非人灵长类的体外受精和胚胎移植

非人灵长类的体外受精和胚胎移植是了解人类生殖机制,如卵的成熟调控,受精卵的成熟与分化,胚胎着床,控制某些遗传疾病以及保护珍稀灵长类和提高实验灵长类质量的有效途径。本文从非人灵长类卵的获取(包括超数排卵,非激素刺激动物取卵),精子处理(精液采集,冻存和精子获能),体外受精和胚胎移植、胚胎的冻存等方面介绍了有关研究概况和发展动态。     

体外受精-胚胎移植术后相先兆流产患者焦虑情绪护理研究进展

本文综述了体外受精-胚胎移植术后先兆流产患者焦虑情绪产生的原因和影响,并总结了国内外对体外受精-胚胎移植术后先兆流产患者焦虑情绪的心理干预方法,结合心理和生理的描述,为临床体外受精-胚胎移植术后先兆流产患者焦虑心理的护理提供了参考依据。     

夕阳西下 满目霞光——怀念敬爱的刘斌教授

<正>刘斌教授是我国人类体外受精技术研究的开拓者,在国内率先成功建立人类体外受精技术（1985）,是我国大陆第一例体外受精-胚胎移植婴儿（俗称“试管婴儿”）和输卵管配子移植婴儿技术的关键奠基人。早在1984年,我还在福建医学院组织学与胚胎学教研室当助教的时候,就听外出开会回来的老教师说,北医（北京医学院,即现在北京大学医学部的简称）组胚（组织学与胚胎学的简称）的刘斌老师从欧洲留学回来,正在研究引进试管婴儿技术。     

我国大陆“试管婴儿”研究进展

介绍了自我国大陆首例试管婴儿诞生后,体外受精,胚胎移植研究进展,继北京,湖南和广州之后,近一年来山东和上海都有成功的报道。临床妊娠成功率平均可达２０％～３０％。已出生的试管婴儿估计已超过２００个,采卵大都应用Ｂ超下一根针穿刺方法,赠卵体外受精,胚胎移植及冻融胚胎移植也获得初步成功。     

更正启示

<正>《生物技术世界》杂志2015年第12卷第4期82页上的"体外受精-胚胎移植术后相先兆流产患者焦虑情绪护理研究进展"一文题目应为:"体外受精-胚胎移植术后先兆流产患者焦虑情绪护理研究进展"。     

非人灵长类胚胎工程研究进展

由于非人灵长类动物与人类在进化上的亲缘关系和生理特征上的高度相似,它们在人类传染病、生殖、发育、代谢、神经和衰老等研究领域具有重要的应用价值。现对非人灵长类动物的常见胚胎工程技术进行综述,包括非人灵长类动物的配子收集、体外受精和胚胎移植等;同时,还结合基因组编辑技术的发展,简要介绍了近年来胚胎工程技术在非人灵长类动物基因编辑方面的应用。     

IVF-20培养液用于大鼠体外受精的实验研究

目的探讨人用体外受精液用于实验大鼠体外受精的可行性,为实验大鼠的胚胎保种提供参考。方法选用人体外受精IVF-20培养液作为大鼠精子获能和受精培养液,对SD、Wistar、GK、F344等四种不同品系的实验大鼠进行体外受精;用mR1ECM培养液对体外受精所得胚胎进行体外培养实验。同时,将所得2-细胞胚胎移植给经假孕处理的受体鼠。结果四个品系大鼠体外受精后的卵裂率分别可达83.2%、72.6%、87.8%和71.6%。体外受精卵裂胚能够在体外进一步发育,SD大鼠囊胚发育率为16.7%,与体内受精胚胎在体外培养的囊胚发育率(24.5%)差异不显著。80枚2-细胞胚胎移植给2只受体鼠后均妊娠成功,产下正常仔鼠10只,产仔率12.5%。结论用于人体外受精的IVF-20培养液同样适合于实验大鼠精子的体外获能和受精,可以在多种品系获得较高的卵裂率,所得卵裂胚能够在体外发育到囊胚,并且所得卵裂胚在移植给受体鼠后能够产下正常仔鼠。     

提高胚胎移植中受体牛妊娠率的研究进展

胚胎的质量和受体牛的质量是影响胚胎移植受体牛妊娠率的两具非人为因素。近年来人们在提高胚胎的质量和建立旨在提高受体牛质量的受体牛选择标准方面做了大量的工作,使胚胎移植工作中受体牛的妊娠率有了很大提高。本文从超数排卵、体外受精两种胚胎生产方法中如何提高胚胎的质量以及受体牛质量控制等方面了有关研究概况和发展动态。     

