37XA型倒置生物显微镜

37XA型倒置生物显微镜是上海光学仪器厂去年通过鉴定、今年投放市场的新产品,由于它的优良的相衬效果以及操作使用方便,美商今年已订购100台投放美国市场。 37XA型倒置生物显微镜广泛用于生物组织培养、细菌培养以及海洋浮游生物的观察研究。是生物学、遗传学、药物化学、环境保护、海洋学等研究工作之理想仪器。仪器具有明场观察和相衬观察,成象清晰,装上摄影装置可进行显微摄影。     

四种显微技术观测大鼠颌下腺细胞与丝素-壳聚糖体外共培养的形态学特点

目的采用倒置显微镜、扫描电镜（scanning electron microscopy,SEM）、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜（（laser scanning confocal microscopy,LSCM））技术对大鼠颌下腺细胞（rat submandibular gland cells,RSMGs）与丝素-壳聚糖（silk fibroin-chitosan,SFCs）的体外复合培养进行形态学观察。为观测、评估种子细胞在三维支架的内部生长情况提供技术支持。方法取0～8 d龄SD大鼠的颌下腺,对大鼠颌下腺细胞进行原代培养、分离纯化并传代;用抗细胞角蛋白单克隆抗体（CK8）及淀粉酶抗体的免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。选取传至第二代的对数生长期的RSMGs作为种子细胞,选取SFCs共混膜（5×5×2）mm作为支架材料构建组织工程化涎腺样结构。将种子细胞与支架材料复合培养并分别于倒置显微镜、SEM、荧光显微镜和LSCM下观察二者复合生长情况。结果倒置显微镜可以直接观察活细胞与支架复合生长情况,方法简单易行。SEM可以较精确的展示细胞支架复合生长的表面超微结构。经过荧光染料的着色,荧光显微镜和LSCM都可以观察到支架上锚定的种子细胞。荧光显微镜可见细胞核的荧光信号均匀的分布在支架孔隙内。LSCM通过层扫描及三维重建技术对较厚的标本获取图像;并可以通过旋转图像,从不同角度观察细胞支架复合物的三维剖面或整体结构,得到更为准确的定位信息。结论四种显微技术均可应用于RSMGs与SFCs体外共培养的形态学观测。LSCM的三维重建技术结合荧光染料标记可以较好地获得RSMGs与SFCs复合生长的情况,有着较广泛的应用价值。     

犬皮肤成纤维细胞的分离、培养及鉴定

目的探索和建立适用于犬皮肤成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法采用组织贴块培养法和胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ联合消化法对犬皮肤成纤维细胞进行体外培养、传代。并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞行波形蛋白免疫荧光染色。结果倒置相差显微镜下可见长梭形细胞生长,苏木素-伊红染色可见细胞呈漩涡状、平行排列,第5代细胞免疫荧光检测波形蛋白(vimentin)表达阳性。结论建立了高效快速分离和稳定培养成纤维细胞的方法,为诱导犬心房纤维化提供了充足的种子细胞。     

大蒜素对白念珠菌形态转换的影响研究

目的探讨大蒜素对白念珠菌形态转换的影响及其作用机制。方法倒置显微镜观察白念珠菌菌丝形成的体外动力学过程;采用CLSI-M27-A3微量液基稀释法检测大蒜素对白念珠菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);倒置显微镜观察不同浓度大蒜素对白念珠菌在Spider液体培养基中菌丝形成的影响;qRT-PCR法检测在不同浓度大蒜素作用下白念珠菌菌丝相关基因HWP1、ALS1、EFG1、PDE2表达水平的变化。结果白念珠菌在Spider液体培养基中6 h时出现较长菌丝,24 h后镜下可见大量念珠菌菌丝包裹酵母细胞,紧密交错;大蒜素对白念珠菌的MIC值为25μg/mL;倒置显微镜观察(25~100)μg/mL浓度的大蒜素能明显抑制Spider液体培养基中白念珠菌菌丝的生长;qRT-PCR结果显示,在(25~100)μg/mL浓度的大蒜素作用下,白念珠菌菌丝相关基因表达下调。结论大蒜素能有效抑制白念珠菌的形态转换,其作用机制可能与调节菌丝形成相关基因的表达水平有关。     

