条带。该研究初步建立了石斛干品合适的RAPD技术体系。     

RAPD及SRAP两种分子标记技术对苦瓜杂交种纯度的鉴定分析

以F1代苦瓜杂交种如玉11号及其亲本为材料,利用RAPD及SRAP两种分子标记技术对这3种苦瓜基因组DNA进行比较分析,以获得该杂交种及其亲本（或母本）差异目的基因片段。经过多次对该3种苦瓜叶片DNA提取,PCR扩增及其PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析,在供试的46个RAPD引物及121对SRAP引物中,筛选出1个RAPD引物及1对SRAP引物能区分该苦瓜杂交种及其母本种子,通过进一步验证分析,证明该两种分子标记的特异引物可作为如玉11号苦瓜杂交种子的纯度鉴定之用。     

利用RAPD分子标记对三组三系杂交水稻及亲本的遗传分析和鉴定

利用RAPD技术,从248个随机寡聚核苷酸（10bp）中筛选出13个引物能在供试的三组三系杂交水稻及亲本间扩增出43条稳定性较好的多态性片段,其中6个引物能在供试材料间扩增出20个强的多态性标记。利用这些标记能有效地区分各组合中不育系、保持系、恢复系和F1,并能看出各组合中不育系与保持系、不育系与恢复系、F1与亲本间的遗传关系。 Abstract:A total of 248 arbitrary 10-mer oligonucleotide primers were screened using RAPD (random amplified polymorphic DNA) techniques with the genome DNA of three groups of three-line hybrid rice and their parents.Thirteen primers produced 43 polymorphism fragments.Six primers of them produced 20 obviously repeatable polymorphic markers among rice lines tested.Using this RAPD markers,the hybrid rice combinations (sterile-line,maintainer-line,restorer-line and F1)can be effectively identified,and the genetic relationship among them can be shown.     

用RAPD技术鉴定小麦属间不对称体细胞杂种

用随机引物扩增多态DNA(RAPD)技术对三种不同组合:小麦(Triticum aestivum)( )簇毛麦(Haynaldia villosa);小麦( )羊草(Leymus chinensis)和小麦( )高冰草(Agropyron elongatum)的属间不对称杂种进行分子鉴定,不同杂种植株的基因组经随机引物扩增后,均出现双亲的多态特异产物,证实它们含有双亲的基因组。将引物OPJ-12扩增的高冰草多态特异产物(分子量为0.77bp的DNA片段)分离纯化并标记作探针,用Southern杂交证明了小麦( )高冰草杂种经OPJ-12扩增的0.77kbp特异片段与高冰草这一片段具有同源性。本文结果证明,RAPD技术可作为小麦属间不对称体细胞杂种的一种快速、简便、有效的分子鉴定方法。     

RAPD method for the identification of intergeneric asymmetric somatic hybrid plants of wheat]

Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) method was used to identify the hybrid nature of three kinds of intergeneric asymmetric somatic hybrid plants of wheat: wheat (Triticum aestivum) + Haynaldia villosa, Wheat + Leymus chinensis and wheat + Agropyron elongatum. It was shown from the electrophoresis profiles that the genome of somatic hybrid plants contained specific section genome of both parents after DNA amplification with arbitrary primers. A specific RAPD product (DNA fragment of 0.77 kbp) of A. elongatum generated with primer OPJ-12 was isolated, purified, labeled and used as a probe. Southern blot from OPJ-12 primer-generated specific section genome of the hybrid (T. aestivum + A. elongatum) hybridized to this probe (0.77 kbp) proved that they are homologous in nature. This paper also discussed the advantage of RAPD method in identification of hybrid plants, especially asymmetric somatic hybrids.     