4℃保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

为了探明雌性动物死亡后GV期卵的可利用性,本研究将ICR系雌性小鼠处死,尸体在4～6℃下分别保存16h、24h和48h,取其卵巢GV期卵,体外成熟后,应用常规法进行体外受精或透明带切割法体外受精,获得2细胞期胚,通过体外培养或胚胎移植观察其发育能力。结果显示,4～6℃下保存16h和24h处理组的体外受精率(分别为31%、33%和21%、24%)与来自新鲜的带有颗粒细胞卵的体外受精率(33%)相比无显著差异。与其相比,保存48h处理组的GV卵已丧失发育能力。此外,体外受精中获得的2细胞胚经体外培养,16h处理组和24h处理组的囊胚率(60%、61%和72%、83%)与新鲜GV期卵处理组的囊胚率(72%)相比差异不显著。获得的2细胞胚经胚胎移植可得到正常幼鼠。上述结果表明,如果雌性小鼠死亡后立即在冷藏温度下(4～6℃)保存,其体内的GV卵在24h以内仍保持发育能力。     

发育工程与家畜改良

二十世纪七十年代后胚胎移植几乎引起一场家畜繁殖技术的革命,并波及到胚胎学、发育生物学、免疫学、遗传学等基础学科。随之产生了一些新尖的技术与之相互配合,形成了熔各种知识和技术手段于一炉,瞄准应用的研究领域——发育工程。本文集中讨论胚胎移植、冷冻、性别鉴定、卵母细胞体外受精、受精卵核移植和嵌合体及转基因动物制作等发育工程技术的兴起及其对家畜遗传改良所产生的积极影响。     

试管婴儿与“优生学”的实施

1987年,湖南医科大学为一对10年不孕的夫妇作了体外受精和胚胎移植.为一结扎多年的女工移植了供胚,1988年诞生了两例试管婴儿,目前试管婴儿生长良好.专家们认为,这一科研成果为计划生育和后代优生提供了技术保证,为生殖工程与遗传工程结合防治人类遗传病的研究打下了良好的基础.透过这两例试管婴儿的诞生,也使人们看到了提倡和实施“优生学”的前景.     

不同品系小鼠的体外受精、胚胎冷冻及移植的比较研究

目的　探讨不同品系小鼠的体外受精、胚胎和精子的低温保存效果。方法　本实验分别在中国科学院上海实验动物中心 (SLAC)和日本熊本大学动物资源开发中心 (CARD)对 13个品系小鼠 (C57BL 6J、BALB c、C3H HeJ、ICR、KM、FVB、MRL、NOD、CBA、DBA 2、CD 1、BDF1、B6C3F1)的体外受精 (IVF)率、胚胎培养及移植成绩进行了比较研究。结果　各品系小鼠新鲜精子的IVF率 15 1%～ 87 9% ,冻融精子的IVF率 8%～ 80 % ;冷冻胚胎的复苏率4 2 6 %～ 83 9% ;冻融胚胎移植后的产仔率在 17 8%～ 5 1 8%。结论　遗传背景不同的小鼠体外受精率、冷冻胚胎复苏率和胚胎移植的产仔率差异有显著性。但同一品系两个实验室间的新鲜精子的IVF率、冷冻胚胎的复苏率及移植产仔率差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;冻融精子的体外受精率CARD明显高于SLAC(P <0 0 1)。     

以精子为载体的体外转基因猪胚胎研究

去精清精子与外源DNA共孵育,使其携带外源DNA,再与成熟卵母细胞进行体外受精,生产转基因猪胚胎,为通过胚胎移植生产转基因猪奠定基础。结果:通过PCR从不同时期胚胎中检测出携带外源DNA的阳性胚,说明精子与外源DNA共孵育能使精子携带外源DNA,并通过体外受精技术使外源DNA进入早期胚胎。     

室温下保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

将ICR系雌性小鼠处死并在10℃、15℃、20℃和25℃下依次保存8、14、24和48 h后,采集其体内的卵巢GV期卵,采用常规方法进行体外成熟和体外受精,获得的2细胞期胚经体外培养或胚胎移植观察其发育能力.其结果,在10℃下保存24 h、15℃下保存14 h、20℃下保存8h和25℃下保存4 h后,其体内附有卵丘细胞的GV卵的体外成熟-体外受精后的2细胞率分别为14%、9%、10%和10%,随着保存温度的提高和保存时间的延长,带有颗粒细胞GV期卵的比率明显降低,同时其GV期卵经体外成熟及体外受精后的2细胞率明显降低.在20℃下保存24 h和25℃下保存14 h时,难以获得形态正常的GV期卵;体外受精获得的2细胞期胚经体外培养,总体上有64%的胚胎发育至扩张囊胚,未见有保存温度和保存时间的显著影响,且利用在15℃保存8 h后的GV卵获得2细胞期胚的移植获得正常新生小鼠.上述结果表明,雌性动物室温条件下死亡后,若能短时间及时采集其体内GV期卵并体外成熟、体外受精,体外培养及胚胎移植技术,就有可能获得新生后代.     

