MTT法检测细菌细胞数的主要影响因素分析

MTT法是生物活细胞计数的灵敏、快速和便捷方法。报告对MTT法应用于细菌细胞数定量分析时的分析前培养时间、MTT反应时间、MTT剂量和检测波长等主要影响因素的分析结果,同时报告MTT反应产物溶解检测与直接检测,以及MTT法与平板菌落计数法定量检测的结果比较。结果如下：Formazan生成量与细菌活细胞数呈正相关,对数生长期变化最明显;MTT为0.25 mg/mL,反应2 h时吸光值与菌落数具有良好的线性关系（r=0.999 8）;Formazan的最大吸收波长为570～580 nm;MTT反应产物溶解检测和直接检测结果经统计学分析无显著性差异（P〉0.05）;细菌细胞数在107～109 cfu/mL范围内,MTT法与菌落计数法定量结果呈现良好的线性关系（r≥0.991 7）。     

涂片法与培养法在咽部菌群检测研究方面的应用比较

目的 探讨涂片法在咽部菌群研究方面的实际应用。方法 分别应用涂片法和培养法对26例健康成人的咽部菌群进行细菌密集度和多样性的检测。以秩序和检验等统计分析两种方法的差异。结果 两种方法用于密集度检测时无差异,（P＞0．05）;用于多样性检测时,结果显示出非优势菌多样性明显不同。而以优势菌的种类结果相比较时,两种方汉检测结果基本一致（P＞0．05）。结论 要了解人体某部位微生态的改变,依据统一的换算标准,在对细菌密集度和多样性进行检测的两项指标中,涂片法是能够替代培养法的,且作片法的确是一种实用、便捷且又较为可靠的检查方法。     

公共场所检验方法、报告方式及卫生标准的修订问题

公共场所人群密集、流动性大、设备及物品重复使用，极易造成污染。健康和非健康个体混杂，也会造成疾病特别是传染病的传播。公用物品既是致病微生物的载体，也是某些传染病的传播途径。公用物品是指在公共场所中专门供给客人反复使用和从业人员专门用于直接为顾客服务的各种用品、用具、设备和设施的总称。     

重组人细胞因子制品细菌内毒素的检测

为了考察细菌内毒素检测法（BET法）检测重组人细胞因子制品的细菌内毒素及其质量控制的可行性。按照2000年版《中国生物制品规程》的规定,确定L值,计算MVD,进行干扰试验,检测制品的细菌内毒素,并与家兔热原法（RPT法）进行比较。结果表明,用标示灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂,重组人干扰素α2a(IFNα2a）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）、白介素－2（IL－2）制品,最高非干扰浓度分别为稀释至31.7倍（9.5万IU／ml）,10.9倍（27.5万μg/ml）,40倍（0.25万IU/ml）。将IFNα2a和GM－CSF按规程规定稀释80位,对细菌内毒素的检测均无干扰作用,而IL－2稀释8倍对检测有抑制作用,但经40倍稀释后可消除抑制。以BET法检测上述制品的细菌内毒素和以RPT法测定家兔热原香,符合率为100％。结果提示,用BET法代替PRT法检测上述细胞因子制品的细菌内毒素及其质量控制是可行的。     

尿路感染患者尿中细菌L型培养的意义

目的通过对尿路感染患者尿标本中的细菌（普通型和L型）检测,以确定L型菌检测的临床价值。方法采用一般培养法和特殊（L型菌）培养法对临床标本检测。结果364份标本中一般培养法检出细菌112株,阳性率为30．8％,而特殊培养法共培养细菌及L型菌共162株,细菌总检出率为44．5％,其中单独检出L型菌50株。结论细菌在一定条件下可演变成L型菌,增加临床标本中L型菌的培养可明显提高尿路感染的细菌阳性检出率。     

FISH-FCM方法检测酵母-细菌二元体系中微生物数量

以废水生物处理系统和生物发酵系统出现的酵母-细菌二元体系作为研究对象,探讨了二元体系生物样品的最佳超声分散条件以及同时检测酵母和细菌数量时荧光原位杂交（FISH）-流式细胞术（FCM）技术的测量精度。染色-FCM检测表明：同时适用于混合酵母样品（酵母假菌丝）和混合细菌样品（活性污泥絮体）的最佳超声分散条件为100W、60～90s,但过强超声条件（120s）对酵母Candida tropicalis纯培养物（或细菌Escherichia coli纯培养物）的超声粉碎效果完全不同于混合酵母样品（或混合细菌样品）。在此基础上,以C．tropicalis和E．coli分别作为酵母和细菌的模式微生物,采用双探针杂交的FISH—FCM技术检测了背景微生物（C．tropicalis或Ecoll）浓度为10^7个／ml时二元体系中目标微生物（10^2～10^7个／ml）的数量。流式细胞仪能够明显区分噪音和二元体系中的酵母和细菌,因而一次进样时能够同时分析两种微生物数量,并且目标微生物浓度可以精确到10^4个／ml,此时微生物含量仅为0．1％,其中细菌浓度甚至可以精确到10^3个／ml（相应含量仅为0．01％）。然而,当二元体系中目标微生物浓度过低时（〈10^4个酵母／ml或〈10^4个细菌／ml）,背景微生物的存在会严重影响FISH—FCM技术的测量准确性。     