RAPD标记鉴定水稻3种不同细胞质雄性不育类型的杂交种及其亲本

利用RAPD引物对3种不同细胞质雄性不育类型的杂交水稻组合及其亲本共21个材料进行了DNA多态性分析。从264个随机引物中筛选出具有非常明显多态性的引物25个, 对25个引物在3种不同细胞质不育类型的杂交组合及其亲本间的DNA扩增多态性差异进行比较,最终选出具有不同类型间特异性扩增带的引物7个,利用这些特异性扩增带能有效地区分和鉴定目前在生产上大面积种植和推广,或者是具有应用潜力的3种不同细胞质雄性不育类型—野败型(WA)、红莲型(HL)和包台型(BT))—的6种杂交水稻组合及其亲本。     

陕油8号种子纯度的RAPD鉴定研究

从杂交油菜“陕油8号”及其亲本中提取基因组DNA,用100个RAPD随机引物进行扩增,从中筛选出3个可将亲本和子代区分的引物BA208、BA1090、BA497。BA208产生亲本互补的特征带BA208-1050bp、BA2081250bp;BA1090产生母本特征带BA1090-700bp,BA497产生父本特征带BA497-870bp,上述谱带均在子代中出现。以BA208产生的特征谱带作为分子标记对杂交油菜种子纯度鉴定得到了一致的结果,并与大田纯度检测结果一致。BA497可将“陕油8号”与当地4个主栽品种有效区分。此外,还对双引物共同鉴定杂交种子纯度问题进行了初步探讨。     

Genetic diversity of inbred rye lines evaluated by RAPD analysis

This study presents an attempt to supply breeders of hybrid rye with more genetic information on inbred lines, using molecular markers. Eighteen polymorphic loci detected by means of the RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) technique and mapped on 2R-7R rye chromosomes, were applied to study genetic similarities among forty inbred lines of rye. The lines were grouped in four main clusters revealed on dendrogram, which was generally consistent with the pedigree data. Mapped RAPD markers were shown to be a useful tool for phenetic studies in rye. Additionally, a system of 20 polymorphic fragments, detected by three primers, was developed for fingerprinting of rye lines. The system of RAPD markers, which was developed in this study, should be helpful in characterisation of rye genetic stocks used for breeding.     

两个不同地区东方田鼠杂交子代RAPD标记分析

目的研究不同地区东方田鼠杂交后产下的子代的遗传特性.方法筛选4条10bp随机引物对宁夏和洞庭湖地区东方田鼠杂交子代的基因组进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析,并对不同地区亲代以及子代相互之间的基因组DNA进行相似性分析.结果①所有东方田鼠均有相同的扩增片段出现;②两个不同地区的亲代分别有特异性片般;③亲代的DNA带型均能在子代中找到;④同一胎次东方田鼠之间基因共享度大约在72%～96%之间.结论RAPD分析能在一定程度上反映出东方田鼠种的特性以及亚种的特异性,而且同一胎次之间基因共享度较高.     

Application of Random Amplified Polymorphic DNA analysis to differentiate strains of Salmonella typhi and other Salmonella species

A Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting method was developed to differentiate isolates of Salmonella serotype typhi ( S. typhi ) and other Salmonella isolates. A panel of five primers was used to examine 63 isolates of Salm. typhi , including 56 strains isolated in Taiwan and seven strains obtained abroad. Twenty-one RAPD types were revealed using the RAPD fingerprinting method. An RAPD with primer 6032 yielded a polymorphism in a 350 bp fragment that differentiated the attenuated vaccine strain Salm. typhi Ty21a from the rest of the Salm. typhi strains. Strains of Salm. typhi were divided into five types with primer D14307. Primer D14307 also proved capable of discrimination among 65 other Salmonella isolates representing 42 different serotypes. The bacterial DNA used in this RAPD protocol was obtained using a commercially available DNA extraction kit (GeneReleaser). The DNA of various strains of Salmonella from this simple extraction procedure could be discriminated within a few hours using the RAPD technique.     

Rapid DNA extraction methods and new primers for randomly amplified polymorphic DNA analysis of Giardia duodenalis.

A randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) procedure using simple genomic DNA preparation methods and newly designed primers was optimized for analyzing Giardia duodenalis strains. Genomic DNA was extracted from in vitro cultivated trophozoites by five freezing-thawing cycles or by sonic treatment. Compared to a conventional method involving proteinase K digestion and phenol extraction, both freezing-thawing and sonication were equally efficient, yet with the advantage of being much less time- and labor-intensive. Five of the 10 tested RAPD primers produced reproducible polymorphisms among five human origin G. duodenalis strains, and grouping of these strains based on RAPD profiles was in agreement among these primers. The consistent classification of two standard laboratory reference strains, Portland-1 and WB, in the same group confirmed previous results using other fingerprinting methods, indicating that the reported simple DNA extraction methods and the selected primers are useful in RAPD for molecular characterization of G. duodenalis strains.