大鼠主动脉内皮细胞和平滑肌细胞的原代培养及生物学特性比较

目的培养大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞,细胞纯化与鉴定,比较生物学特性的差异。方法采用血管环贴壁法培养动脉内皮细胞,组织块贴壁法培养动脉平滑肌细胞,并采用有限稀释法挑选内皮细胞单克隆,免疫细胞荧光鉴定二者的特异性标志,相差显微镜观察二者单个细胞及细胞群体在形态上的差异性,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,比较二者对胰酶消化,粘附,冻存后复苏的情况。结果血管环贴壁法成功培养血管内皮细胞,组织块培养法成功培养出血管平滑肌细胞,内皮细胞能够形成单克隆集落,培养的细胞均表达相应的特异性标志,内皮细胞增殖速度和平滑肌细胞有差异,内皮细胞对胰酶的耐受性较差,内皮细胞粘附所需时间短,对冻存后的耐受性较好。结论组织块贴壁法适合内皮细胞和平滑肌细胞的培养,有限稀释法能够纯化原代培养的内皮细胞,大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞在细胞形态、增殖、粘附、对胰酶的反应、冻存后复苏均存在差异。     

沙利度胺通过诱导G1阻滞和凋亡抑制血管内皮细胞增殖

沙利度胺是一种抗血管生成药物,临床上用于治疗多种肿瘤,但其抗肿瘤血管生成机制尚不十分清楚. 本文采用MTT法观察沙利度胺对体外培养的血管内皮细胞增殖的影响. 结果发现,沙利度胺能够抑制血管内皮细胞的增殖,其IC50为16.47 μg/mL;然后采用Hoechst染色和流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,发现沙利度胺能够诱导内皮细胞凋亡,并干扰细胞的周期,出现G0/G1期阻滞. 最后,通过Western印迹方法分析沙利度胺对血管内皮细胞Bcl-2蛋白表达的影响,发现抗凋亡的Bcl-2蛋白表达水平随沙利度胺浓度增大而降低. 初步结果提示,沙利度胺可能通过阻遏抗凋亡分子Bcl-2表达,激活诱导G1期阻滞的信号通路而抑制内皮细胞新生,从而抑制肿瘤生长. 诱导内皮细胞凋亡及G1期阻滞的具体分子机制正在研究中.     

中药M对兔内皮细胞增殖影响的初步研究

目的　旨在探讨中药M对兔内皮细胞增殖的影响 ,试图阐明单味中草药品种M的活性成分促进血管生成的生物学机制。方法　建立兔胸主动脉内皮细胞体外培养模型 ,制备不同浓度的兔中药血清加入 96孔内皮细胞培养板 ,以MTT比色法测定内皮细胞增殖情况。结果　生脉素能够促进内皮细胞的增殖 (P <0 0 5 )。结论　中药M可能通过促进内皮细胞的增殖和分裂而达到其促进血管生成的作用     

两种底物上培养的人脐带静脉内皮细胞的形态观察与比较

血管内皮细胞位于整个循环系统的内表面,具有多种生理功能,其结构和功能的改变与多种疾病的发生有关[1],如肿瘤扩散、心血管疾病、免疫疾病等。因此分离血管内皮细胞并进行体外培养具有重要意义。自1963年Marayama首次报道了人脐带静脉内皮细胞的培养方法以来,内皮细胞培养技术     

新生隐球菌与血管内皮细胞相互作用的研究进展

隐球菌性脑膜脑炎的发病率在逐年上升,而隐球菌与血管内皮细胞的相互作用是其侵犯其他深部组织的前提,能够在血管内皮细胞内繁殖并造成其损伤是隐球菌致病的重要因素。本文就两者的相互作用作一综述。     

血管内皮细胞在主动脉瘤发展中作用的研究进展

主动脉瘤(aortic aneurysm)是以动脉出现永久性扩张为特征的一类血管疾病，常发生于肾下以及胸近端区域，破裂后十分凶险。目前主动脉瘤的治疗方式局限于手术干预，且尚未发现有效治疗药物，因此，寻找有效的干预靶点成为主动脉瘤治疗的新思路。近年来的研究表明，血管内皮细胞(endothelial cell)在受到外界环境刺激后可发生氧化应激、炎症反应及屏障功能破坏，而这些均可能参与动脉瘤的发生发展。随着内皮细胞在动脉瘤中的重要作用逐渐被揭示，基于内皮细胞为靶点进行干预也取得了较多的研究进展。本文重点综述了内皮细胞在主动脉瘤发生发展中的具体作用机制及以内皮细胞为靶点的动脉瘤治疗方法，旨在为临床干预主动脉瘤进程提供参考。     