3M Petrifilm快速菌落总数测试片法与 食品中菌落总数检测国标方法（GB 4789.2‒2010）的比较

摘要：目的 比较3MTM PetrifilmTM快速菌落总数测试片（RAC）法与食品中菌落总数检测国标方法（GB 4789.2?2010）检测熟肉样品、人工污染熟肉样品中的菌落总数结果的一致性。方法 分别用两种方法对129份熟肉样品和166份人工污染熟肉样品进行菌落总数项目的检测,并对3MTM PetrifilmTM快速菌落测试片法与国标方法的实验结果进行配对资料t检验、线性回归分析以及对数值差值绝对值（|dlog|）汇总分析。结果 第一部分：两种方法检测熟肉样品、人工污染熟肉样品的菌落总数检测结果t=1.5704、P=0.1188,差异无统计学意义;相关系数R2值分别为0.897、0.964;|dlog|≤0.500所占百分比分别为97.7％、100.0％。第二部分：两种方法检测295份样品,t=1.1336,P=0.2586;相关系数R2=0.992;|dlog|≤0.500的结果百分率为99.0％。结论 在检测熟肉样品、人工污染熟肉样品时,3MTM PetrifilmTM快速菌落总数测试片法与国标方法检测结果的一致性较好。     

歌舞厅空气污染细菌,真菌调查与评价

在城区范围,选择普通型歌舞厅,调查厅内空气污染细菌、真菌现状,结果发现,A_11月污染细菌浓度最高（22485个／m~3）,比B（对照）高出6．5倍多,7月污染真菌浓度最高（11241个／m~3）,比B高出4．7倍;A_1各月周六、周日污染细菌、真菌浓度比周一高,比B高;是由于天气,人口密集（1～4人／m~2）,不通风,通风强度较大造成的。     

实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测肠道致病菌的比较

目的比较实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测肠道致病菌中沙门菌与志贺菌的结果并分析总结。方法对江苏盛泽医院2010年到2014年就诊的腹泻患者4 662例的粪便标本同时进行实时荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法检测,对其结果进行统计学分析,并对所有实时荧光定量PCR检测阳性标本进行常规细菌鉴定法检测,对所有结果进行分析与总结。结果实时荧光定量PCR法检测沙门菌阳性85株,阳性率为1.82%;志贺菌阳性192株,阳性率为4.12%;常规细菌鉴定法检测沙门菌阳性81株,阳性率为1.74%;志贺菌阳性184株,阳性率为3.95%,两种方法比较差异无统计学意义(P0.05)。对实时荧光定量PCR检测阳性标本进行常规细菌鉴定法检测,阳性率为100%。结论实时荧光定量PCR法检测沙门菌与志贺菌结果可靠,检测时间短,更能满足临床诊断肠道疾病的需求。     

用气溶胶法和摇床法建立铜绿假单胞菌生物膜体外模型

目的模拟体内环境,体外建立细菌生物膜模型,为进一步深入研究细菌生物膜生物学特点提供基础。方法将粘附载体置于气溶胶法和摇床法模拟体内细菌生物膜形成的微环境中,将铜绿假单胞菌株培养3d后,取出标本分别进行通过FITC—ConA染色及SYT09／PI染色,然后分别进行荧光显微镜检测及激光共聚焦检测,观察细菌生物膜的形成情况;进行电子显微镜扫描观察形成的细菌生物膜的形态特点。结果在气溶胶的微环境下,FITC—ConA染色后在荧光显微镜观察到明亮成片状的细菌生物膜;SYT09／PI染色后在激光共聚焦检测,观察到片状,层叠如积云状,棉絮样的细菌生物膜;在电子显微镜扫描观察到大量细菌成团聚集,团状丛生突出表面,具有立体结构的细菌生物膜。在摇床法的微环境下,用3种检测方法都观察到成流线状的细菌生物膜。结论运用气溶胶法、摇床法可成功建立分别模拟体内呼吸系统及循环、泌尿系统的微环境下生物膜形成模型。     