大鼠骨髓基质细胞的培养及生物学特性鉴定

目的:分离、培养大鼠MSCs,对其生物学特性进行鉴定.方法:取大鼠长骨中的骨髓组织,以贴壁法培养分离大鼠MSCs,经多次传代得到较纯的MSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用免疫细胞化学方法对细胞的表面抗原标志进行检测.取3代MSCs,B-ME诱导6小时候后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞的表型特征.结果:倒置相差显微镜观察发现,接种后24h,细胞开始贴壁.培养3代以后,细胞呈梭形或多角形,折光性好,核为圆形、居中.免疫细胞化学检测细胞表面抗原显示:CD34-、CD45-、CD29+、CD44+、CD90+.诱导后细胞发出突起,逐渐生长延伸并彼此相连,形态学上具有神经细胞的明显特征.免疫细胞化学显示诱导后细胞NSE(神经元特异性烯醇化酶)阳性.结论:所采用的细胞分离培养方法简便可行,所获得的细胞其表型特征与文献报道一致,且具有向神经细胞分化的潜能.     

应用液体小培养法观察益康唑、克霉唑和多菌灵A抗真菌活性的比较研究

近年来,皮肤真菌病呈增多趋势,且顽固难治;现已有许多外用抗真菌制剂,虽有一定效果,尚不十分理想。我们为了探寻新的抗菌试剂,试用液体小培养法在倒置显微镜下直接观察益康唑(Econazole     

人主动脉硫酸乙酰肝系蛋白聚糖对培养人的脐静脉内皮细胞生长…

为探讨硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对内皮细胞生长的作用,用解聚提取及墩子交换柱层析法分离出人主动脉ＨＳＰＧ,用倒置显微镜,细胞计数,及＾３Ｈ－ＴｄＲ参入观察其对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）生长的影响,结果表明,（１）倒置显微镜下观察,加入ＨＳＰＧ（１．７０μｇ己糖醛酸／ｍｌ）的ｈＵＶＥＣ生长密度高于对照组（未加ＨＳＰＧ）（２）随着培养时间增加（２４,４８及７２ｈ）根据细胞计数计算     

建立以EGFP为报告基因检测HSV感染的细胞株

通过PCR扩增HSV-1ICP6启动子目的基因片段,克隆至真核表达载体pEGFP-1构建重组质粒pICP6-EGFP,转染Vero细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞株Vero-ICP6-EGFP细胞。以不同量的HSV-1感染Vero-ICP6-EGFP细胞,分别以倒置荧光显微镜和流式细胞术检测EGFP荧光的量和强度。结果表明,转染细胞株Vero-ICP6-EGFP感染HSV-16h后,倒置荧光显微镜下即可检测绿色荧光;流式细胞术检测结果表明,EGFP荧光的量及强度随HSV-1病毒的滴度增加而增加。已建立的以EGFP为报告基因的Vero-ICP6-EGFP细胞株具有早期、快速、灵敏等优点,特异性较高,可望用于HSV感染的快速诊断及抗病毒药物的检测。     

聚吡咯的生长及与神经组织相容性的研究

通过化学氧化和电化学氧化方法得到聚吡咯,用所得到的聚吡咯与神经组织联合培养,通过倒置光学显微镜和扫描电子显微镜观察其生物相容特性.得知聚吡咯与神经组织有较好的生物相容性.     

低成本制作光学显微镜(正立、倒置)/解剖镜的实时观察与记录系统

笔者介绍一种低成本构建“电视显微镜”的方法．它可对光学显微镜(正视、倒置)/解剖镜下的实验对象进行实时观察、录像和拍摄数码照片,能够供多人同时观看,并可外接多媒体设备将图像投射到大屏幕上。装上此系统后,学生就可以根据电脑屏幕上显示的实时图像进行各种操作。这种方法不仅可以改善大、中、小学生物学的实验教学,还可供科研人员使用。     

绿色荧光蛋白在草鱼肾细胞中的表达

应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白（GFP）基因的质粒pEGFP-N1转染到培养成单层的草鱼肾细胞（CIK）中,通过荧光倒置显微镜和特异性RT-PCR方法检测GFP的表达.在荧光倒置显微镜下可见CIK细胞的胞质和胞核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质.转染细胞中的转录产物经RT-PCR扩增后,凝胶电泳鉴定出与GFP基因片段分子量大小一致的条带,经测序证明其为GFP基因序列.结果表明,GFP基因可以在草鱼CIK细胞内高效率成功表达,为构建以GFP为报告基因的真核重组质粒及研究草鱼出血病DNA疫苗奠定了重要的基础.     