小鼠肝血窦内皮细胞分离与鉴定新方法

目的:改进小鼠原代肝血窦内皮细胞的分离方法。方法:经过小鼠肝脏的原位灌洗、消化制备单细胞悬液、差速离心、密度梯度离心以及免疫磁珠分选等步骤,分离获得小鼠原代肝血窦内皮细胞,再通过流式细胞仪鉴定、细胞内吞功能染色以及对细胞超微结构的电子显微镜观察,对分离出的肝血窦内皮细胞进行鉴定。结果:肝血窦内皮细胞的平均得率为5.6×10~6个/只小鼠,细胞活性比率约为96%左右;细胞流式鉴定结果显示新鲜分离出的肝血窦内皮细胞VEGFR3阳性率达到95.8%,VEGFR2+CD31+双阳性细胞阳性率达到93.7%。分选出的LSECs能够有效吞噬FITC-FSA和Dil-Ac-LDL。培养1天后肝血窦内皮细胞的微观结构,可见其特征性的窗孔和筛板。结论:本文总结的分离方法可以稳定、高效地获得小鼠原代肝血窦内皮细胞。     

高中生物趣味性教学方法探析

兴趣是影响学生学习主动性的直接因素,随着新课改的实行,如何培养学生的学习兴趣是很多科目教师关注的问题,对于高中生物的教学,培养学生的学习兴趣也是十分重要的,学生的学习积极性对教学成果的作用越来越大,这就需要广大高中生物教师能够积极培养学生的学习兴趣,本文就像对于高中生物的趣味性教学方法予以探讨分析。     

服装设计中人体动作适应性实验方法的研究─官能评价、脑波、唾液浓度的测定─

对于服装设计过程中,测量人体动作适应性的尺寸并掌握其变化规律是非常重要的。目前传统的实验方法都是基于静态下的人体动作而服装设计的,并不适合于动态下的人体动作适应性。为了更好的探索和设计出一种动作适应性的实验方法,而进行了基于人体动作适应性的相关研究。因此这种实验方法在服装设计中把握人体动作适应性方面,具有较好的实用性,对于服装设计能够提供有效的支持。     

体外研究血管内皮细胞单层通透性的新方法

血管壁通透性增高足创伤、烧伤、感染、休克和炎症等病理过程的重要变化和特征,其机理尚不十分清楚。内皮细胞是血管壁的主要通透屏障,研究内皮单层的通透性特征及其在病理情况下的变化机制对人们了解血管壁的通透性增高机制和寻找临床防治方法有着极为重要的意义。我们建立了用体外培养的内皮细胞单层研究通透性的装置,可以较为准确地测定内皮单层对液体的滤过系数Kf,便于体外研究各种体液因子和炎症介质对血管通透性的影响及其机制,也可用于研究白细胞-内皮细胞的相互作用。     

烟曲霉素类似物有抗癌作用

美国波斯顿妇科医院的医生最近从烟曲霉(Aspergillus fumigatus Fres.)培养物中分离到一种烟曲霉素,这是一种抗生物质,能抑制固体瘤中生长的新血管形成。当用此真菌培养物接入人体内皮细胞     

心肌-内皮信号途径在心脏发育中的作用

内皮细胞对于调节和维持心脏发育起着十分重要的作用.随着基因功能研究技术的发展,已有越来越多的资料表明内皮 心肌细胞相互作用对于心脏生长和发育是必须的.目前已经发现包括神经调节蛋白、血管紧张素、NO、TGF β、内皮素等在内的很多细胞信号途径均参与了此过程.就在心脏发育过程中心肌 内皮细胞相互作用的重要信号途径作一综述.     

角膜内皮细胞再生研究新进展

人角膜内皮细胞的主要功能是维持角膜透明性,角膜内皮单层发育成熟形成细胞接触后,内皮细胞会停止分裂增殖,但并没有退出细胞周期。角膜内皮细胞的增殖有多种因素的参与和影响,接触抑制和G1期抑制使细胞增殖暂时停止;细胞因子TGF-β2抑制人角膜内皮细胞进入细胞周期S期,而EGF、FGF、NGF则能够促进细胞的增殖;ROCK抑制剂Y-27632能够促进角膜内皮细胞的粘连,有助于内皮细胞的损伤修复。体外培养角膜内皮前体细胞、诱导多潜能干细胞向角膜内皮细胞分化,为今后治疗角膜内皮失代偿提供了新方向。     

人脐静脉内皮细胞的原代培养和鉴定

目的：探索建立稳定有效的脐静脉内皮细胞体外培养方法。方法：用0．1％II型胶原酶消化分离人脐静脉肉皮细胞,加入含内皮细胞生长因子的M199完全培养液中培养,用胰蛋白酶-EDTA进行消化传代培养,用光镜和免疫组化方法对培养的细胞进行形态观察和鉴定。结果：原代培养的内皮细胞在接种后24h后完全贴壁生长,第445天后融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组化可见胞浆中第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应,证实培养的细胞为内皮细胞。结论：脐静脉灌注II型胶原酶消化法配合M199完全培养液可获得高纯度的内皮细胞,细胞可传代5—6次,但细胞产出量不高,不能传10代以上,5代以后细胞形态变化较大,对于复杂的基础研究应用受限。     