制作植物简易装片彩图演示法

鉴于初一学生第一次亲自动手制作装片难度高，既要按步骤记顺序，又要动手操作，极易出差错。为此，在讲授装片制作过程中，采用彩色图示演示法，以利见长于形象思维的初一学生。1操作过程在画好的示载玻片的图中，用不同色彩的笔按制作顺序依次绘制，并同步标号；标号示制作步骤的顺序，标号色彩则鲜明、清楚地显示所放置的物品。即：（1）在载玻片正中滴1～2滴清水（浅兰）；（2）放实验材料（绿）；（3）放盖玻片（粉）；（4）滴碘酒（黄），用纸吸水（深兰）。注：所用色彩不限，只要能鲜明地表示所加不同物品及其顺序即可。2应用效果在…     

Pb和Cd对森林土壤细菌功能多样性及群落结构的影响

重金属的毒性系数（The Toxic Factor,TF）是评价重金属潜在生态风险指数（potential ecological risk index,RI）的关键参数。为了探究基于Hakanson提出的TF值是否适用于重金属对土壤微生物的生态风险评估,以TF值为5和30的铅（Pb）和镉（Cd）构建土壤微宇宙试验,构建不同的RI水平（100、200和400）,通过Biolog-ECO板和高通量测序技术分析了Pb和Cd分别对细菌功能多样性及群落结构的影响。结果表明,对照处理（CK）的细菌丰度、功能多样性（Shannon指数,Simpson指数和McIntosh指数）和基因多样性（ACE和Chao1指数）均大于Pb、Cd污染的土壤,随着RI水平的升高,Pb和Cd污染土壤中细菌的丰度、功能多样性（Shannon指数和McIntosh指数）和基因多样性（Chao1指数和ACE指数）呈下降趋势。相同RI水平下,Pb污染土壤中细菌群落的丰度、平均颜色变化率（AWCD）、功能多样性指数、OTUs数和基因多样性指数均显著大于Cd污染（P<0.05）;6大类碳源利用率及主成分（PCA）分析表明,Pb污染土壤中细菌对糖类和羧酸的利用率均显著大于Cd污染（P<0.05）,在不同RI水平和重金属比例下,碳源利用模式而有所不同。同一RI水平下,相对于Pb污染,Cd污染土壤中变形菌门的相对丰度较为丰富,而绿弯菌门的相对丰度稀少;Pb和Cd污染土壤中慢生根瘤菌属、鞘脂单胞菌属、链霉菌属和norank_f__Roseiflexaceae等不同属细菌相对丰度表现出差异性。上述结果表明Hakanson提出的TF值并不适用于评估重金属Pb和Cd对土壤微生物的潜在生态风险。     

歌舞厅空气污染细菌、真菌调查与评价

在城区范围,选择普通型歌舞厅,调查厅内空气污染细菌、真菌现状,结果发现,A_11月污染细菌浓度最高（22485个／m³）,比B（对照）高出6．5倍多,7月污染真菌浓度最高（11241个／m³）,比B高出4．7倍;A_1各月周六、周日污染细菌、真菌浓度比周一高,比B高;是由于天气,人口密集（1～4人／m²）,不通风,通风强度较大造成的。     

混合单克隆抗体ELISA直接法和夹心法检测包虫病人循环抗原

本文对混合单克隆抗体ＥＬＩＳＡ直接法和ＥＬＩＳＡ夹心法检测包虫病人循环抗原的效果进行了比较研究。结果表明,ＥＬＩＳＡ夹心法对细粒棘球蚴囊液纯化抗原的最低检出量（１．２ｎｇ／ｍｌ）较直接法（１０ｎｇ／ｍｌ）低,但检测包虫病人循环抗原时,ＥＬＩＳＡ直接法的阳性检出率为５６．３９％（２７／４８）,ＥＬＩＳＡ夹心法为６０．４％（２９／４８）,二者无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。两法同时检测１４份猪囊尾蚴病人血清和４４份正常人血清,均未出现假阳性反应。     

煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA的比较

目的：在生物浸出中,微生物群落结构分析有着重要意义,而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA。为了解决这一问题,本实验通过比较两种较常用的DNA提取方法,煮沸裂解法和试剂盒法,寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿细菌基因组DNA的方法。方法：分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取6种浸矿菌的基因组DNA,从所提取的基因组DNA浓度、纯度、回收率和对PCR扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果;用两种方法来处理不同浓度梯度的一种菌,通过实时定量PCR来比较两种方法的灵敏性。结果：相同处理量（108个）的革兰氏阳性菌（1株）、革兰氏阴性菌（4株）、古菌（1株）经两种方法提取的基因组DNA差异较大,煮沸裂解法所得的6组基因组DNA更纯,其OD260／OD280的值更接近1．8-2．0（纯DNA的OD260／OD280在1．8—2．0之间）,前者所提DNA回收率最大可达后者的16．7倍;煮沸裂解法只需较少菌（102个）便能让实时定量PCR检测到所提DNA模板浓度,比试剂盒法灵敏。结论：两种方法提取的基因组DNA均可用于后续的PCR扩增,此外,前者提取的DNA浓度随细菌浓度增加而呈线性增大,而后者随茵浓度增大,所提DNA量增加有限,因此,在生物浸出中微生物基因组DNA的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法,为实验节约成本和时间。     

用污染指示菌评价城市水体污染的研究

选择湖南省常德市江北城区水体为代表开展本项研究。结果表明,水体中污染指示菌,总大肠菌群（ＴＣ）和粪大肠菌群（ＦＣ）密度同ＢＯＤ＿５负荷以及综合污染指数Ｐ呈高度正相关。所以,污染指示菌指标,特别是粪大肠菌群指标足综合评价城市污水,尤其是生活污水污染的一个必不可少的重要参数。对该城区水体细菌污染的评价结果是,生活污水排放愈集中的地区,细菌污染愈严重。其中护城河水的ＴＣ密度超出我国地面水Ⅲ级标准４个数量级;ＦＣ密度超过ＷＨＯ娱乐用水标准３个数量级。护城河是细菌污染最严重水体。包括滨湖公园内湖在内的接纳生活污水多或较多的水体,细菌污好也相当严重。只是远离城区的柳叮湖受污染程度较轻。     

利用ATP扩增反应与生物发光法结合检测微量微生物

摘要:【目的】腺苷酸激酶（adenylate kinase, ADK）和多聚磷酸盐激酶（polyphosphate kinase, PPK）偶联催化的ATP扩增反应结合生物发光检测法能够对微量微生物进行检测。但是PPK当中结合的内源性的ADP会产生背景干扰,影响测定。本文旨在融合表达ADK和PPK,并建立一种方便有效的内源性ADP的去除方法,降低背景,使之与传统生物发光法结合,实现高灵敏生物发光法检测微量ATP及微生物。【方法】PCR扩增得到PPK、ADK基因,插入表达载体pET28a (+)中构建重组表达质粒pET28a (+)-PPKADK,表达PPK-ADK融合蛋白。利用表面包裹聚胺醇（Polyurethane）的磁珠（magnetic beads）,通过化学反应将腺苷酸双磷酸酶（apyrase）固定于磁珠表面,制备固相腺苷酸双磷酸酶（Beads-apyrase）,用于除去与融合蛋白结合的内源性ADP,降低ATP扩增反应的背景,从而使之与生物发光反应相结合,测定微量外源ATP及细菌菌落数。【结果】表达的融合蛋白具有PPK和ADK的活性,利用Beads-apyrase可以方便而有效的去除内源性ADP,显著地降低反应背景,从而实现了利用ATP扩增反应与传统生物发光反应结合,测定了小于1 fmol的外源微量ATP,使生物发光法检测ATP及微生物的灵敏度提高至少100倍。【结论】利用Beads-apyrase能够方便、有效地降低PPK-ADK中的ADP背景,从而使PPK-ADK催化的ATP扩增反应能够与传统生物发光法相结合,极大地提高了生物发光法的灵敏度。     

微生物发酵法制备乳糖酶

乳糖酶是一种被广泛应用的酶。微生物发酵法生产乳糖酶具有周期短、产量高、造价低等优势。本文对近年来微生物（细菌、酵母菌、霉菌）发酵法生产乳糖酶的研究进展进行了综述。     

一种观察小单孢菌的制片方法

一种观察小单孢菌的制片方法薛景珍,沈音（沈阳农业大学微生物教研室,沈阳１１０１６１）小单孢菌在放线菌中是菌丝纤细、大部分无气生菌丝,菌落湿润的一群。用一般印片法制片,往往印不上或印上很少的孢子和菌丝片断;用涂抹法,虽然可以涂上较多量的孢子和菌丝,但菌...     

纸片法检测大肠菌群结果判定的实验研究

纸片法检测大肠菌群是用灭菌滤纸吸收选择性培养基,细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定生长繁殖,大肠菌群在生长发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC（氯化三苯四氮唑）还原成不可逆的甲替产生红色色素,即大肠菌群在纸片上呈红色菌落,菌落周围产生黄圈是大肠菌群分解乳糖产酸使指示剂变色所致。纸片法以它经济、方便、快捷等优点给现场监测带来了极大便利,不但节省了大量人力、物力,