小鼠大脑皮质星形胶质细胞的原代培养及鉴定

为了体外分离培养小鼠大脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)。取新生24 h内ICR乳鼠,超净台内断头取脑,体视显微镜下剥除脑膜、血管及海马,获得完整的大脑皮层组织,经手术刀切碎组织,旋涡震荡,过两次尼龙筛网以制备单细胞悬液,接种于35 mm塑料培养皿,倒置相差显微镜下观察细胞形态学状况,培养至3~4周,进行星形胶质细胞标记性蛋白胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光鉴定细胞纯度。本研究表明,倒置相差显微镜下观察细胞于接种后2~3 d大部分贴壁,生长至7 d左右即铺满皿底,3~4周细胞生长成熟,胞体较大,形状不规则,呈"铺路石"(cobblestone-like structure)状,免疫荧光鉴定可见GFAP阳性细胞占细胞总数比例达95%以上。通过以上方法可获得高纯度星形胶质细胞,为下一步实验提供大量生长状态良好的细胞。     

青蒿琥酯和青蒿素抗肿瘤作用及其机制的初步研究

目的:探讨人白血病细胞株K562经青蒿琥酯和青蒿素处理后基因表达的变化及其可能机制.方法:K562细胞经不同浓度青蒿琥酯和青蒿素处理24h后,倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期变化;提取细胞总RNA,将逆转录生成的cDNA与基因芯片杂交,分析杂交结果.结果:倒置光显微镜:细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,漂浮细胞增多.荧光显微镜:染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块,即凋亡小体.流式细胞仪:G2期细胞的比例明显增加.芯片杂交分析数据,青蒿琥酯处理组有10条基因表达有差异,表达上调的基因有:p21、chk1,表达下调的基因有:cyclinB1、cyclinE1、E2F1、DNA-PK、hTERT、bcl-2、jnk、VEGF;青蒿素处理组有10条基因表达下调:cyclinD1、cdk4、cdk2、cdc2、DNA-PK、DNA-TopoI、mcl-1、erk、jnk、VEGF.结论:青蒿琥酯和青蒿素可以抑制K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡等有关.     

穿心莲内酯对白假丝酵母菌菌丝的影响

目的探讨中药有效成分穿心莲内酯（Andrographolide,AG）对白假丝酵母菌菌丝的影响。方法利用稀释涂布法观察AG对固体培养基上白假丝酵母菌菌落形态的影响;倒置显微镜观察AG对白假丝酵母菌芽管及菌丝形态的影响;采用xTT还原法评价AG对白假丝酵母菌菌丝活性的影响;采用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）检测白假丝酵母菌菌丝形成相关基因SUN41、CSHl以及CaPDE2表达量变化。结果AG能影响白假丝酵母菌菌落的形态;倒置显微镜观察表明AG能够抑制白假丝酵母菌菌丝及芽管的形成;qRT-PCR检测显示AG能使SUN41和CSHl基因表达下调和使CaPDE2上调。结论穿心莲内酯可能通过影响SUN41、CSHl与CaPDE2基因的表达而抑制白假丝酵母菌菌丝的形成。     

新型数字化高灵敏度荧光显微镜及其在生物学中的应用

尽管普通荧光显微镜已广泛应用于生物医学领域,其性能上还存在一些不足,为了克服它的弱点,借助于像增强器和ＣＣＤ,将倒置生物显微镜改造为数字化高灵敏度荧光显微镜,并增加动态图像获取功能。改进后的荧光显微镜具有以下优点：（１）灵敏度极高,可探测微弱的荧光图像;（２）运用图像融合技术,实现荧光准确定位;（３）适合于观察切片和活细胞;（４）可研究细胞荧光图像的动力学特征;（５）能够给出图像上各点的坐标和对应的发光强度,具有定量显示特点;（６）图像处理软件功能完善,操作方便。利用该荧光显微镜,以吖啶橙为荧光标记物观察正常细胞和凋亡细胞的不同状态,获得良好的实验效果。     