脂肪来源间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展

脂肪来源的间充质干细胞具有较强的体外增殖能力,因具有生物学特性稳定、来源充足、体外培养条件低等优势已引起各国学者的关注。脂肪间充质干细胞凭借其多向分化潜能,是人体干细胞库潜在的重要来源之一。目前,研究人员已成功地在体外将其诱导为内皮细胞,成骨细胞、成软骨细胞、脂肪前体细胞、平滑肌细胞,心肌细胞、神经样细胞等。就脂肪来源的间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展作一综述。     

人体肠道细菌的培养组学研究进展

人体微生物组学研究显示肠道细菌与健康关系极为密切。人体肠道丰富多样的细菌构成了肠道细菌组, 是人体微生物组数量最多的部分。研究肠道细菌时使用较多的是宏基因组学方法, 但技术本身存在“深度偏差”等缺点亟待解决。肠道细菌的培养组学是近年来的一个研究热点, 该方法可以在一定程度上减小宏基因组学带来的误差, 培养条件的多样化亦可帮助研究者找到目标菌种相对适宜的生长条件, 极大提高培养效率等。还综述了近些年国内外人体肠道细菌培养组研究的最新进展, 分别从人体肠道细菌的组成特征、肠道细菌培养组学的研究成果, 培养组学的不足等方面进行了论述, 探讨了肠道细菌的培养组学在人体疾病防治领域应用的可行性。虽然作为一个新兴的研究思路, 培养组学还存在很多不够成熟的方面, 但不可否认的是它的发展前景十分可观。培养组学和其他研究方法的互补或许会成为下一个研究微生物的突破口。     

组织工程静脉血管种子细胞的培养

目的获取可应用于静脉血管组织工程的种子细胞内皮细胞。方法选取北京地区雄性杂种犬,取其双侧颈外静脉,采用翻转后酶消法,获取原代内皮细胞,对其进行原代培养和传代培养,冻存、复苏和鉴定,并利用光学显微镜进行观察。结果获取犬的颈外静脉后,实验采取了翻转后酶消法,所获得的内皮细胞纯度和数量得到了提高;经过鉴定确实为内皮细胞来源;活性好,增殖快,在较短的时间内能够达到后期实验所需数量。结论经体外培养的犬的颈外静脉内皮细胞可以作为组织工程血管的种子细胞。     

流体剪应力作用对内皮细胞变形的影响

血液流动和内皮的耦合是重要的生物医学问题,引起了学者们的广泛兴趣。目前已知流场剪应力对内皮细胞的形态和功能有重要影响,流体剪应力被认为是引起内皮细胞重建的始发信号。所以,了解流体剪应力与内皮细胞之间的相互作用机制是十分重要的。建立了一个理论模型来模拟流场剪应力与内皮细胞之间的相互作用。根据二维计算流体动力学方法研究了流体剪应力作用下内皮细胞表面的应力、压力分布。模拟结果表明:(1) 内皮细胞的变形随琢(对应于流体作用于细胞表面的剪应力)的变化而变化。当琢很小时(<0.02),流场剪应力对细胞变形的影响很小;随着琢的增大,细胞的变形也相应增大;当琢达到0.20以上时,细胞的变形变化很小,即细胞的形态保持相对稳定。(2) 流动引起了细胞表面应力和压力分布的不均匀,从而导致了细胞的变形,但内皮细胞的最大应力总是位于细胞的顶点。同时,用流室系统提供剪切流动,测量了不同剪应力作用下培养的人主动脉内皮细胞的变形,所得到的实验结果与数值模拟结果吻合。结果提示,由于剪切流动引起细胞表面应力分布的不均一,可能在细胞激活和细胞功能的调节(如细胞骨架的调节、粘附分子的表达与分布等)机制上具有特殊的作用。为应用流体动力学理论研究细胞(内皮细胞、白细胞等)变形以及细胞-基质粘     

NO供体（SIN—1）损伤内皮细胞的实验研究

选择体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)为研究对象,研究了不同浓度NO供体 SIN-1(3-morpholinosydnonimine)对内皮细胞的作用以及SOD、CAT对内皮细胞的保护作用。结果提示:高浓度SIN-1可严重损伤内皮细胞;SOD、CAT能协同减轻NO对内皮细胞的损伤,说明ONOO~-的产生可能是NO损伤内皮细胞的重要机制。     

肺微血管内皮细胞的原代培养

目的:建立简单高效获取大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)的培养方法.方法:(1)组织块贴壁法培养大鼠PMVECs;(2)光镜下观察细胞的形态;(3)扫描电镜和透射电镜分别观察细胞表面及内部的结构特征;(4)免疫荧光法鉴定PMVECs.结果:(1)获得的PMVECs长满后呈典型的铺路石或鹅卵石状;(2)扫描电镜下可见内皮细胞表面存在微绒毛等特殊结构;(3)透射电镜观察可见细胞浆内存在韦伯潘力氏小体(Webel Palade body,WPB);(4)免疫组化结果显示细胞浆中有Ⅷ因子相关抗原存在.结论:改良的组织块法培养肺微血管内皮细胞是一种简单、快捷,有效的方法.