还原型谷胱甘肽在AG129小鼠生物净化及快速繁殖中的应用

目的 AG129小鼠自然产仔困难,采用常规体外受精试剂无法获得足够数量用于移植的胚胎。使用还原型谷胱甘肽(GSH)调节小鼠体外受精液成分,完成对AG129小鼠体外受精,为体外受精困难品系的基因工程小鼠生物净化及快速扩繁提供思路。方法设计3个含不同浓度GSH的精子获能及受精液的实验组,浓度分别0. 5、1、2 mmol/L,1个不含GSH的精子获能液及受精液的对照组,每组超排5只小鼠,重复3次。结果不同GSH实验组及对照组间平均受精率差异具有显著性(P 0. 05),在精子获能及受精液中GSH浓度为1 mmol/L时,AG129小鼠体外受精效果最佳,平均受精率为(43. 35±1. 76)%,胚胎状态良好。将获得胚胎移植受体小鼠,受体动物均妊娠并顺利产仔。结论体外受精液中的GSH浓度为1 mmol/L时,能够显著提高AG129小鼠体外受精效率,为类似体外受精困难品系的小鼠生物净化及快速繁殖提供解决方案。     

生物工程技术在实验小鼠生物净化上的应用

目的采用体外受精的技术,对L858R、TL清洁级小鼠,以及来源于野外的中华小家鼠,和感染肺炎克来伯氏菌的Balb/c-nu裸鼠进行生物净化。方法对于需要净化的小鼠的雄鼠,采集附睾的精子,放入HTF溶液中获能,然后加入经过超排的卵团,体外受精。20-22 h后,挑选形态正常的二细胞胚胎,在净化实验室,移植给假孕的SPF级ICR母鼠,待产仔。仔鼠断奶后,随机选择仔鼠及带奶母鼠送检。结果体外受精的胚胎,经过移植后,均顺利产仔;仔鼠及母鼠的微生物级别,均达到SPF级。结论对于微生物级别较低的实验小鼠,采用在洁净实验室内做体外受精、胚胎移植的方法,可以提高实验小鼠的微生物级别。     

一种非手术性小鼠胚胎移植技术

为了提高非手术性小鼠胚胎移植技术的成功率,利用塑料移植导管模拟非手术胚胎移植过程,通过观察染料在子宫角的分布而评估胚胎移植效果,并在此基础上将自然妊娠3.5 d的小鼠囊胚经子宫颈移植受体小鼠。结果表明:将CD-1小鼠囊胚移植假孕2.5 d小鼠单侧子宫角,平均70.9%的胚胎能够发育至成活新生仔鼠,建立了高效非手术性小鼠胚胎移植技术。该方法简便快捷、不易污染、费用低,无需专业的手术器械,且符合实验动物伦理原则,完全可以取代手术法胚胎移植技术,更重要的是,它为人类和其他大动物的胚胎移植提供了研究模型。     

家猫的胚胎工程

家猫是惟一一种没有被列为珍稀或濒危的猫科动物。通过家猫的胚胎工程研究,对保护其它濒危猫科物种有重要的借鉴意义。本文描述了家猫的一般生殖特点,着床前的胚胎在体内的发育概况;综述了近年来对家猫的超数排卵,卵母细胞的体外成熟,体外受精,胚胎的体外培养,胚胎移植,冷冻保存和胚胎克隆等方面的研究进展。     

Ⅰ型干扰素受体缺失小鼠体外受精实验研究

目的探索两种I型干扰素受体缺失对于小鼠体外受精的影响并对体外受精条件进行优化。方法对两种I型干扰素受体缺失小鼠(IFN-αR-/-、IFN-α/βR-/-)及背景野生型小鼠(C57BL/6)分别进行体外受精及胚胎移植,每组超排5只小鼠,3次重复,记录相关数据,分析干扰素受体缺失是否对小鼠体外受精存在影响。分别将两种I型干扰素受体缺失小鼠配子与C57BL/6小鼠配子进行体外受精杂交试验,每组5只小鼠,3次重复,探讨I型干扰素受体缺失对雌雄配子体外受精的影响。同时,优化体外受精条件,探索提高受精率技术方法,每组5只小鼠,三次重复。结果两种I型干扰素受体缺失小鼠平均体外受精率低于背景品系C57BL/6小鼠,组间差异具有显著性(P0. 05)。干扰素α受体缺失小鼠体外受精率高于干扰素α、β受体双缺失小鼠体外受精率,组间差异具有显著性(P0. 05)。两种I型干扰素受体缺失小鼠的精子与C57BL/6小鼠卵细胞体外受精率均高于其卵细胞与C57BL/6小鼠精子的体外受精率,组间差异具有显著性(P0. 05)。通过延长精子获能时间至1 h或在获能液及受精液中加入1 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)能够提高体外体外受精率,相应组间差异具有显著性(P0. 05)。结论 I型干扰素受体缺失可能导致相应品系小鼠体外受精率降低,而且对卵细胞的影响较精子的影响更为显著,通过适当延长精子获能时间或改变获能及受精液成分,能够提高体外受精率。     

人类囊胚期胚胎培养-移植的研究现状

传统的体外受精-胚胎移植选择卵裂期胚胎进行移植,然而,多胎率高、成功率低始终困惑着生殖医学者,囊胚移植更符合生理过程,胚胎与子宫内膜更为同步性,因而可获得更高的胚胎种植率及临床妊娠率,且减少胚胎的移植数量,降低了多胎妊娠发生率,具有广泛的应用前景。