接种密度对大鼠海马神经元产出量的影响

目的:观察不同接种密度对海马神经元细胞数量、形态和神经网络连接的影响,以获得成熟的海马神经元。方法:利用机械分离和胰酶消化的方法获得海马神经元,将所得神经元细胞接种于1×104/cm2、2×104/cm2、4×104/cm2、8×104/cm2,16×104/cm2等5个不同的密度组中,在倒置显微镜镜下观察神经元细胞生长状态,培养5~7 d时行微管相关蛋白2免疫荧光染色鉴定。结果:海马神经元细胞培养7 d后,倒置显微镜下可见在4×104/cm2、8×104/cm2的接种密度下成熟神经元的数量相较其他组差异明显,并且神经元形态典型,建立了丰富的网络连接。结论:适宜的接种密度能提高神经元的成熟数量,为神经元网络的形成和进一步的实验奠定了基础。     

大鼠脊髓匀浆上清诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的:观察大鼠脊髓匀浆上清诱导骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)形成的神经元样细胞形态特征.方法:通过贴壁法培养分离大鼠骨髓MSCs,体外扩增纯化后加入正常大鼠脊髓匀浆上清诱导72h,倒置显微镜下观察诱导前后细胞的形态结构.激光共聚焦显微镜观测钙离子细胞形态和荧光强度变化,免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞的表型特征.结果:倒置显微镜下可见MSCs呈纺锤形和多角形,核居中,有1-2个核仁,诱导后细胞呈神经元样,细胞伸出较长的轴突样和树突样突起.免疫细胞化学法显示NSE(神经元特异性烯醇化酶)、NF(神经丝蛋白)阳性,GFAP(神经胶质细胞酸性蛋白)阴性.共聚焦显微镜扫描脊髓匀浆上清诱导前细胞形态呈细长的梭形,细胞核不明显,胞体染色强,突起染色弱,荧光像素值低;诱导后,细胞呈现神经元样形态,胞体大,有多个突起,胞体及各突起染色强,荧光像素值高.结论:大鼠脊髓匀浆上清液可在体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞.     

水飞蓟宾抑制肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力

目的探讨水飞蓟宾对肝癌细胞生长、增殖和迁移能力的影响。方法用含不同浓度水飞蓟宾的培养基孵育HepG2细胞后,采用倒置显微镜观察细胞形态,应用MTT法、Ed U掺入实验和细胞克隆形成实验法检测细胞增殖能力,应用细胞划痕试验分析水飞蓟宾对HepG2迁移能力的影响。结果用不同浓度水飞蓟宾刺激HepG2细胞后,倒置显微镜镜检显示:水飞蓟宾刺激使细胞数目减少,胞体皱缩变小,高浓度刺激时出现较多的死亡细胞。MTT分析、Ed U增殖实验和克隆形成实验显示:水飞蓟宾刺激使细胞增殖能力显著降低,细胞的克隆形成数显著减少。细胞划痕试验结果显示:水飞蓟宾对HepG2细胞的迁移爬行能力也产生明显抑制作用。结论水飞蓟宾能抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

香菇Latcripin-8蛋白诱导HepG-2细胞凋亡的 机制研究

目的探讨香菇Latcripin-8蛋白对HepG-2肝癌细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法运用倒置显微镜、透射电镜、吉姆萨染色法和流式细胞仪法对细胞凋亡进行检测。采用Western blot法检测JAK3、STAT3和P53等凋亡相关蛋白的表达水平。采用Caspase-8活性检测盒检测Caspase-8活性。结果 HepG-2细胞经Latcripin-8蛋白作用后,倒置显微镜、透射电镜和吉姆萨染色等检测显示在形态学上Latcripin-8蛋白结构域抑制HepG-2细胞生长,并伴有凋亡小体产生。流式细胞仪检测显示该蛋白诱导HepG-2细胞凋亡。Western blot法检测结果显示JAK3和STAT3等蛋白的表达水平随药物浓度的增加而下降,而P53随药物浓度增加其表达量上升;凋亡相关因子Caspase-8的活性与对照组相比也均有不同程度的提高。结论香菇Latcripin-8蛋白结构域可能是通过JAK-STAT信号通路来诱导HepG-2肝癌细胞凋亡。     

不饱和脂肪酸对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响

探讨不饱和脂肪酸对人脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的形态、增殖、免疫表型及分化潜能的影响.采用0.15％Ⅷ型胶原酶消化法从皮下脂肪组织中分离获得ADSCs,使用添加了油酸或亚麻酸的培养基对ADSCs进行传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态,计数法绘制细胞生长曲线,流式...